信号传导与转录活化因子3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 研究信号传导与转录活化因子3(STAT3)在肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法 分别应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中STAT3 mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学法检测Bcl-xL的蛋白表达情况.结果 肝癌组织、癌旁组织中STAT3 mRNA的相对表达量和蛋白阳性率均高于良性病变肝组织(P均<0.01或0.05).肝癌组织及癌旁组织中Bcl-xL蛋白表达率明显高于良性病变肝组织(P<0.05).肝癌组织中STAT3蛋白与Bcl-xL蛋白表达有密切关系(P<0.01).结论 STAT3高表达可能是肝癌发病机制中的早期事件;在癌旁肝组织中,那些STAT3蛋白阳性的肝细胞可能是潜在的癌前细胞.STAT3基因可能通过直接或间接促进Bcl-xL的表达,抑制细胞的凋亡,从而在肿瘤的发生发展过程中发生重要作用.     

肝癌组织中PTEN和TIMP-3的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因PTEN和TIMP-3在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法收集30例HCC、癌旁组织和10例正常肝组织,用qRT-PCR、Western blot、免疫组化SP法检测PTEN、TIMP-3mRNA和蛋白表达,分析PTEN和TIMP-3表达与HCC临床病理特征的关系。结果癌组织中PTEN和TIMP-3mRNA和蛋白表达均明显低于癌旁组织、正常肝组织（P〈0.01）,且在癌旁组织中的表达亦明显低于正常肝组织（P〈0.01）。PTEN和TIMP-3蛋白表达在肝外转移、分化差、血清AFP≥400μg/L和Ⅲ～Ⅳ期肝癌组织中的表达明显低于无肝外转移、分化好、血清AFP〈400μg/L和Ⅰ～Ⅱ期肝癌（P〈0.01或0.05）者;两者在是否伴有肝硬化和不同肿瘤大小肝癌组织中的表达均无统计学意义（P〉0.05）。结论 HCC癌组织中PTEN和TIMP-3表达下调,表达水平有助于判断HCC侵袭转移能力、临床分期和肝外转移。     

端粒酶在原发性肝癌组织中的表达

目的：探讨端粒酶在原发性肝细胞癌(HCC)患者肝组织中的表达及临床意义。方法：用TRAP—ELISA法检测45例原发性肝细胞癌和26例癌旁组织以及7例正常肝组织的端粒酶活性。结果：45例原发性肝细胞癌组织中有38例显示端粒酶活性，其阳性率为84．4％，而26例癌旁组织只有2例具端粒酶活性，阳性率只为7．6％；7例正常肝组织端粒酶表达均为阴性；结果还显示肝癌组织端粒酶的表达与肿瘤病理分化程度无关。结论：端粒酶在绝大多数原发性肝细胞癌中表达，其活性可能在HCC的发生和发展中起重要作用，有希望成为诊断HCC的肿瘤标志物。     

siRNA干扰Notch1诱导肝癌细胞凋亡的机制研究

目的 研究Notch1在肝癌组织及细胞中的表达并初步探讨Notch1下调后诱导肝癌细胞调亡的机制。方法 2016年3月至2016年9月于广东医科大学附属医院肝胆外科收集32例肝癌病人样本,利用qRT-PCR方法检测肝癌癌组织及癌旁组织中Notch1基因的表达,免疫组化检测组织中Notch1蛋白表达,siRNA沉默肝癌细胞Notch1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测Notch1、Bcl2和Bax蛋白表达,统计分析Notch1表达水平与肝癌病人临床诊断指标甲胎蛋白（AFP）的相关性。结果 肝癌组织标本中Notch1高表达率为71.9%（23/32）,明显高于癌旁组织的28.1%（9/32）,差异具有显著统计学意义（P<0.01）;Pearson相关性分析显示,Notch1与AFP存在正相关性（R²=0.3376,P=0.0036）;免疫组化验证Notch1蛋白分别在肝癌癌组织样本中高表达和癌旁组织中低表达;siRNA干扰Notch1基因表达后,镜下发现肝癌细胞4401增殖抑制,流式检测示转染组明显凋亡,蛋白免疫印迹显示凋亡相关蛋白Bcl2蛋白下调、Bax表达上调。结论 Notch1与肝癌的发生、发展相关,下调Notch1可诱导肝癌细胞凋亡,同时Notch1还可作为临床治疗肝癌的潜在新靶点。     

