鸭多杀性巴氏杆菌的分离及药敏试验

目的:对临床送检的疑似多杀性巴氏杆菌感染的病死鸭进行病原的分离鉴定及药敏试验,为该病的防治提供参考依据。方法:从疑似多杀性巴氏杆菌感染病死鸭的肝脏中取病料接种到血琼脂平板和麦康凯培养基上,37℃培养24 h,选择符合多杀性巴氏杆菌典型特征的菌落进一步染色镜检和生化试验鉴定,然后用圆纸片扩散法测定其对不同药物的抑菌圈大小。结果:该菌在鲜血琼脂平板上生长为圆形、边缘整齐、灰白色露滴样菌落,不溶血,麦康凯培养基上不生长;革兰氏染色镜检发现为革兰氏阴性、两端钝圆的单个或成对的两极着色的短杆菌,且生化试验结果与多杀性巴氏杆菌的反应特性一致。结论:该鸭群的发病死亡为多杀性巴氏杆菌感染导致。     

一起孔雀产酸克雷伯氏菌病的诊疗

从病死的孔雀分离到一种革兰氏阴性的粗短杆菌,经细菌学、培养特性和血清学鉴定为产酸克雷伯氏菌。该菌在M.C.K和SS培养基上生长良好,能在pH 6~11范围内生长,最适生长为pH 6~8,在无盐至2%NaC l培养基上生长良好,6%NaC l抑制其生长;最适生长温度为37℃;可致死小白鼠。根据药敏试验,对发病孔雀进行卡那霉素与庆大霉素联合治疗,结果全部治愈。     

一例鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定与治疗

为确诊田东县某鸡场20日龄雏鸡发病死亡的原因,无菌采集病死鸡脾脏、肝脏组织进行细菌分离培养鉴定,并进行药敏试验和致病性试验.结果:分离菌为革兰氏阴性杆菌,在麦康凯培养基、伊红美蓝培养基上均出现与大肠杆菌一致的生长特征,生化试验鉴定均符合大肠杆菌的生化特性,致病性试验表现为较高的致病性,药敏试验显示该菌对安普霉素、丁胺卡...     

禽霍乱流行特点及防治对策

禽霍乱又称禽巴氏杆菌病,由多杀性巴氏杆菌引起。目前此病在世界各地呈散发性或地方流行性发生。 病原:禽多杀性巴氏杆菌是一种短小杆菌。在显微镜下观察呈两端钝圆,一般单个散在,也有成双排列。病料涂片作瑞氏、美蓝或姬姆萨氏染色后,两端着色特别深,中间着色不明显,象是双球菌,据此特征容易识别。革兰氏染色呈阴性。在普通培养基上可以生长,酌加血液或血清则生长更为良好。培养出的露珠状小菌落为灰白色、不透明。     

鹑梭状芽胞杆菌的分离鉴定

用色氨酸磷酸琼脂培养基，采用厌氧培养的方法，对从泰安、菏泽、聊城等地送检的疑似鸡溃生肠炎的病死鸡进行了鹑梭状芽胞杆菌的分离，并对谝菌的培养特性、生化特性、对药物的敏感性、致病性等进行了测定。     

云南鸡源副禽嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性分析

无菌棉签深入病死鸡鼻窦腔深部无菌采集病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生理生化试验、革兰氏染色、血凝活性测定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果在富含V因子血琼脂平板上分离到一株灰白色、圆形、边缘整齐的光滑型小菌落,菌落在血琼脂平板、麦康凯等培养基上无明显菌落生长;镜检观察为革兰氏阴性菌,具有血凝活性,符合副禽嗜血杆菌生化培养特性;细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为副禽嗜血杆菌。分离菌株对妥布霉素、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星具有敏感性。     

黄牛阿氏肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为查明广西某牛场病死黄牛的病死原因,提供科学的综合防治措施,用细菌分离、生化鉴定、细菌16S rRNA测序、体外药敏试验、常见病原的PCR检测等方法对送检的病料进行检测。结果显示,化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、肺炎克雷伯菌、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测结果均为阴性。而从出血肺组织中分离到1株能引起小鼠致死的短杆状革兰阴性菌,该细菌在血琼脂平板上呈灰白色菌落,不溶血;在麦康凯培养基上呈圆形灰色、轻度隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为0.2 mm^0.3 mm的针尖状小菌落;在营养肉汤中生长呈絮状物浑浊。生化鉴定发现其符合阿氏肠杆菌的生化特性,16S rRNA测序结果显示该菌与阿氏肠杆菌的基因序列同源性为99%。体外药敏试验结果显示该菌仅对头孢类药物敏感,头孢类药物作用效果强度为头孢曲松钠>头孢地嗪钠>头孢哌酮钠舒巴坦钠。     

