抑制稗草生长的木霉菌REMI转化子构建与功能初探

创制新的木霉菌突变株,为筛选新的抑草类化合物奠定基础。通过REMI插入突变技术,以Trichoderma atrovirideT23为出发菌,进行了REMI转化子构建。对得到的转化子进行了PCR检测,分别利用抗潮霉素和氨苄青霉素基因为引物进行特异性扩增,并对发酵产物细分为分生孢子、超声波PBS法破碎孢子和发酵液,分别对稗草生长的生物活性进行测试。获得了18个转化子,通过继代培养和PCR扩增,证明线性pV2质粒DNA已成功插入木霉菌基因组。从REMI创制的木霉菌突变株库中,筛选出8株有抑草活性转化子(TaA2、TaB3T、aB7、TaE2、TaE8T、aH8、TaJ6和TaJ9),其发酵液具有抑制稗草的活性,并对水稻生长安全。经测试发酵产物对稗草生长的生物活性,获得了具有抑草活性及稳定性均理想的转化子TaB3。REMI方法所创造的转化子可较高效地筛选出具有抑草功能的突变体。     

高产纤维素酶木霉REMI突变株的构建与筛选

利用限制性内切酶介导的基因整合技术(REMI)转化T.koningii CICC 40144,共获得23个稳定的突变株。PCR检测结果表明质粒pV2已成功导入突变株中。此外,从已获得的木霉REMI突变株(178个T.atroviride T23的突变株、64个T.koningii T30的突变株和23个T.koningii CICC 40144的突变株)中筛选具有高纤维素酶活性的突变株,其中明显高于出发菌的菌株10余株(TK-2R-3、TK-2R-9、TK-2R-11、TK-2R-14、T30-B3、T30-C7、T23-A2H等)。研究发现出发菌纤维素酶活越高,其突变株纤维素酶活提高幅度越小。筛选获得了1株高产纤维素酶木霉突变株TK-2R-14,其CX酶活达37.6 U·mL-1,比出发菌提高8.05%,FPA酶活达16.9 U·mL-1,比出发菌提高19.01%。     

木霉菌及其REMI突变株与油菜联合吸附镉污染土壤研究

研究从木霉菌及其REMI(限制性内切酶介导的基因整合)突变株中,筛选对重金属镉具有较高耐受性和吸附能力的菌株,将其处理油菜品种沪油20,分析油菜与木霉菌联合吸收土壤中镉的效应。测量在镉胁迫条件下,不同木霉菌株与沪油20组合在株高、干重、相对生物量及镉净化率的变化。结果表明:在没有镉处理土壤条件下,野生菌T23可明显促进沪油20的生长,而在土壤有镉的胁迫条件下,突变株P6、H6可明显提高沪油20对土壤镉的净化率。     

培养基成分对木霉菌合成木聚糖酶的影响

木低聚糖可以从木质纤维的有控酶降解反应获得 .该文采用培养木霉菌 ,使其在最佳条件下比较专一性地合成木聚糖酶 ,这种最佳条件包括培养基成分的探索和培养条件的控制两方面 .期望用这种木聚糖酶降解木质纤维原料时 ,能尽可能多地得到木低聚糖 ,而较少出现木单糖 .首先就碳源、氮源、碳氮比等因素对木聚糖酶活性的影响进行了研究 .结果表明 ,以杨木粗木聚糖为碳源 ,以酵母浸膏为氮源 ,碳源浓度控制在 7g L左右 ,碳氮比在 7 8以上 ,所产生的木聚糖酶活性较高 ,且木聚糖酶与纤维素酶酶活的比值较高 ,即所产酶的选择性较好     

番茄灰霉病拮抗木霉菌的筛选及效果评价

利用57株木霉菌株对番茄灰霉菌(Botrytis cineren)进行室内抑菌效果测定和小区防病试验。结果表明:①木霉菌菌株对灰霉菌的作用机制主要表现在较强的重寄生作用,其释放的代谢产物消解灰霉菌菌丝。②其中有的木霉菌菌株的分生孢子释放的代谢产物能够抑制灰霉菌孢子萌发,有的能够刺激灰霉菌孢子萌发,说明各个木霉菌菌株的代谢产物不尽相同。③两年的小区防治番茄灰霉病试验,有4株木霉菌株的平均防治效果在60%以上,其菌株具有生长速度快、产孢早及产孢量大等特点。     

木霉菌REMI突变菌株在降解敌敌畏中的作用

本研究对木霉菌T30野生株和限制性内切酶介导的DNA整合技术(REMI)构建的突变株进行降解敌敌畏能力和最佳条件的研究。结果表明,野生株和几个REMI突变株均能降解有机磷农药敌敌畏,但以突变株TK-3降解活性最高,其降解效率达98％。TK-3突变株降解有机磷农药效率取决于葡萄糖剂量、敌敌畏初始浓度、初始pH等。突变株降解敌敌畏的葡萄糖最佳浓度为1 000 μg/mL,最适pH为7.0,敌敌畏浓度500 μg/mL。敌敌畏浓度超过1 000 μg/mL则会抑制木霉菌降解能力。     

