苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因crylA的克隆及特征分析

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillus tburingiensis subsp sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据crylA类基因序列设计特异引物，应用PCR技术从该茁株中扩增得到一大小约为3．6kL的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在ABI PRISM377自动测序仪上对其5’及3’端进行部分测字，结果表明其核苷酸序列与crylA基因高度同源。     

苏云金芽孢杆菌8010蛋白酶基因保守区克隆及序列分析

通过设计蛋白酶基因引物,对苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）库斯塔克亚种菌株8010蛋白酶基因进行克隆,获得了6个蛋白酶基因片段,即中性蛋白酶A、色氨酸合成酶β链、色氨酸合成酶α链、碱性蛋白酶A、磷酸化水解酶和糖原磷酸化酶基因,以及1个未知功能的DNA片段（可能是编码蜡质芽孢杆菌组特有蛋白的基因）.     

苏云金芽孢杆菌8010蛋白酶基因保守区克隆及序列分析

通过设计蛋白酶基因引物,对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)库斯塔克亚种菌株8010蛋白酶基因进行克隆,获得了6个蛋白酶基因片段,即中性蛋白酶A、色氨酸合成酶β链、色氨酸合成酶α链、碱性蛋白酶A、磷酸化水解酶和糖原磷酸化酶基因,以及1个未知功能的DNA片段(可能是编码蜡质芽孢杆菌组特有蛋白的基因).     

苏云金芽孢杆菌新疆分离株cry3基因的克隆和序列分析

从新疆天山北坡土壤及昆虫上分离到的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）菌株对鞘翅目害虫具有高毒力,其总DNA约为15 kb,以此为模板,并设计特异引物,扩增出800 bp和550 bp DNA片段,将回收的片段与pBS-T质粒连接,转化大肠杆菌（Escherichia coli）,用蓝白斑法筛选,将阳性克隆子（1号-5,700 bp左右、G4号-3,500 bp左右、G4号-4,720 bp左右）测序,与GenBank中已知的序列进行比对,结果表明1号-5与cry3基因家族的杀虫蛋白基因序列同源性可达84%~100%。     

苏云金芽孢杆菌肠毒素基因entFM的定位与序列分析

为明确Bt WB9肠毒素基因entFM在基因组中的位置及该基因的特性,以entFM基因片段制备探针,通过Southern杂交,分别对染色体DNA和质粒DNA进行基因杂交定位;以PCR方法克隆了BtWB9、1072、TS16及Bc6A1 entFM基因ORF序列,并运用生物信息学工具进行了核苷酸序列与推导氨基酸序列分析.基因定位结果表明,Bt WB9的entFM基因位于染色体上;基因序列分析表明,WB9entFM基因的ORF序列共由1281个核苷酸组成,可编码426个氨基酸.由基因序列推导的氨基酸序列分析显示,WB9、TS16、1072与Be Cx5之间主要差异在于Be Cx5的EntFM氨基酸序列在39～42位置多出QTQT(谷氨酰胺-苏氨酸-谷氨酰胺-苏氨酸)4个氨基酸,在96～99位置还有SWDK4个氨基酸的差异,而其相似性都在92%以上.     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1A的克隆及特征分析

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillus thuringiensis subsp.sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力.根据cry1A类基因序列设计特异引物,应用PCR技术从该菌株中扩增得到一大小约为3.6kb的DNA片段.将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α.在ABI PRISM377自动测序仪上对其5′及3′端进行部分测序,结果表明其核苷酸序列与cry1A基因高度同源.     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆及诱导表达

从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)T04A001中提取基因组DNA,通过PCR的方法克隆了几丁质酶chiAC基因(GenBank登录号为EF427670).置换chiAC基因的启动子为T7启动子时,chiAC基因能在IPTG诱导下在大肠杆菌中大量表达,并产生大小约70 kDa的表达产物.     

苏云金芽孢杆菌的生物活性物质及其蛋白基因

苏云金芽孢杆菌 (Bt)研究的热点正逐步转向新资源的收集和开发 .本文就其杀虫、抑菌、抑癌细胞等 6种主要生物活性物质、蛋白及其编码基因作一回顾与展望     

苏云金芽孢杆菌的生物活性物质及其蛋白基因

苏云金芽孢杆菌（Bt)研究的热点正逐步转向新资源的收集和开发，本文就其杀虫，抑菌、抑癌细胞等6种主要生物活性物质，蛋白及其编码基因作一回顾与展望。     

苏云金芽胞杆菌酰基高丝氨酸内酯酶基因的克隆及分析

利用pMD18-T克隆载体从苏云金芽胞杆菌菌株WB12中克隆了酰基高丝氨酸内酯酶基因(AHL-lactonase,aiiA).测序结果表明,该基因(GenBank登录号为DQ000642)由753个碱基组成,编码含有250个氨基酸残基的蛋白质.推测该蛋白质分子质量为28 ku,等电点为4.2,不含信号肽序列.利用DNAMAN软件构建同源关系树.结果表明,该蛋白与已报道具有减弱欧文氏菌胡萝卜亚种致病力的11个A iiA蛋白酶氨基酸序列总相似性为81.2%,并含有相同的氨基酸序列保守区.核苷酸序列的BLAST分析结果表明,与之同源性较高的基因均为蜡质芽孢杆菌组aiiA基因(86%-99%).     