CK、Ki67、Gly-3及P53在肝细胞癌组织中的表达

目的 探讨细胞角蛋白（CK）、核抗原（Ki67）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Gly-3）及抑癌基因P53在肝细胞癌（HCC）组织中的表达。方法 收集16例肝细胞肝癌患者癌组织及癌旁组织,采用免疫组化染色技术,分别检测CK、Ki67、Gly-3及P53,分析其表达情况。结果 免疫组化检测16例HCC癌组织中CK7、CK8/18、CK19的阳性率分别为50%（8/16）、93.8%（15/16）以及62.5%（10/16）,Ki67的阳性率为75%（12/16）,Gly-3阳性率为87.5%（14/16）,P53的阳性率为50%（8/16）。结论 HCC患者癌组织中CK、Ki67、Gly-3及P53的表达有不同程度的上调,其中以CK8/18阳性率最高,Gly-3及Ki67次之,P53及CK7相对较低。     

Runx3基因在肝癌手术前后血浆中异常甲基化检测及临床意义

目的:研究肝细胞癌组织及手术前后外周血浆中Runx3基因启动子区异常甲基化状态,探讨其在肝癌早期诊断及疗效评估中的价值;方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对肝癌患者肿瘤组织及相应血浆进行Runx3异常甲基化检测。结果:在81例肝癌组织中,Runx3异常甲基化率为43.2%(35/81),相应血浆中Runx3甲基化检出率为39.5%(32/81),血浆中Runx3基因甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.05);其中15例手术治疗患者手术前组织及血浆中Runx3甲基化检出率均为40%(6/15),术后只有1例患者血浆中Runx3基因异常甲基化。结论:血浆Runx3基因异常甲基化检测在肝细胞癌早期诊断及疗效评估方面有一定应用价值。     

P^73蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的异常表达

目的：检测胃癌及癌旁正常组织中P^73。蛋自的表达,探讨P^73蛋白的表达在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学S-P法检测50例胃癌组织中P^73。蛋白表达并与30例癌旁正常组织中P^73。蛋白的表达进行比较。结果：癌旁正常组织中P^73。蛋白表达率为21％;高分化胃癌与低分化胃癌组织中P^73。蛋白的表达率分别为55．5％、68．8％,呈递增性高表达。经统计学分析得出癌旁正常组织与胃癌组织P^73。阳性表达率有显著性差异（P〈0．01）。结论：P^73。蛋白异常表达在胃癌的发生、发展过程中起重要作用。并可作为胃癌早期诊断,判断预后的新的分子生物学指标。     

肝外胆管癌ANXA1和XIAP表达的临床病理研究

目的 探讨膜联蛋白A1(ANXA1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达与肝外胆管癌临床病理特征及预后的关系。方法 58例肝外胆管癌手术切除标本及30例癌旁胆管组织,应用EliVision^TM plus免疫组织化学染色二步法检测ANXA1和XIAP在癌组织及癌旁胆管组织中的表达,分析ANXA1和XIAP与肝外胆管癌患者性别、年龄、癌灶大小、分化等级、TNM分期、浸润转移及3年生存率7项临床病理特征的相关性。结果 癌组织ANXA1和XIAP阳性率分别为84.5%(49/58)和81.0%(47/58),癌旁胆管组织分别为30.0%(9/30)和26.7%(8/30),差异有统计学意义(均P<0.05)。ANXA1表达与性别、年龄、分化等级无关(均P>0.05),在癌灶>1.5 cm、TNM(Ⅲ+Ⅳ)期、有浸润转移和3年内死亡患者中,其阳性率显著高于癌灶≤1.5 cm、TNM(Ⅰ+Ⅱ)期、无浸润转移和3年内生存患者(均P<0.05);XIAP表达与性别、年龄无关(均P>0.05),在癌灶>1.5 cm、低分化、TNM(Ⅲ+Ⅳ)期、有...     

