蛇足石杉内生真菌的分离纯化与鉴定研究

从药用植物蛇足石杉中分离内生真菌,并对其进行初步鉴定.先在MS培养基上对蛇足石杉的茎、叶和孢子进行离体组织培养;然后在PDA平板培养基上,分别对茎、叶和孢子离体培养中产生的内生真菌进行分离;最后对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化,以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定.结果从蛇足石杉的茎中分离出4株内生真菌菌株,分别属于顶孢霉属、头孢霉属、酵母属和束梗孢霉属;从叶中分离出2株内生真菌菌株,分别属于头孢霉属和青霉属.     

蛇足石杉内生真菌JSM 09的分离及分子鉴定

以蛇足石杉为材料,经过严格的表面消毒,分离纯化得到1株内生真菌JSM 09.对JSM 09进行基于ITS序列的系统发育分析.结果表明:菌株JSM 09和Irpex属的3个Irpex lacteus 菌株聚在一个枝上,且与Irpex lacteus XSD-2距离最近,相似程度为99%,JSM 09应为白耙齿菌(Irpex lacteus).     

蛇足石杉内生真菌生物学性状及发酵产物研究

研究蛇足石杉内生真菌的生物学性状及其液体发酵产物中植物激素和酶类,结果显示:推测蛇足石杉内生真菌分别属于木霉属、曲霉、峡筒串孢霉属、聚孢霉属;从根毛细胞中发现内生菌菌丝,而在其他部位菌丝都以胞外菌丝状态存在;2株内生真菌能够分泌IAA,3株真菌发酵液具有PPO活性,3株真菌发酵液具有POD活性.     

不同培养条件对蛇足石杉内生真菌生物量积累及总生物碱含量的影响

为探索现代生物技术生产生物碱的可能,采用定量滤纸过滤后冷冻干燥和经典总生物碱提取方法,研究了光照、温度、摇床转速和pH值对蛇足石杉内生真菌(2-S1和11-′S1菌株)生物量积累及总生物碱含量的影响。结果表明:自然散射光、25℃、pH5和摇床转速100 r/min时,2-S1菌株生物量积累较好;黑暗、25℃、pH5～7和摇床转速0 r/min时,2-S1菌株总生物碱含量较高;黑暗、25℃、pH6和摇床转速0～100 r/min时,11-′S1菌株生物量积累较佳;黑暗、15℃p、H 6和摇床转速0～100 r/min时,11-′S1菌株总生物碱含量较高。     

草药蛇足石杉研究进展

石杉碱甲是治疗老年痴呆症最好的药物,蛇足石杉的石杉碱甲是石衫植物中含量最高的。本文从蛇足石杉内生真菌、组培灭菌、药用成分分离纯化及含量测定等方面的研究新进展进行综述。     

真菌对蛇足石杉扦插生根的影响及其机理研究

研究了真菌对蛇足石杉插条生根效应的影响,及其生根过程中吲哚乙酸(IAA)、酚类化合物(儿茶酚、槲皮素、绿原酸、阿魏酸)含量、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性的变化。结果表明,真菌能够提高蛇足石杉的生根率,增加生根条数,原因是真菌提高了蛇足石杉扦插生根过程中IAA及儿茶酚、槲皮素、绿原酸等酚类化合物含量。     

蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离

[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。     

3种抑菌剂对蛇足石杉内生真菌黑曲霉的抑制效果研究

[目的]探索3种抑菌剂对蛇足石杉内生真菌黑曲霉的抑制效果。[方法]采用平板涂布法分离获得供试菌,用菌丝生长速率法测定3种抑菌剂对黑曲霉的抑制效果。[结果]两性霉素B、苯甲酸钠、肉桂醛对黑曲霉的最低抑菌浓度分别为512.000 00 mg/L、4.00g/L、0.500 00 mg/L;EC50分别为1.910 00、150.000 00、0.120 00 mg/L,EC90分别为88.220 00、730.000 00、0.330 00 mg/L;3种抑菌剂中较优的抑菌剂为两性霉素B。[结论]该研究获得了3种抑菌剂的最低抑菌浓度,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供了试验基础。     

珍稀蕨类植物蛇足石杉药用有效成分研究进展

蛇足石杉由于能治疗阿尔茨海默病(AD)等疾病,因而具有特殊的药用价值,日益受到国内外的关注。本文综述了近年来蛇足石杉药用有效成分如生物碱、三萜化合物等的药理作用及其分离提取工艺,总结了其在医学、基因工程领域的研究进展,为蛇足石杉药用有效成分可持续利用研究提供参考。     

皱边石杉内生真菌ISSR-PCR反应条件的优化

以从皱边石杉中分离纯化出的99株内生真菌DNA为材料,优选出10条ISSR引物(UBC842、UBC848、UBC850、UBC856、UBC861、UBC864、UBC868、UBC873、UBC880、UBC887)的最适退火温度,并对其进行ISSR–PCR反应体系单因素试验及正交试验优化,建立皱边石杉内生真菌ISSR–PCR的优化反应体系,即25μL反应体系中,10×PCR Buffer(Mg2+浓度为2.0 mmol/L)2.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.6μL,引物(10 pmol/μL)2.0μL,Taq E(1 U/μL)1.5μL,DNA模板(10 ng/μL)3μL,无菌ddH2O 15.4μL。以UBC873引物对99株内生真菌基因组DNA进行PCR扩增,初步获知皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性非常丰富。     

烟草内生真菌分布特征研究

从烟草的根、茎、叶中共分离得到619株内生真菌,根据形态特征鉴定出12个属。其中链格孢属(Alternaria)和毛壳属(ChaetomiumKunze)为优势种群,分别占已分离菌株数的24.56%、18.74%。不同组织部位所分离得到的内生真菌在种群及数量上都存在差异:根中的优势属为镰孢属,占到了根中分离菌种数的28.32%;叶和茎中的优势属是链格孢属,分别占到叶和茎中分离菌种数的31.02%和28.88%;表明烟草内生真菌的分布具有一定的组织专一性。     

