白雪花诱导舌癌细胞凋亡及其作用机制初探

[目的]探讨白雪花诱导舌癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响。[方法]用流式细胞术检测白雪花的石油醚提取物诱导体外培养的人舌鳞癌细胞凋亡作用;以Tca-8113细胞株作为靶细胞,采用原位TRAP法检测端粒酶活性。[结果]浓度8 mg/ml白雪花的石油醚提取物作用人舌鳞癌Tca细胞24和48 h后,凋亡细胞明显增加;白雪花的石油醚提取物对舌癌细胞作用72 h后,端粒酶活性明显降低,且随药物浓度增大,抑制端粒酶活性的作用增强,呈剂量依赖性。[结论]白雪花的石油醚提取物对人舌鳞癌Tca细胞的增殖具有明显抑制作用;其抗癌作用机制可能是通过抑制端粒酶活性,诱导癌细胞凋亡。     

食蟹猴支持细胞的分离、纯化以及不同血清浓度对其增殖的影响研究

[目的]纯化培养食蟹猴支持细胞,并测定不同血清浓度对细胞增殖的影响。[方法]分离并纯化食蟹猴支持细胞后,分别以5%、10%、15%、20%4种不同血清浓度的培养基对食蟹猴支持细胞进行培养。利用MTT比色法判断支持细胞的增殖情况,从而确定最佳的血清培养浓度。[结果]5%血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响与10%血清浓度的培养基差异不显著,15%与20%的血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响差异不显著,5%、10%与15%、20%的血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响差异极显著。[结论]15%的血清浓度是支持细胞增殖的最佳比例。     

花椒提取物对人胃癌细胞增殖及凋亡作用的研究

[目的]观察花椒提取物影响人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的作用。[方法]体外培养胃癌SGC-7901细胞,并用M1T法检测花椒提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用;用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]花椒提取物能显著地抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,并且具有浓度、时间依赖性,且细胞有明显凋亡特征性改变。[结论]花椒提取物具有抗肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡的作用,有潜在的抗肿瘤价值,值得进一步研究。     

海水胁迫下海带提取物对豇豆发育的影响

[目的]探讨海水胁迫下海带甲醇提取物对豇豆的生长效应。[方法]将海水稀释成7种浓度梯度液培养豇豆种子,用25%海水将海带甲醇提取物分别稀释50、200、800和1200倍后培养豇豆种子,10 d后测定幼苗的各项生长指标。[结果]豇豆成苗率随着海水浓度的增加而下降,25%海水的成苗率为22.22%,确定海水的临界浓度为25%。海带甲醇提取物200倍液对豇豆成苗率的提高最明显,比对照提高64.71%。该提取物50倍液对豇豆的生长效果优于其他浓度,其主根长、总鲜重、根鲜重、叶鲜重、叶绿素a与b含量和叶绿素总量分别比对照提高了23.08%、18.27%、31.89%、44.87%、1.29%、1.43%和1.79%。[结论]在25%海水胁迫下海带甲醇提取物对豇豆幼苗生长具有较明显的作用。     

德庆何首乌提取物对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察何首乌提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖及量效关系。[方法]在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的提取物,分别于加药后24、48和72 h用MTT法检测细胞的增殖。[结果]何首乌乙酸乙酯提取物能促进大鼠颅骨成骨细胞的增殖,试验中最佳作用浓度为0.1 mg/ml。[结论]何首乌乙酸乙酯提取物可促进成骨细胞的增值。     

雪菊对肝癌和肺癌细胞体外抗肿瘤作用研究

[目的]研究雪菊不同提取物对体外培养肿瘤细胞的抑制作用。[方法]体外培养人肝癌细胞(7404)及人非小细胞肺癌细胞(A549),用不同浓度的雪菊总黄酮纯化物、粗提物及总多糖分别对细胞作用后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞的凋亡率。[结果]通过MTT的方法得出雪菊不同提取物对7404和A549均有抑制作用,并呈现出浓度和时间的依赖性。流式细胞仪检测总黄酮纯化物能增强7404和A549细胞的凋亡率。[结论]雪菊不同提取物对2种癌细胞的增殖有明显抑制作用,其作用机制可能与增强细胞凋亡有关。     