肝细胞癌SLeX和Arg-1表达的临床病理研究

目的 探讨唾液酸化Lewis X(SLeX)和精氨酸酶-1(Arg-1)表达与肝细胞癌(HCC)临床病理特征及预后的关系。方法 120例HCC手术切除标本及30例癌旁肝组织,应用EliVision^TM plus免疫组织化学染色二步法检测SLeX和Arg-1在HCC癌组织及癌旁肝组织中的表达,分析SLeX和Arg-1与HCC患者性别、年龄、肉眼类型、瘤体大小、分化等级、转移及5年生存期等临床病理特征的相关性。结果 HCC癌组织SLeX和Arg-1阳性率分别为44.2%(53/120)和75.8%(91/120),癌旁肝组织分别为3.3%(1/30)和100.0%(30/30),差异有统计学意义(均P<0.05)。SLeX和Arg-1表达与性别、年龄、肉眼类型、瘤体大小无关(均P>0.05)。在低分化、有转移和5年内死亡患者中SLeX高表达,Arg-1低表达,呈负相关性(r=-0.31)。结论 SLeX和Arg-1与HCC发生发展显著相关,SLeX表达上调和(或)Arg-1表达下调均预示HCC分化差、易转移、预后不良。     

SLeX和CK19表达与甲状腺乳头状癌浸润转移的关系

目的探讨SLeX和CK19蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其与癌组织浸润转移的关系。方法应用免疫组化染色EliVisionTMplus两步法检测127例甲状腺乳头状癌组织和30例癌旁甲状腺组织中SLeX和CK19蛋白的表达状况。结果甲状腺乳头状癌组织SLeX和CK19总体阳性表达率分别为70.1%和96.1%,显著高于癌旁甲状腺组织(P0.05);存在浸润和伴有淋巴结转移者,SLeX和CK19阳性表达率显著高于无浸润和无淋巴结转移者(P0.05);SLeX与CK19表达具有一定正相关性(r=0.30)。结论 SLeX和CK19在甲状腺乳头状癌组织中多数呈强阳性表达,两者与癌组织浸润转移密切相关。     

GPC3过表达载体的构建和表达检测

目的构建并检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican-3,GPC3）真核表达重组质粒。方法提取肾组织RNA进行逆转录,扩增GPC3基因的编码区,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定并测序;将克隆成功的质粒转染至Huh7细胞,用荧光定量PCR和Western blot检测GPC3的表达水平。结果成功扩增GPC3编码区,并克隆至载体pcDNA3.1中;GPC3过表达载体转染至Huh7细胞后,荧光定量PCR和Western Blotting检测结果显示GPC3mRNA和蛋白表达水平均明显增加。结论成功构建GPC3过表达载体可用于后续研究。     

前列腺癌细胞系和组织中neprilysin的表达

目的检测neprilysin（NEP）在前列腺癌细胞系和组织中的表达。方法用实时荧光定量PCR、western blot检测前列腺癌细胞系（LNCaP、PC-3）、39例前列腺癌和16例正常前列腺组织中NEP mRNA和蛋白表达。结果与正常组织相比,LNCaP及PC-3细胞中NEP mRNA表达下调,尤以LNCaP细胞更为显著;在经甲基化抑制剂作用后,PC-3细胞NEP mRNA恢复表达的程度明显高于LNCaP细胞。前列腺癌组织中NEP mRNA和蛋白表达均明显低于正常前列腺。结论 NEP表达下调可能促进前列癌发生。     

非小细胞肺癌中MAGE-3蛋白的Western Blot分析

目的：观察黑素瘤抗原-3(MAGE-3)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达。方法：用Western blot方法对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-3蛋白的表达情况进行研究。结果：3种人肺癌细胞系均表达MAGE-3蛋白;56例NSCLC标本中,28你表达MAGE-3蛋白,而相邻正常肺组织均不表达MAGE-3蛋白。结论：MAGE-3蛋白在NSCLC中有较高比率的表达．有望以该抗原作为适宜靶点对NSCLC患者进行免疫治疗。     

肝细胞癌中miR-155与CD44v6表达及相关性研究

目的探讨mi R-155及CD44v6在肝细胞癌（HCC）中表达及其相关性。方法采用q RT-PCR检测32例HCC患者癌组织及癌旁组织中mi R-155及CD44v6 m RNA表达,用免疫组化法检测CD44v6蛋白表达,分析两者间相关性及其与HCC临床病理特征关系。结果 HCC癌组织CD44v6蛋白及CD44v6、mi R-155m RNA较癌旁组织表达升高（P〈0.05）,IIIIV级及侵犯脉管的癌组织中mi R-155和CD44v6 m RNA表达较高（P〈0.05）。mi R-155和CD44v6 m RNA表达呈正相关（P〈0.05）。结论 mi R-155和CD44v6均参与HCC发生及发展。     

