大鼠感染肝片吸虫后某些免疫介质变化的研究

３０只成年大鼠随机分成感染组和对照组，感染组每只习一次口服２５个肝片吸虫囊蚴。通过整体和肝脏离体灌流的方法研究大鼠在感染肝片吸虫后机体免疫功能的变化以及一些免疫介质在抗肝片吸虫和诱导肝损伤中的作用。结果发现，大鼠抗肝片吸虫ＥＳ抗原特异抗体（ＩgＧ）从感染后第２周开始显著升高，第８周回落到与对照组相当水平。感染组大鼠血浆 和肝组织匀浆中ＮＯ水平虽高于对照组，但差异不显著（P〈０．０５），而离体肝脏灌流     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原 ( ESA g)的酶联免疫吸附试验 ( ELISA)检测人工感染肝片吸虫的山羊血清中特异性 Ig G抗体动态变化。ESAg用量为 13.8μg/孔 ,抗体稀释 10 0 0倍 ,二抗 1∶ 2 0 0 0稀释 ( 3.5μg/孔 ) ,HRP标记的葡萄球菌 A蛋白 ( SPA* )工作浓度为 1∶ 4 0。检测结果表明 ,2组实验山羊 (第 1组每只羊口服2 0 0个囊蚴 ,第 2组每只羊口服 50 0个囊蚴 )在感染后第 3周血清中的特异 Ig G即开始升高 ,呈现动态变化趋势 ;第 2组于第 6周 ( 42 d) Ig G水平升到高峰 ,随后稍有下降 ,第 1组于第 9周 ( 6 3d) Ig G水平升到最高峰 ,随后又稍有下降 ,一直呈波动趋势 ;在试验的 3～ 17周期间 ,总体上虽第 2组抗体水平比第 1组高 ,统计分析无显著差异 ( P >0 .0 5) ,但均比对照组保持较高的水平 ,有显著差异 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ,表明山羊在肝片吸虫入侵后 ,很快产生了高水平的体液免疫 ,而 Ig G的波动可能与虫体的移行有关 ,与虫卵数量则无关。     

实验感染肝片吸虫水牛和山羊的细胞免疫反应

为评价肝片吸虫病的细胞免疫反应,选用８头雄性去势水牛和６只雄性山羊,经粪便检查和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测确认无肝片吸虫感染。经２周适应性饲养后,随机将水牛分成试验组（ｎ＝５）和对照组（ｎ＝３）。试验组水牛每天每头经口感染６０个囊蚴,连续２０ｄ,共接种１２００个囊蚴。山羊分成试验１组、实验２组和对照组,每组２只。试验１组和２组每只山羊分别一次性口服接种５００个和２００个囊蚴。水牛在感染前５周和感染后２６周内,山羊在感染前１周和感染后１６周内,每周颈静脉采血１次,测定外周血Ｔ淋巴细胞增殖反应和／或白细胞介素－２水平。结果表明,水牛在感染后１～６周,Ｔ淋巴细胞增殖反应有上升趋势,而在感染后１３～１７周低于对照组;血清白细胞介素－２水平有类似于淋巴细胞增殖反应的变化。实验１组山羊血清白细胞介素－２水平低于对照组,而实验２组在感染后２～１１周有上升的趋势,以后下降。     

禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测法,其抗原最适包被量为 ０．０６μｇ／点;血清抗体最佳稀释度为 １１００;酶标抗体作 １２００ 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 Ｓ Ｐ Ｆ鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 １１ 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒（ Ａ Ｉ Ｖ）分型血清、琼扩（ Ａ Ｇ Ｐ）阳性血清及血凝抑制（ Ｈ Ｉ）阳性而 Ａ Ｇ Ｐ疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 Ａ Ｉ Ｖ 的 Ｓ Ｐ Ｆ鸡第 ３ 天即能检出抗体阳性,第 ５～１１７ 天可全部检出。与间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

水牛实验感染肝片吸虫后IGF—I和β内啡肽含量变化及其对免疫功能的影响

８头健康阉公水牛，５头经口每日感染肝片吸虫囊蚴６０个／头，连续２０ｄ；３头不感染作对照，于感染前和感染后每周采集颈静脉血样１次，共２７次，分别测定血浆ＩＧＦ－Ｉ，β内啡肽（β－ＥＰ）以及ＷＢＣ，ＤＣ；Ｔ，Ｂ淋巴细胞比例和血清抗肝片吸虫ＩｇＧ水平，结果ＩＧＦ－Ｉ和β－ＥＰ分别在开始感染后第５周和第４周显升高，并持续互第２３周和第９周，ＩｇＧ水平也在第４－２２周显高于对照组，嗜酸性粒细胞和Ｂ淋巴细     

