甘薯胚性悬浮细胞遗传转化的研究

 以甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞为材料 ,以A2 0 8SE(pROA93)为供体菌株 ,对甘薯胚性悬浮细胞遗传转化的基本条件进行了研究。结果表明 ,对胚性悬浮细胞预培养 1～ 3d有利于转化 ,适宜的共培养时间为 4～ 5d ,适宜的Kan浓度为 5 0～ 75mg·L-1(悬浮培养阶段 )和 10 0mg·L-1(增殖培养阶段和植株再生阶段 ) ,适宜的Carb浓度为 10 0mg·L-1。获得了经GUS检测及PCR检测的转基因植株。     

水稻胚性悬浮细胞系建立的细胞学研究

胚性悬浮细胞是禾谷类作物原生质体培养的理想材料。本文研究了水稻广亲和中粳品系02428胚性悬浮细胞系建立过程中的细胞学动态变化,结果表明:建成的胚性悬浮细胞系(后期悬浮细胞系)和前、中期悬浮细胞系相比较,细胞团内细胞结合紧凑,细胞壁簿,细胞质浓厚,颗粒状内含物丰富,细胞活力强,质膜凹陷较浅,较平整,质膜强度高。本研究结果从细胞学角度初步探讨了水稻胚性悬浮细胞系适应于原生质体培养的机理。     

徐薯55-2的胚性细胞悬浮培养

为优化胚性愈伤的培养条件,建立甘薯高效胚性悬浮培养试验操作体系,以徐薯55-2、徐薯18、徐薯22、徐薯28、徐薯29和徐紫薯5号等6个甘薯品种(系)茎尖诱导的胚性愈伤组织为材料,通过比较不同品种的胚性愈伤组织诱导率、愈伤状态等的差异,筛选出愈伤诱导率高,愈伤状态好,体胚诱导率及成苗率高的品种徐薯55-2。通过测定细胞沉降体积(SCV)研究徐薯55-2胚性细胞悬浮系的接种密度、接种量、摇床转速对胚性悬浮细胞生长的影响。结果表明,徐薯55-2胚性细胞悬浮系适宜培养条件为接种密度1∶25,接种量1.4mL,摇床转速100r/min。     

香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除

[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法。[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250~500μm的不锈钢筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进行实时观测。[结果]运用孔径在250~500μm的不锈钢筛网能够有效去除悬浮细胞系中的褐化坏死组织和分生组织小球,但如果在悬浮细胞系诱导后3 d立即进行去除,则易使之后胚性细胞的增殖变得困难;如果在悬浮细胞系诱导后14 d左右去除,则褐化坏死组织释放的酚类物质很容易损伤并杀死正在增殖的胚性细胞。悬浮细胞系诱发后7 d是一个比较恰当的过滤去除时间点。[结论]在培养的过程中,将悬浮细胞系定期放置在倒置显微镜下进行观察,用移液器能将液泡化的细胞和胚去除。在操作前,需将倒置显微镜放置在超净工作台内,用紫外线长时间照射进行表面灭菌。这样即可以将悬浮细胞系中的非胚性成分过滤去除,又能预防感染。     

不同激素对甘薯胚性细胞悬浮系植株再生的影响

以甘薯品种济薯21和徐薯18的茎尖为材料,采用不同激素配比,对甘薯胚性愈伤组织的诱导及高效植株再生进行了研究。结果表明,济薯21和徐薯18较适宜的茎尖胚性愈伤组织诱导培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+2.2 g/L KC l+2.0 mg/L 2,4-D和MS+2.0 mg/L 2,4-D;济薯21胚性细胞团在MS+1.0 mg/L ABA+1.0 mg/L GA3培养基上植株再生率最高,达到96%,徐薯18胚性细胞团在MS+1.0 mg/LABA培养基上的植株再生率最高,达到91%。     

小麦幼胚胚性愈伤组织诱导和再分化研究

以4个小麦品种的幼胚为外植体,通过脱分化和再分化培养,研究了影响小麦幼胚愈伤组织诱导和再分化的因素。结果表明:小麦幼胚胚性愈伤组织的诱导和再分化主要受基因型的限制,同时也受培养基组成的影响;培养基中添加0.5mg/L的ABA不利于胚性愈伤组织的诱导和分化;胚性愈伤组织诱导率和幼苗分化率之间呈极显著正相关,提高胚性愈伤组织的诱导率和形成量是建立小麦植株再生体系的关键。     