抗逆性木霉菌株的快速筛选方法

为了高效筛选耐受高温胁迫(36℃),低温胁迫(14℃),盐胁迫(1mol/L NaCl)的木霉菌株,采用12孔板结合菌落面积自动扫描仪,对8种(24株)木霉菌在上述逆境因子下的反应差异进行测定,构建逆境胁迫下优良菌株快速筛选和评价方法。通过相关分析表明,12孔板中菌落直径与相应菌株在9cm平板上的菌落直径呈正相关(P0.05);通过线性回归分析得到,平板上菌落直径(Y)和12孔板中菌落直径(X)的线性回归方程分别为:Y=3.353 X+0.564,(36℃);Y=3.980 X-0.166,(14℃);Y=3.537 X+0.422,(1mol/L NaCl)。与传统筛选方法相比,快速筛选方法可以有效提高筛选效率并减少耗材。本研究关于木霉菌多孔板高效筛选抗逆菌株的技术对于今后科学利用木霉菌资源提供了重要依据和方法。     

不同培养条件对油茶根际解磷菌6-Y-09溶磷效果的影响

研究了不同碳源(葡萄糖、果糖、可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖和乳糖)、氮源(硝酸钾、硫酸铵、尿素和硝酸铵)、C/N(40∶1、20∶1、8∶1)、p H值(5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)及温度(24、26、28、30、32、34、36℃)对油茶根际解磷菌6-Y-09溶磷能力的影响。结果表明:以葡萄糖为唯一碳源时解磷菌6-Y-09表现出最强的解磷效果,溶磷量达201.51 mg/L;以尿素为唯一氮源时,解磷菌6-Y-09表现出最强的解磷效果,溶磷量达215.43 mg/L;解磷菌6-Y-09最佳C/N为20∶1,最佳p H值为7.0~7.5;另外,解磷菌6-Y-09在28~30℃时表现出最强的解磷效果。     

不同碳氮源对解磷菌K_3溶磷效果的影响

以磷酸盐生长培养基作为液体培养基,研究了不同碳源(可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖、乳糖、D-半乳糖、果糖和葡萄糖)、氮源(硫酸铵、尿素、硝酸铵和硝酸钾)及C/N(40∶1、20∶1和8∶1)对解磷菌K3溶解磷酸三钙的影响。结果表明:以葡萄糖为唯一碳源时解磷菌K3表现出最强的解磷效果,溶磷量达653.00μg.mL-1;可溶性淀粉为碳源时的解磷效果最差,溶磷量仅为4.83μg.mL-1。以NO3-为唯一氮源时,解磷菌K3的溶磷量仅为14.3μg.mL-1;酰胺态氮源时其溶磷量增加到460.0μg.mL-1;NH4+是解磷菌K3的最佳氮源,其解磷量为单一NO3-源的37倍。K3的溶磷量随着培养基中C/N的减小而增加,最佳C/N为8∶1。表明添加可溶性磷抑制了解磷菌K3的溶磷能力。     

生防木霉菌的分离和筛选

通过生长速率法和平板对峙法的复合筛选体系,研究木霉菌株对棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum(Schl),f.sp.cucumerinum Owen)和马铃薯枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schlecht)3种病原菌的抑菌效果.结果表明:木霉菌株198-2b-2在第七天对棉花立枯病菌、黄瓜枯萎病菌和马铃薯枯萎病菌的抑菌率分别达62.2％、62.5％和67.6％;木霉菌株198-4a-1在第七天对3种供试病原菌的抑菌率分别达62.2％、60.9％和66.2％.说明木霉菌株198-2b-2和198-4a-1的抑菌效果较好,生防潜力较大,可用于木霉生防作用的进一步研究.     

Construction of engineering Trichoderma strains and their characteristics against tomato gray mold

The transformed Trichoderma strains Ttrm31, Ttrm34 and Ttrm55 were obtained from Trichoderma wild strain T21 mutated by REMI technique for more effective biocontrol of tomato gray mold (Botrytis cinerea) with Trichoderma agent. Those transformants appeared much better in biocontrol activity in vitro or in vivo against tomato gray mold were better than that of wild strain T21. The main results were as follow: The transformed Trichoderma strains were detected in their genetic …     

双功能木霉突变菌株的筛选和功能分析

研究从木霉菌REMI突变株中筛选到16株对氰化物具有明显降解活性,将其与5种常见病原菌对峙培养,得到7株拮抗性较高的突变株。对这7株转化子进行盆栽试验表明:多数供试转化子对黄瓜幼苗枯萎病具有明显的防效,其中转化子TkA8的防治效果最好,达到了73.5%。同时研究发现TkA8处理黄瓜幼苗可诱导防御反应相关酶系PAL、POD活性明显增加,分别为对照的3.21和4.25倍。因此TkA8是一种具有防病和生物修复氰化物污染的较理想的多功能木霉菌株。     