孔雀产酸克雷伯氏菌的分离与鉴定

从病死的孔雀分离到一种革兰氏阴性的粗短杆菌。经细菌学、培养特性和血清学鉴定为产酸克雷伯氏菌。该菌在M.C.K和SS培养基上生长良好，能在pH6～11范围内生长，最适生长为pH6～8，在无盐至2％NaCl培养基上生长良好，6％NaCl抑制其生长；最适生长温度为37℃；可致死小白鼠。对卡那霉素庆大霉素等药物高敏，而对青霉素、四环素等药物具有耐药性。     

山羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定

从福建省不同羊场的山羊颈肩部淋巴结脓肿处分离到5株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌,该菌在含血清的琼脂培养基上,可生长成直径1-2 mm、干燥、中央凸起、不透明、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,而在普通培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。根据其形态学、培养特性、生化特性及致病性试验和动物回归试验结果,判定所分离的5株菌为山羊伪结核棒状杆菌。     

仔猪李斯特杆菌的分离与鉴定

为了对某猪场病死仔猪的死亡病因进行调查,本试验采集病料进行研究,采用鉴别培养基分离、生化特性鉴定、PCR扩增细菌16S rRNA基因及测序分析等方法对样品中存在的细菌进行分离鉴定,结果显示分离菌为李斯特杆菌。采用标准K-B纸片法对分离菌株进行20种抗菌药物的药敏试验,并对其生长曲线进行测定。结果显示,此菌株对青霉素G、磷霉素、阿莫西林等药物高敏,而对呋喃唑酮等药物耐药。37 ℃培养6~14 h后细菌处于增殖期。本研究为中国仔猪李斯特杆菌病细菌学检测及治疗提供了科学依据。     

鸭链球菌的分离与耐药性监测

本研究利用鲜血琼脂和营养琼脂培养基,从自然发病的鸭体内成功分离出链球菌19株,革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性球菌呈长链状排列,生化试验和动物接种试验结果表明,所分离的细菌对鸭有致病性。药敏试验结果表明,分离的菌株耐药性均很强,除7株对丁胺卡那中度敏感外,其余菌株对丁胺卡那、头孢曲松钠、氧氟沙星等14种药物低度敏感或不敏感。说明鸭链球菌耐药性在不断增强,给鸭链球菌病的防治带来了一定的困难。     

鸭黄病毒SDbz株的分离与初步鉴定

鸭黄病毒病为近年来新发的鸭病,给养鸭业带来了极大的经济损失。为了深入研究本病的防制,本试验对鸭黄病毒(duck flavivirus,DFV)进行了分离鉴定。取疑似感染DFV的病鸭病料,经细菌分离初步排除细菌感染后,应用RT-PCR检测呈现DFV阳性,处理后将其接种到鸭胚成纤维细胞(DEF)和健康鸭胚上进行病毒分离传代。结果显示,在DEF细胞上第1代48 h就开始出现CPE,随着时间的延长CPE更加明显,通常在72~96 h产生典型CPE;接种鸭胚每一代均出现死亡,且死亡时间多集中于接种后60~72 h,死亡鸭胚胚体水肿、出血、发育不良、胚肝严重出血、肿胀或斑驳样坏死等病变。将病毒DEF细胞和鸭胚分离物应用血凝试验、毒价测定、病毒中和试验、RT-PCR及人工感染试验进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为DFV,并将其命名为DFV SDbz株。     