疣粒野生稻胚性愈伤组织诱导及分化成苗研究

 疣粒野生稻是优异的稻种资源。目前用常规方法及分子标记技术利用其有利基因还非常困难 ,体细胞杂交技术是一条比较可行的途径 ,但疣粒野生稻是一种典型的难培养植物 ,体细胞杂交的前期研究非常重要。本研究以疣粒野生稻的成熟种子为外植体 ,采用不同的培养基诱导愈伤组织 ,并对愈伤组织的状态进行改造 ,结果表明 ,NB2 培养基最适宜于诱导愈伤 ,添加 0 .1% PG及 0 .2 m g/ L KT有利于愈伤状态的改造 ;愈伤分化时采用 NBK2 培养基效果好 ,绿苗分化率高 ;采用 A2 及 NB2 液体培养基振荡培养 ,获得了理想的疣粒野生稻胚性细胞悬浮系     

巴东红三叶胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶(Trifolium pratense)野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在MB-1至MB-9的固体培养基上诱导愈伤组织,筛选出最佳培养基MB-9.愈伤组织形成以后,均经MB-9固体培养基上继代培养3～4次后,获得胚性愈伤组织,然后转至改良的MB-9液体培养基中,经强化培养两个月后,获得胚性细胞悬浮系.结果表明,缩短换液时间,每隔3～4d换液1次,可加快胚性细胞悬浮系的建立.     

多花黑麦草胚性悬浮系的建立及原生质培养

以多花原麦草（Ｌｏｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ Ｌａｍ．）幼穗为外植诱导愈伤组织,经高有机态氮培养基改造得到易碎型胚性愈伤组织,在１／２ＡＡ培养＋１／２ＭＳＤＬ培养基中得到了生长迅速、分散的胚性悬浮系。分离原生质体经培养后得到了再生白化苗。     

农杆菌介导转基因小麦植株的获得和检测

利用建立的遗传转化体系,以携带Npt II筛选标记基因和胰蛋白酶抑制剂基因的LBA4404/pRok2(农杆菌/质粒)对山农995604小麦愈伤组织进行遗传转化,获得了三株含有胰蛋白酶抑制剂基因的转基因小麦。通过PCR扩增和Southern杂交检测,证明了外源基因已整合到了三株转基因小麦基因组中。     

不同浓度NAA对甘薯茎尖诱导植株再生的影响

[目的]研究不同浓度NAA对甘薯茎尖诱导植株再生的影响。[方法]以甘薯品种烟薯25号、烟薯26号和烟紫薯3号的茎尖为材料,采用不同浓度NAA处理,对甘薯茎尖组织的诱导培养及高效植株再生进行了研究。[结果]烟薯25号较适宜的茎尖诱导培养基为1.0 mg/L NAA+MS,植株再生率为91%;烟薯26号和烟紫薯3号较适宜的茎尖诱导培养基为1.5 mg/L NAA+MS,植株再生率分别为88%和80%。[结论]该研究可为今后开展规模化甘薯脱毒苗生产提供基础资料。     

海岛棉胚性细胞团的原生质体游离和培养

以海岛棉无菌苗下胚轴为外植体诱导产生愈伤组织，挑选胚性愈伤组织建立悬浮培养胚性细胞系。用含有纤维素酶、半纤维素酶和离析酶的混合酶液从新海３号、新海７号和２８２这３个品种的胚性细胞悬浮培养物中游离出原生质体。原生质体用液体浅层法培养仅见再生细胞的１次分裂；用含有低融点琼脂糖的ＫＭ８Ｐ培养基进行琼脂糖珠悬浮法培养，原生质体再生细胞经几次分裂后产生再生细胞团     

微量法快速提取甘薯叶DNA条件的优化

[目的]筛选出一种简便快捷的DNA微量提取方法。[方法]从不同处理甘薯植株的叶片中提取DNA样品并用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法检测其纯度和质量。[结果]正常光照下甘薯植株的DNA产量最高,48h黑暗处理的次之,24h黑暗处理的最低。在正常光照下和48h黑暗处理中项芽的DNA产量都明显高于叶片;在24h黑暗处理中,顶芽与叶片的DNA产量比较接近。叶片DNA的纯度高于顶芽,正常光照下和24h黑暗处理中DNA的纯度高于48h黑暗处理中的。DNA电泳图谱表明,正常光照下叶片DNA的电泳条带一般比顶芽的好。48h黑暗处理中顶芽和叶片DNA的电泳条带没有很大差异。[结论]该试验为大批量实生苗DNA的快速提取和多种分子生物学研究奠定了实践基础。     