哈茨木霉H-13液体发酵产几丁质酶的条件

文中以产几丁质酶的哈茨木霉H-13为实验菌株,在相同基本培养基上,采用每次同一浓度不同碳源,同一碳源不同氮源浓度;相同浓度碳源和氮源,不同pH、温度对木霉产几丁质酶能力的影响,筛选出产几丁质酶的最佳因子,提高木霉产几丁质酶发酵的效果,促进该项发酵产品的产业化。     

Screening and identification of mutants of Magnaporthe grisea by REMI

The plasmid pUCATPH was used to establish a transformation system in wild-type isolate M131 of Magnaporthe grisea. Six hundred and thirty-nine transformants were obtained by restriction enzyme-mediated integration (REMI) with hygromycin B (hyg B) resistance as a tag. Morphological analysis of two of the REMI mutants confirmed that they produced little melanin under black light and continued for three generations. Pathogenicity identification of six mutants screened proved that they made pathogenicity changes on three sets of differential varieties with different resistance genes. Rep-PCR analyses showed that two morphological mutants and two pathogenicity mutants differed from wild-type isolate M131 at the molecular level. RFLP analyses were performed to study the four mutants at the molecular level and the integration sites of the plasmid DNA. The results showed that the plasmid was inserted into all four mutants and that the insertion sites were random. Translated from Journal of Yangzhou University (Agricultural and Life Science Edition), 2006, 27(2): 91–94 [译自: 扬州大学学报]     

一株解磷真菌的解磷能力及其生长曲线研究

[目的]研究真菌f2的解磷能力及其生长曲线。[方法]从进口肥料中筛选出青霉属真菌f2,分别采用以Ca3(PO4)2、卵磷脂为唯一磷源的液体培养基接种真菌f2,在振荡培养12、24、36、48、60、72、84、108、120、132 h时测定培养液的pH值、速效磷含量、菌丝重和真菌所吸收的磷含量。[结果]随着培养时间的延长,培养液pH值逐渐降低,菌株的溶磷量逐渐增加,菌丝重增加,当培养时间为108 h时,培养液pH值最低,菌丝重最重,速效磷含量最大。培养液pH值与菌丝重、菌株的溶磷量均呈极显著负相关(P<0.01)。真菌f2解无机磷的能力强于解有机磷的能力。[结论]在振荡培养108 h时,真菌f2的解磷效果最佳。     

高产纤维素酶木霉菌株的筛选

以前期筛选获得的20株木霉菌株为试验对象,通过刚果红羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基筛选出11株产纤维素酶能力较好的菌株,对其进行酶活性检测,发现菌株SS003产生的纤维素酶活性最高,并研究了温度和pH对该菌株所产的纤维素粗酶活性的影响。结果表明,SS003产生的纤维素酶最适反应温度为55~60℃,最适pH为3.0。     

绿色木霉合成纤维素酶部分培养条件的优化

[目的]确定绿色木霉ZJ株产纤维素酶的最佳诱导时间和诱导物,为其实际应用提供条件。[方法]接种绿色木霉ZJ株7 d内,每天取培养物样品,采用3,5-二硝基水杨酸法检测产酶量。将绿色木霉ZJ株接种添加了不同碳源或氮源的基础培养基中,观察绿色木霉的生长情况,测定菌丝重量,检测不同培养时间的培养物中CMCase酶的产量。[结果]绿色木霉ZJ株的最适培养时间为72～96 h;绿色木霉在以单糖、双糖为碳源的培养基中均能迅速生长,CMCase酶产量在3～4 d时达到高峰,以纤维素粉的诱导效果最佳;以硫酸铵与酵母膏组成的复合氮源最适合绿色木酶ZJ菌丝的生长,产酶活力最高。[结论]接种后3～4 d收获绿色木霉ZJ株培养物可获得最大产酶量;以纤维素粉作为碳源,以硫酸铵与酵母膏组成的复合氮源为氮源,绿色木霉的产酶活力最高。     

Screening of Trichoderma strains tolerant to benzimidazole

The screening of isolates and the assay of biocontrol mechanisms of Trichoderma were studied systematically in laboratory and greenhouse in vivo. The proteins tolerant to benzimidazole in Trichoderma strains were purified, and their physical and chemical properties were detected. Compared their biological activities in vitro and vivo in greenhouse, nine biocontrol strains (including Ty-10-2,LTR-2,Tj-5-1,Tj-5-4,Ty-11-1,Tj-11-3,Ty-11-3,Tj-3-3-2,Tj-3-3-4) were screened. These bioco…