市售5种消毒剂对舍饲鸭场的杀菌效果评价

为了解贵州省某舍饲鸭场环境中菌落分布情况以及市售五种常用消毒剂(苯扎溴铵、月苄三甲氯铵、复方戊二醛、戊二醛癸甲溴铵、聚维酮碘)的灭菌效果。通过采集鸭场空气、粪便、垫料、饮水样本进行菌落总数测定;分别配制最小杀菌浓度的苯扎溴铵、月卞三甲氯铵、复方戊二醛及戊二醛癸甲溴铵4种消毒剂,采用雾线、喷洒消毒方式对舍饲鸭场空气、漏缝地板、料槽、蛋框及运输车车轮进行现场消毒;配制最小杀菌浓度的聚维酮碘,采用涂抹方式对鸭蹼部皮肤进行涂抹消毒;最后分别测定鸭场空气、漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮及鸭蹼样本消毒前后的菌落总数并计算5种消毒剂对细菌的杀菌率。结果显示：舍饲鸭场空气菌落总数为3.79×10⁴ CFU/m³,超出NY/T 388-1999畜禽场环境质量标准规定数值(25000 CFU/m³);粪便菌落总数为2.67×10⁷ CFU/g,超出GB18596-2001畜禽养殖业污染物排放标准规定数值(1.03×10⁶CFU/g);垫料菌落总数为3.7×10⁶CFU/g,超出NY/T1167-2006畜禽场环境质量及卫生控制规范规定的清洁土壤数值(5×10⁴CFU/g);饮水菌落总数为12 CFU/mL,符合GB 5749-2006生活饮用水卫生标准(100CFU/mL)。5种消毒剂对鸭场进行现场消毒试验,复方戊二醛对漏缝地板、蛋框、运输车车轮的细菌杀菌率最高,分别为96.78%、81.31%、87.5%;戊二醛癸甲溴铵对鸭舍空气、料槽的细菌杀菌率最高,分别为34.85%、74.35%;聚维酮碘对鸭蹼部皮肤细菌杀菌率为72.45%;4种消毒剂对漏缝地板、料槽、蛋框、运输车车轮消毒效果良好,对空气的消毒效果不理想;聚维酮碘对鸭蹼部皮肤消毒效果不理想。结果表明：该舍饲鸭场存在大量超过国标菌落总数的安全隐患,通过对该鸭场微生物菌落计数及现场消杀试验,在一定程度将菌落总数控制在了合理范围。研究结果旨在为掌握舍饲鸭场微生物菌落分布情况,制定舍饲鸭场消毒程序以及科学防控养鸭场细菌性疾病提供参考依据。     

Studies on the Effect of Supplementing Boar Semen Cryopreservation Media with Different Avian Egg Yolk Types on in Vitro Post-thaw Sperm Quality

Fertility after insemination of cryopreserved boar semen is currently below that of fresh semen. In an attempt to improve the post-thaw motility and acrosome integrity of boar sperm, semen was frozen using an adapted Westendorf method in which the chicken egg yolk was replaced by either duck or quail egg yolk. The different composition of the yolk types, particularly the amount of cholesterol, fatty acids and phospholipids, were thought to potentially afford a greater level of protection to sperm against damage during freezing and thawing. Sperm frozen in medium containing chicken egg yolk displayed higher motility immediately after thawing, but there was no difference in the motility of sperm frozen with different types of egg yolk 3 or 6 h after thawing and maintenance at 37 degrees C. Sperm frozen in media containing chicken or duck egg yolk had a higher proportion of intact acrosomes immediately after thawing than sperm frozen in medium containing quail egg yolk, but 6 h after thawing and maintenance at 37 degrees C the sperm that had been frozen in medium containing chicken egg yolk had a higher proportion of intact acrosomes than the sperm frozen in media containing duck or quail egg yolk. Analysis of the composition of the different yolk types showed that the basic components of the yolks were similar, but the ratios of fatty acids and phospholipid classes differed. Duck egg yolk had more monounsaturated fatty acids (MUFA) than chicken egg yolk, which had more MUFA than quail egg yolk. Duck egg yolk contained more phosphotidylinositol (PI) than chicken or quail egg yolks and quail egg yolk contained more phosphotidylserine than either chicken or duck egg yolks. The differences in post-thaw motility and acrosome integrity of boar sperm when frozen in media containing the different types of egg yolk may be due to the variation in composition.     

鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定临床疑似鸭多杀性巴氏杆菌感染肉鸭的病原菌，本试验通过细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、细菌种特异性鉴定、荚膜分型鉴定和动物回归试验进行鉴定，并通过药敏试验和耐药基因检测进行耐药性分析。结果显示，从患病鸭肝脏组织分离到的细菌在鲜血琼脂培养基中呈现表面光滑凸起、灰白色菌落，为革兰氏阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；生化鉴定结果显示，分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇，硫化氢、氧化酶和吲哚等试验阳性；16S rRNA基因序列系统进化树分析显示，该分离菌与多杀性巴氏杆菌聚为一支，同源性 > 99%；细菌种特异性鉴定结果与多杀性巴氏杆菌相符；荚膜分型鉴定结果仅扩增到约为1 050 bp的目的基因片段，与荚膜血清A型相符；动物回归试验显示，该分离菌有较强的致病性；药敏试验结果显示，该分离菌对羧苄西林、氨苄西林、复方新诺明和四环素等12种药物耐药；经耐药基因PCR检测显示，该分离菌携带Sul1、Sul3、tet（X）和Intl1 4种耐药基因，与药敏表型相符。本试验成功分离到1株鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌，为鸭多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考依据。     