红豆杉细胞悬浮培养系统激素优化的研究

采用均匀设计安排预试验以确定进一步优化研究的范围,在此基础上采用响应面一阶模型的设计方法,获得关于悬浮培养的红豆杉细胞生长与激素浓度之间的回归方程,表明ＮＡＡ、６－ＢＡ是影响细胞生长的关键因素,２,４－Ｄ、ＮＡＡ、６－ＢＡ以０．２３：１：０．６２比例在现有配方基础上递增有利于接近最优目标。     

真菌诱导物对丹参毛状根和转化细胞过氧化物酶活力的影响

研究了大丽轮枝菌（Verticillium dahiliae Kleb.)激 发子V44和酵母提取物分别诱导丹参（Salvia miltiorrhiza)毛状根和丹参转化细胞后，过氧化物酶活力的变化，结果表明，诱导后过 氧化物酶活力显著提高，丹参毛状根酶活力变化大于丹参转化细胞，两种植物材料过氧化物酶活力变化与诱导浓度和诱导时间有关，实验提示，丹参毛状根可能对诱导物刺激具有更好的 抗性，且有利于次生代谢产物的积累。     

一种快速提取甘薯基因组DNA方案的建立

建立了一种小量快速提取甘薯基因组DNA的方法。用该法以甘薯幼叶为实验材料,用小量快速法提取甘薯基因组DNA。提取的DNA经酶切、琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明DNA质量较好,所提取的DNA可用于RAPD、AFLP等技术。此方法具有提取速度快、利于规模化提取、DNA质量好和经济实用等优点,为甘薯及其它相关植物基因组DNA的提取提供了一种快速、简便的途径。     

原位吸附提高葡萄悬浮培养中反式白藜芦醇产量的研究

[目的]研究原位吸附对葡萄悬浮培养体系生长和生产的影响。[方法]考察5种常用吸附剂对葡萄细胞生长及芪类和花色苷生产的影响。并对筛选出的HP2MGL和XAD-7的最佳添加浓度进行了研究。[结果]在添加浓度为100 g/L的XAD-7和HP2MGL的处理组中反式白藜芦醇的产量最高,在第7天达到251.4和258.8 mg/L,将白藜芦醇苷和白藜芦醇的产量换算成总芪产量（mmol/L）,结果显示,添加XAD-7和HP2MGL后,在第7天芪类产量达到最大,分别为1.4和1.5 mmol/L,比对照处理的芪类产量高27%。在筛选出XAD-7和HP2MGL后,又考察了添加不同浓度XAD-7和HP2MGL对葡萄细胞生长、花青素和芪类生产的影响。结果表明最佳优化结果为添加200 g/L的HP2MGL,此时,体系中反式白藜芦醇在第7天的产量为568 mg/L。[结论]200 g/L HP2MGL大孔树脂可以显著促进葡萄悬浮培养细胞体系中反式白藜芦醇产量。     

大鼠口服五氯柳胺混悬剂的急性毒性研究

为了对五氯柳胺混悬剂的安全性进行评价,采用简化寇氏法进行了大鼠的急性毒性研究。首先通过预试验的最小致死剂量(LD100)和最大耐受剂量(LD0)确定给药剂量及试验分组。灌胃给药,观察7 d,记录死亡数,计算LD50及95%的置信区间。结果表明,五氯柳胺混悬剂对大鼠的急性毒性LD50为3.333g/kg,95%的置信区间为3.084 6~3.600 8 g/kg。表明如按照化学药物剂量分级,五氯柳胺混悬剂可认定为低毒物质。     

主要营养成分对甘蔗叶悬浮细胞生长影响的研究

研究了MS培养基的主要营养成分，如不同初始磷酸盐浓度，不同氮源种类，不同氮源总量，不同糖种类及不同初始蔗糖质量浓度对甘蔗叶悬浮细胞生长的影响。结果表明：在MS基本培养其中，当初始磷酸盐浓度为1.25mmol/L，氮源为NH4NO3 KNO3，且总量为30mmol/L，碳源为蔗糖，初始蔗糖质量浓度为30g/L时，甘蔗叶悬浮细胞的生长最佳。