抗鸡IgG重链单克隆抗体的制备与应用

以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾     

应用斑点酶联免疫吸附试验诊断山羊蠕形螨病的研究

应用Ｄｏｔ－Ｅｌｉｓａ方法进行山羊蠕形螨的免疫学诊断,从刚屠宰羊的新鲜皮张上无菌采取蠕形螨病灶内的乳白色干酪样内容物（内含大量的虫卵和各期虫体及其分泌物）。将病料加适量ｐＨ７．２的０．０１ｍｏｌＰＢＳ液及防腐剂,捣碎机捣碎,３０００ｒ／ｍｉ。离心３５ｍｉｎ（分钟）,取沉淀物用组织捣碎器反复捣碎,直至显微镜检查无完整虫体及虫卵为止。反复冻溶１０次,超声波粉碎２次,每次２０ｍｉｎ,低温高速离心１ｈ（小时）,取上清液经紫外分光光度计测定抗原蛋白含量。制备血清,应用（ＮＨ４）_２ＳＯ_４沉淀法提取牛血清ＩｇＧ,免疫兔,经ＩＨＡ效价测定达到一定效价时分离血清备用,斑点酶联免疫吸附试验结果：其蛋白含量为１．２１ｍｇ／ｍｌ。抗原、抗体的最佳工作浓度;抗原在０．１μｇ／μＩ、抗体在２００倍稀释时．阳性血清组在硝酸纤维膜上出现清晰的棕褐色斑点,阴性血清不出现斑点。Ｄｏｔ－Ｅｌｉｓａ的敏感度比ＩＨＡ高１２０～１８０个稀释度。用所制备的复合可溶性抗原与肝片吸虫阳性血清及蠕形螨阳性血清分别作Ｄｏｔ－Ｅｌｉｓａ试验．结果蠕形螨阳性血清组呈现棕褐色斑点,肝片吸虫阳性血清组不出现棕褐色斑点。     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

应用酶标SPA Dot-ELISA同时检测牛羊血吸虫病和肝片吸虫病

采用给雄性家兔注射黄牛、水牛、山羊ＩｇＧ混合液（１∶１∶１）制备的兔抗黄牛、水牛和山羊ＩｇＧ连接酶标ＳＰＡ，解决了酶标ＳＰＡ与牛羊血吸虫和肝片吸虫免疫复合物相结合的技术关键，并制成了可同时用于牛羊血吸虫病和肝片吸虫病诊断的酶试剂。建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ同时检测牛羊血吸虫病和肝片吸虫病技术，能测出人工感染１～１５０条虫体７～４２ｄ病畜抗体，阳性检出率达１００％。     

水牛实验感染肝片吸虫后IGF-Ⅰ和β内啡肽含量变化及其对免疫功能的影响

头健康阉公水牛, ５ 头经口每日感染肝片吸虫囊蚴６０ 个／ 头, 连续２０ ｄ ; ３ 头不感染作对照。于感染前和感染后每周采集颈静脉血样１次, 共２７ 次, 分别测定血浆 Ｉ Ｇ Ｆ Ⅰ、β内啡肽 （β Ｅ Ｐ） 以及 Ｗ Ｂ Ｃ 、 Ｄ Ｃ ; Ｔ、 Ｂ 淋巴细胞比例和血清抗肝片吸虫 Ｉｇ Ｇ 水平。结果 Ｉ Ｇ Ｆ Ⅰ和β Ｅ Ｐ 分别在开始感染后第５ 周和第４ 周显著升高, 并持续到第２３ 周和第９ 周; Ｉｇ Ｇ 水平也在第４ ～２２ 周显著高于对照组, 嗜酸性粒细胞和 Ｂ 淋巴细胞比例也明显升高。结果表明肝片吸虫感染后水牛免疫功能的变化可能与 Ｉ Ｇ Ｆ Ⅰ及β Ｅ Ｐ 有关。     