沙地云杉内生真菌分布

[目的]明确沙地云杉内生真菌的种群分布。[方法]利用传统分离培养方法,分离、培养、鉴定沙地云杉内生真菌的种群组成。[结果]从沙地云杉各部位样品中共分离到内生真菌146株,其中有21株未产孢,经显微镜形态观察鉴定,产孢的125株内生真菌分属于21个属,其中交链孢属为优势属,分离频率为34.93%。[结论]沙地云杉不同树龄、不同部位分离获得的内生真菌在数量、分布和种群上存在一定差异。     

茶树内生真菌的种类及分布

对豫南地区茶树内生真菌的种类及分布进行了初步研究。结果表明,该区茶树内生真菌种类丰富,有7科15属18种,这些真菌由子囊菌与半知菌构成,未发现担子菌与接合菌种类。在这些真菌中,Colletotrichum,Pestalotiopsis sp.1,Phomopsis sp.,Macrophoma sp.1等4种真菌分布普遍,且分离率高,为茶树优势内生真菌。研究还表明,不同茶园茶树内生真菌的群落结构不同,这与茶园的生态环境密切相关;不同的茶树器官,其内生真菌的种类也不同,叶片内生真菌种类最多,未发现种子有内生真菌存在;茶树同一器官不同组织的内生真菌种类不同。     

蛇足石杉的芽胞特性和芽胞繁育技术

[目的]研究蛇足石杉的芽胞特性及芽胞繁育技术。[方法]用植物解剖学方法对芽胞的结构进行了观察和描述,在充分了解蛇足石杉芽胞特性的基础上,建立了芽胞繁育体系。[结果]蛇足石杉芽胞有5胞片和1幼芽构成,极易萌发成新植株。[结论]以芽胞为繁殖材料进行规范种植是切实可行的,同时对缓解其资源压力有重要意义。     

5种切花菊内生真菌的分离鉴定与分布情况研究

研究了5个常见切花菊品种内生真菌的分离鉴定与分布情况,以寻找切花菊自身抗性真菌并为今后开展生物防治提供基础资料。找到了切花菊各部位材料的表面灭菌处理最优方法,发现切花菊内生真菌在分离中出现幼嫩部位内生真菌分离数量明显高于成熟部位,并且根分布最多,叶次之,茎最少。5个切花菊的内生真菌中,镰刀菌属(Fusarium)和枝孢属(Cladosporium)为优势菌群。5个切花菊品种内生真菌的分布存在一定相似度,但不同品种还是存在自己特有的内生真菌,说明切花菊的内生真菌分布有一定多样性。     

蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究

[目的]研究蛇足石杉组织培养的灭菌方法和培养条件。[方法]以野生孢子体茎尖为外植体,先用不同灭菌液单独或配合使用对外植体进行表面灭菌,将表面无菌外植体转到添加多种抗生素和孔雀石绿的培养基上杀灭内生菌,然后将外植体分别接种到不同的培养基上,筛选茎尖培养的最佳灭菌方法和培养条件。[结果]最佳表面灭菌方法为70%乙醇灭菌40 s,0.1%升汞溶液灭菌8 min,70%双氧水溶液灭菌10 min,培养2周,表面无菌率为63%。适宜的杀灭内生菌方法为表面无菌的外植体在附加0.5 mg/L孔雀石绿和100 mg/L抗生素AAS的培养基上培养4~6周,无菌率达52%。适宜的培养基为1/4MS矿质元素+1/2MS有机元素+2%蔗糖+4.5 g/L琼脂,pH5.8。在此培养基上茎尖外植体可生长出新枝,并可再生根。[结论]建立了蛇足石杉茎尖组织培养的灭菌方法且筛选出适合其生长的适宜培养基,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供实验基础。     

蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取研究

[目的]筛选蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳提取条件。[方法]采用纤维素酶酶解细胞壁,从而溶出更多的蛇足石杉细胞中的物质,并设计正交试验选出酶法提取的最佳提取条件。[结果]蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳工艺条件为纤维素酶用量0.125 g,酶解pH4.5,酶解温度60℃,酶解时间2.5 h;在此条件下,蛇足石杉中石杉碱甲的提取率为0.589‰;各因素中温度对纤维素酶的酶解效果影响最大。与酸提法相比,酶法提取的石杉碱甲的提取率提高了40.3%。[结论]该方法简便快捷、提取率高,可用来提取蛇足石杉中石杉碱甲。     

库拉索芦荟内生真菌类群与分布的初步研究

[目的]了解芦荟内生真菌的资源情况和种群多样性。[方法]对来自广东省新会、珠海、潮州、东莞、深圳以及广州市的番禺和黄埔的库拉索芦荟中内生真菌进行分离纯化,并通过诱导产孢试验对其进行分类鉴定。[结果]分别从210块芦荟叶组织和210块根组织中分离到27株和16株内生真菌,带菌率分别为12.86%和7.62%。形态学鉴定结果表明分离的内生真菌属于5个属。Aspergillus、Penicillium和Trichoderma的出现频率均大于0.95%,为芦荟内生真菌的优势种群,而Colletotrichum为新发现属。珠海和潮州的芦荟内生真菌最多,出现频率均为7.14%。从库拉索芦荟叶和根中均分离到Aspergillus和Penicillium,而Colletotrichum和Trichoderma只在芦荟叶中分离到,Chaetomium则只从根上分离到。[结论]不同地点和不同部位的库拉索芦荟组织内生真菌的类群与分布均存在明显差异。