IV型戊型肝炎病毒ORF3蛋白在人肝细胞中相互作用蛋白的筛选与鉴定

戊型肝炎病毒编码3个开放性阅读框:ORF1,ORF2和ORF3,其中ORF3蛋白的功能目前尚不明确。为了进一步了解其功能,研究构建了ORF3哺乳动物表达载体pcDNA3.1Flag-ORF3,利用免疫共沉淀和LC/MS的方法筛选并鉴定肝细胞中可以和ORF3蛋白相互作用的蛋白。结果显示,成功构建了Ⅳ型戊型肝炎ORF3的重组表达载体,并利用免疫印迹检测其可以在哺乳动物细胞中正常表达ORF3蛋白,在肝癌细胞株HepG2中筛选并鉴定到了7个可能和ORF3相互用的蛋白,并推测其中RPS18的可能性较大,进而推测HEV可能通过ORF3与核糖体直接相互作用,从而影响其所感染的细胞中蛋白的正常翻译过程。本研究为进一步认识戊型肝炎病毒ORF3的功能提供了线索,进而有利于揭示戊型肝炎病毒的致病机理。     

PTEN、VEGF蛋白表达与犬乳腺肿瘤病理学特征的关系

为探讨犬的乳腺肿瘤组织中PTEN和VEGF蛋白表达与临床病理学特征关系的相关性,采用免疫组织化学SP染色法检测了32例乳腺肿瘤组织及6例正常乳腺组织中上述2种蛋白的表达。结果发现:1)PTEN蛋白在正常乳腺组织和良性乳腺肿瘤高表达率为100%,在恶性乳腺肿瘤组织中的高表达率为67%(8/12),两者比较差异极显著(P<0.01);乳腺肿瘤组织中PTEN蛋白表达与犬的年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),而与淋巴结转移、组织学分级有关(P<0.01)。2)VEGF蛋白在正常乳腺组织中高表达率为33.3%(2/6),在乳腺肿瘤组织中高表达率为78%(25/32),两者比较差异极显著(P<0.01);乳腺肿瘤组织中VEGF蛋白表达与患病犬的年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),而与淋巴结转移有关(P<0.05)。联合检测PTEN、VEGF表达可作为乳腺癌生物学行为和预后判断的重要指标。     

肝病患者纤维蛋白溶解系统关键因子检测的意义

目的研究肝病患者血浆中继发性纤维蛋白溶解系统中重要标志物D-二聚体（D-D）和纤维蛋白原（FIB）指标的变化及其临床意义.方法采用美国ACL-ELITEPRO全自动凝血仪检测35例健康体检者和94例不同肝病患者血浆中FIB和D-D含量.结果与健康体检正常组相比,各肝病组FIB含量降低,顺序为急性肝炎组〉健康对照组〉慢性肝炎组〉肝癌组〉肝硬化组.急性肝炎组和慢性肝炎组差别不显著,肝硬化组和肝癌组差别显著,差异有统计学意义（P〈0.05）;D-D含量升高顺序为健康对照组〈急性肝炎组〈慢性肝炎组〈肝癌组〈肝硬化组,各肝病组差异均有统计学意义.肝癌组和肝硬化组分别与急性肝炎组、慢性肝炎组和肝硬化组FIB和D-D含量比较均有显著差异,差异有统计学意义.结论血浆FIB和D-D可客观地反映肝病的严重程度.这为临床肝脏疾病的诊断、治疗以及判断预后提供了重要依据.     

GPC3-siRNA真核质粒载体的构建及Huh-7细胞转染

目的探讨GPC3-siRNA真核质粒载体构建并转染Huh-7细胞的可行性。方法构建真核质粒载体pcDNA3.1＋GPC3和GPC3-siRNA-1633,采用脂质体法瞬时转染至Huh-7细胞中。MTT法检测转染后Huh-7细胞的细胞活性,荧光定量PCR、Western blot分别检测GPC3 mRNA和蛋白表达。结果 GPC3-siRNA-1633基因和GPC3真核质粒载体转染Huh-7细胞后细胞存活率高,转染GPC3-siRNA-1633的Huh-7细胞出现GPC3 mRNA和蛋白表达下调。结论 GPC3-siRNA-1633可成功转染至Huh-7细胞,并抑制GPC3表达。