鸭传染性浆膜炎疾病模型方法的建立

鸭传染性浆膜炎是鸭最常见的急性、败血性传染病之一,死亡率高,严重影响到养鸭业的发展。本试验通过对鸭传染性浆膜炎疾病模型的建立进行条件筛选,确立对6周龄雏鸭采用腹腔注射0.5 mL 4.5×10⁹ CFU/mL细菌浓度的鸭疫里默氏杆菌,5 h后鸭开始发病,3~5 d死亡率达80%,临床症状、病理学检查及病原学鉴定均符合该疾病模型复制的要求。本试验结果可以为该病的病理学研究及新药筛选提供理论依据。     

成都地区鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定

本试验从成都地区出现典型鸭传染性浆膜炎剖检变化的病例中分离得到17株细菌,经过病料触片染色、细菌分离培养、生化试验、PCR等方法鉴定为鸭疫里默氏杆菌(RA)。并进一步对其血清型进行了鉴定,结果显示:有10个分离菌株与1型RA阳性血清发生阳性反应,其余7株未定型。     

Isolation,Identification, 16S rRNA Gene Sequencing and Genetic Evolution Analysis of Aeromonas aeruginosa from Duck

【Objective】 The experiment was aimed to study the pathogenic bacteria of acute death of ducklings in a duck farm in Henan province and its phylogenetic status.【Method】 The liver and spleen of dead ducks in the diseased duck farm were collected.The bacterial morphology, Gram-staining, biochemical characteristics, sequence analysis of 16S rRNA gene, drug sensitivity test and pathogenicity test were carried out.【Results】 The isolated bacteria grew on blood agar medium with smooth, convex, milky white and α-hemolytic Gram-positive cocci.Biochemical test results showed that the isolated bacteria were positive for maltose, sucrose, raffinose, nitrate reduction reaction, MP-VP test, urea, lysine decarboxylase, ornithine decarboxylase and aescin, and negative for xylose, lactose, glucose, sorbitol, hydrogen sulfide, citrate, peptone, mannitol, phenylalanine and methyl red.The results of 16S rRNA gene sequencing and BLAST comparison results showed that the 16S rRNA gene sequence of the isolated strain was 94.8%-99.9% similar to that of Aerococcus viridans published on NCBI, and the similarity with strains Mnlv1, Mnlv2 and W66 was the highest, up to 99.9%.The similarity with strain GXBl-1 was the lowest, which was 94.8%.Phylogenetic tree analysis showed that the isolated bacteria belonged to the same genus and group on the same branch as strains of Aerococcus viridans FL09, 15MS and Mnlv2 etc., and had the closest genetic relationship with FL09.The results of drug sensitivity showed that the isolated strain was sensitive to fosfomycin, ampicillin and amoxicillin, moderately sensitive to penicillin, neomycin and amikacin, it was resistant to rifampicin, neomycin, bacitracin, erythromycin and enrofloxacin.The results of pathogenicity test showed that the strain was lethal and increased with the increase of inoculation concentration.【Conclusion】 This study determined that the pathogen causing the acute death of ducklings in a duck farm in Henan province was Aerococcus viridans, which provided a reference basis for clinical diagnosis and treatment of the diseases caused by this bacteria.     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定

从广州市郊区几个鸭场发病或死亡鸭的脑、心血、肝、脾等组织中分离到6株革兰氏阴性杆菌，经形态学检查、生化试验、动物实验等鉴定均为鸭疫里默氏杆菌。通过凝集试验和琼脂扩散试验鉴定：2株为鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型，4株为鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型。     

养鸭场主要细菌分离鉴定及致病性研究

从贵州省三穗县6个规模养鸭场发病或濒死鸭各脏器中分离细菌,经细菌培养特性、染色、镜检并结合生化试验和PCR鉴定,共计分离出137株7个属的细菌,其中埃希氏菌、葡萄球菌、鸭疫里默氏杆菌为主要优势分离菌.随机选取3种优势菌稀释成含菌量为10⁹ CFU/mL的菌悬液,按0.3 mL/只腹腔注射BALB/c小鼠,统计其死亡率,并观察其临床症状和剖检病变,分析其致病性.结果显示,埃希氏菌和葡萄球菌均可引起BALB/c小鼠的死亡,致死率分别为23.3%和16.7%,对死亡小鼠进行剖检可见明显病变;而鸭疫里默氏杆菌对BALB/c小鼠基本无致病性,致死率为0;生理盐水对照组致死率为0.结果表明,养鸭场细菌性疾病存在混合感染且情况严重,3种主要分离菌中埃希氏菌和葡萄球菌对小鼠存在致病性,而鸭疫里默氏杆菌对小鼠基本无致病性.