水牛感染肝片吸虫后红细胞免疫功能的变化

选择２０头２－３岁、体重３００－４００ｋｇ健康雄性去势水牛,经粪便检查和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测确认为无肝片形吸虫感染后进行两个系列的实验。第一系列实验８头水牛随机分成感染组（ｎ＝５）和对照组（ｎ＝３）,感染组每头水牛每天口服６０个囊蚴,连续２０天,共感染１２００年囊蚴,研究慢性感染方式对机体红细胞免疫功能的影响;第二系列实验１２头水牛随机分成感染组（ｎ＝９）和对照组（ｎ＝３）,感染组每头水牛１次性     

Ⅱ型猪链球菌S2株在兔中免疫原性的研究

本文对Ⅱ型猪链球菌Ｓ２株进行了研究。作者用Ｓ２制备了３种不同抗原：荚膜多糖,多糖蛋白复合物,灭活菌苗。通过血清学方法证明荚膜多糖（ＣＰＳ）,多糖蛋白复合物与Ｓ２株有共同的抗原,免疫兔后,保护指数在１／２至２／２之间。本试验用ＥＬＩＳＡ法检测了３种抗原的免疫反应。免疫荚膜多糖组在第２周就能检测到抗体,并持续到第４周,免疫多糖蛋白复合物组在第４周才有抗体出现,免疫灭活苗组第２周出现较低滴度的抗体,第４周就降到零。从抗体滴度看,ＣＰＳ反应快,多糖蛋白复合物产生抗体迟,灭活苗产生抗体滴度低。本文还比较了３种不同佐剂（铝胶,蜂胶,ＥＭＵＬＳＩＧＥＮＲ）对３种抗原的佐剂活性作用。铝胶能促使兔体对荚膜多糖产生抗体,蜂胶次之,ＥＭＵＬＳＩＧＥＮＲ最差。     

山羊日本血吸虫抗体消长规律

山羊７只各接种日本血吸虫尾蚴（３００±２０）条，２只作空白对照。粪孵阳性后，７只感染羊被随机分为２组，其中一组（４只）以吡喹酮按每日每公斤体重用１００ｍｇ，共用２ｄ进行治疗，另一组（３只）作对照。用环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）、间接血凝试验（ＩＨＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）３种方法检测其抗体消长。结果，ＣＯＰＴ和ＩＨＡ于感染后第２０天检出特异性抗体，ＥＬＩＳＡ于第４０天检出特异性ＩｇＧ；经吡喹酮治疗后，上述３种方法分别于３，５，７个月转阴。     

分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体（ＭＯ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株．以有限稀释法克隆１～２次，得到６株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株．选择抗体分泌较高的１４Ａ６、７Ａ２７、Ｂ３８进行了较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９４～９６．抗体属性是：１株为ＩｇＧ２ａ、２株为ＩｇＧ１．用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ作符异性分析、该ＭｃＡｂ只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应，而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应．将杂交瘤细胞注射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水．其抗体效价提高１００倍．杂交瘤细胞在液氮中保存１～２年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体ＭｃＡｂ。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

用ELISA检测山羊关节炎脑炎病毒抗体

以差速离心，结合ＳＤＳ处理制备ＥＬＩＳＡ抗原，用含０．０２％ＮａＮ３的碳酸盐缓冲液作抗原包被液，不加任何封闭剂，待测血清以含５％犊牛血清和０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０稀释，检测９２２份山羊血清的ＣＡＥ抗体，并与免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）比较，提高检出率约一倍并减少漏检     

山羊内毒素休克诱发脂质过氧化作用及山莨菪碱对其影响的研究

本文将３０头杂交山羊分成３组,第１组（ｎ＝６）为对照组,第２组（ｎ＝１２）静注大肠杆菌内毒素复制休克模型,第３组（ｎ＝１２）在第２组基础上提前１０ｍｉｎ静注山莨菪碱性注射液,检测１２ｈ内不同时间血清丙二醛（ＭＤＡ）含量,总ＳＯＤ,Ｍｎ－ＳＯＤ,ＣｕＺｎ－ＳＯＤ,ＣＡＴ和血液ＧＳＨ－Ｐｘ活性,结果表明,第２组血清ＭＤＡ含量明显增加（Ｐ〈０．０１）,血清Ｔ－ＳＯＤ,Ｍｎ－ＳＯＤ,ＣｕＺｎ－ＳＯＤ,ＧＳ     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个