苏云金芽胞杆菌ICP基因工程菌的研究进展

综述了近年来国内外利用杀虫细菌苏云金杆菌ＩＣＰ基因构建工程菌，包括植物根际定居菌、植物疫苗、重组杀蚊蓝细菌和杆状病毒Ｂｔ重组菌等研究的历程及现状、成功及存在问题，文中亦讨论了该研究领域的应用前景。     

苏云金芽孢杆菌cry1Ea基因的克隆及 生物信息学分析

不同来源的苏云金芽孢杆菌能产生多种多样的晶体(Cry)蛋白.基于这个特性,人们可以通过基因工程的手段向工程菌中转入编码多种Cry毒素的基因来控制虫害.通过DNA重组技术,从BtHZM2菌株中克隆出了cry1Ea基因,对其进行了生物信息学分析,同源比对结果表明.cry1Ea8基因的核苷酸序列与已知cry1Ea的同源性为99.77%～99.91%.对应的氨基酸序列同源性为99.49%～99.74%.对cry1Ea8基因的分析还揭示出了cry1Ea8及其编码蛋白的一些生物和理化性质.结构域预测表明,Cry1Ea8由3个结构域组成,其中N-末端螺旋状结构域与膜插入与孔隙形成有关,而第二和第三个结构域与受体的结合有关.该研究为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了新的基因来源.     

苏云金芽孢杆菌外孢囊蛋白基因敲除载体的构建

以苏云金芽孢杆菌(Bt)库斯塔克亚种(subsp.kurstaki) 8010为研究材料,通过PCR技术获得Bt8010的外孢囊蛋白基因上下游序列,以含有卡那基因的pDG780质粒为中间载体,通过酶切、连接和PCR,构建含外孢囊蛋白基因上游序列、卡那基因、外孢囊蛋白基因下游序列的基因敲除载体pRN5101UKD,为后续...     

苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因导入大豆后代的筛选

采用液滴法和注射法，将带有苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因的质粒ＤＮＡ导入自花授粉后的大豆品种鲁豆４号和８６１３８７—２。提取Ｄ１代大豆叶片的ＤＮＡ，与苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因进行了斑点杂交，从Ｄ１代４４０个植株中，选出７个杂交阳性后代，表明苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因已整合于大豆基因组中。本文还对外源ＤＮＡ导入后代筛选中存在的问题进行了讨论。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆及植物表达载体构建

N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)是革兰氏阴性细菌致病过程中的关键信号分子,芽孢杆菌中广泛存在的aiiA基因编码AHL-Lactonase能够水解信号分子AHLs。利用PCR方法从苏云金芽孢杆菌中克隆了aiiA基因,序列分析表明该基因由753个碱基组成,编码含有250个氨基酸残基的蛋白质,核苷酸序列与已报道aiiA的同源性为89%～97%。将该基因连接到植物表达载体pCAMBIA1301中,成功构建了aiiA基因的植物表达载体pCAM-aiiA,为进一步通过转基因技术研究该基因的功能奠定了基础。     

苏云金芽胞杆菌ICP基因工程菌的研究进展

综述了近年来国内外利用杀虫细菌苏云金杆菌ＩＣＰ基因构建工程菌，包括植物根际定居菌、植物疫苗、重组杀蚊蓝细菌和杆状病毒Ｂｔ重组菌等研究的历程及现状、成功的范例及存在问题．文中亦讨论了该研究领域的应用前景．     

苏云金芽胞杆菌cry基因研究进展

从cry基因的分类、鉴定、遗传特性以及应用概况等4个方面综述了苏云金芽胞杆菌cry基因的研究进展,并对cry基因的研究进行展望。     

苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因定位研究进展

苏云金芽孢杆菌是目前应用最广泛的杀虫微生物,其活性成分主要是杀虫晶体蛋白、营养期杀虫蛋白和几丁质酶等,本文对编码这些蛋白的基因的定位作一综述,有助于进一步研究基因结构、功能、表达和调控.     

苏云金芽孢杆菌cry1Da5基因的克隆与表达

采用5对引物组合经2轮PCR扩增对苏云金芽孢杆菌QL75-2菌株中的cry基因进行鉴定,克隆得到1个cry1Da型基因片段。通过设计全长引物扩增得到该cry基因的全长序列,转入原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,最后对表达蛋白进行生物活性分析。序列分析结果表明,该cry1Da基因全长3 495 bp,推测其编码1 164个氨基酸,组成分子量约132.01 ku的蛋白质。该预测蛋白质与已知的Cry1Da3蛋白质具有最高的序列同源性(99.7%),该基因被国际杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Da5。生物活性分析结果表明,Cry1Da5蛋白质对鳞翅目的甜菜夜蛾幼虫具有较强的杀虫活性,其LC₅₀为21.47μg/mL,而对鳞翅目的棉铃虫幼虫无杀虫活性。因此,cry1Da5基因可作为一个新的cry基因资源在甜菜夜蛾的生物防治中应用。