芪薏术蝎方不同提取物对三氯卡班引起乳腺上皮细胞癌变的修复作用

[目的]本文旨在研究芪薏术蝎方不同提取物对癌变细胞的修复作用。[方法]以芪薏术蝎方水提物、多糖提取物和醇提物3种药物为试验药物,以紫杉醇为阳性对照药物,以三氯卡班(triclocarban,TCC)单独长期处理细胞为阳性对照,以正常乳腺上皮细胞(EpH4-Ev)为阴性对照,以各药物的最大安全浓度为有效工作浓度,将药物和TCC同时加入到EpH4-Ev单层细胞中,以暴露48 h为1个循环周期,连续重复6个周期(T-6)后测定细胞增殖率、细胞内ROS水平、细胞内ERK通路的活化程度、DNA双链断裂程度、细胞的总凋亡率以及非停泊性生长和细胞迁移率等癌症相关的指标,评估药物对TCC长期暴露处理所致细胞癌变的影响。[结果]与阳性对照细胞相比,4种药物均能够显著抑制长期暴露于TCC的细胞发生非停泊性生长和细胞迁移;细胞内ROS水平显著升高,DNA双链断裂程度以及细胞的总凋亡率均显著升高;各药物组细胞增殖率显著下降,细胞内ERK通路的活化程度受到显著抑制。各提取物多数指标优于紫杉醇。[结论]芪薏术蝎方提取物与紫杉醇均能通过促进癌变细胞产生大量的ROS,从而引起细胞增殖抑制,ERK通路抑制,促进癌变细胞DNA损伤和细胞凋亡,最终修复由TCC诱导形成的癌变细胞。     

中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响

【目的】研究中草药单味及复方提取物对原代培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响,旨在为探明中草药治疗奶牛乳腺疾病机制提供试验依据。【方法】采用组织块种植法培养3月龄、分娩后3~5 d的昆明种远交系小白鼠的乳腺组织,采用胰蛋白酶消化法获得相对纯化的小鼠乳腺上皮细胞,并运用SDS-PAGE法进行鉴定。制备5味中草药(重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶)及治疗奶牛乳房炎用中草药复方提取物,分别作用于对数生长期的乳腺上皮细胞5 d,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)分析细胞活力。【结果】将通过组织块种植法与胰蛋白酶消化法相结合,可得到纯化的有酪蛋白分泌功能的乳腺上皮细胞;中草药重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶提取物在其质量浓度分别为8,40,40,1.6,8 mg/mL时,对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用最强;除了紫花地丁,其他4种中草药提取物在其质量浓度为200 mg/mL时,对小鼠乳腺上皮细胞增殖的抑制作用最强。中草药复方提取物质量浓度为8~200mg/mL时,对小鼠乳腺细胞有显著促进作用,随着质量浓度的增加,促增殖作用减弱。【结论】中草药单味及复方提取物在一定质量浓度下对乳腺上皮细胞增殖产生了促进或抑制作用,且中草药复方提取物的适用质量浓度范围较广。     

熟地黄浸提物对培养的小鼠TM4细胞的抑制作用研究

[目的]研究熟地黄浸提物对培养的小鼠TM4细胞的抑制作用。[方法]通过显微镜观察和MTT法研究不同浓度的熟地黄乙醇提取物对小鼠支持细胞系中TM4细胞的影响。[结果]浓度40μg/ml的醇提取物处理组对TM4细胞已经有较明显的抑制作用;而随着处理浓度的增大,这种抑制作用越来越强,当处理浓度达到100μg/ml时,TM4细胞的生长已经基本完全被抑制。[结论]熟地黄醇提取物对TM4细胞的生长和增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性。     

氢化可的松对小鼠T淋巴细胞增殖的抑制作用

[目的]探讨氢化可的松对小鼠T淋巴细胞增殖功能的影响。[方法]用淋巴细胞分离液无菌制备小鼠脾淋巴细胞,于RPMI1640的完全培养基中加入ConA后进行转化。用流式细胞仪检测T细胞活化分子CD25和CD69及其共表达率。将转化的淋巴细胞分成不加氢化可的松的对照组和加入不同浓度的氢化可的松组,在各时间点取样计数,绘制其生长曲线。[结果]经ConA刺激3 d的T细胞上CD25和CD69分子及其共表达率最高,分别达73.5%、58%和32%。生长曲线显示,各组细胞在加氢化可的松后第2 d达到对数生长期,10-5、10-6、10-7mol/L浓度的氢化可的松对活化小鼠T淋巴细胞增殖都有抑制作用,但各浓度组间无显著差异（P〉0.05）,而与对照组相比有显著差异（P〈0.05）。[结论]在一定的浓度范围内氢化可的松对小鼠T淋巴细胞的增殖具有抑制作用,这为细胞移植免疫耐受的诱导提供了试验依据。     

白花丹鲜叶与干叶中白花丹醌含量测定

[目的]比较白花丹新鲜叶及干燥叶中白花丹醌含量的高低。[方法]采用水蒸气蒸馏法提取白花丹叶中的白花丹醌,用高效液相色谱仪检测鲜叶及干燥叶中白花丹醌的含量。[结果]白花丹鲜叶与干燥叶中白花丹醌的含量分别为0.0275%和0.0088%。[结论]白花丹醌的含量新鲜叶比干燥叶高。     

阻断大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化与肿瘤发生相关性研究

【目的】分析骨髓间充质干细胞在体外定向分化为脂肪细胞的适宜诱导条件.阻断正常干细胞的分化过程,探讨肿瘤发生机理.【方法】利用贴壁培养法获得大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),通过地塞米松、胰岛素和吲哚美辛联合诱导大鼠BMSCs,使其分化为脂肪细胞.在细胞分化过程中利用3-甲基胆蒽(3-MC)阻断大鼠BMSCs的分化过程.【结果】大鼠BMSCs分化试验显示:诱导30d后经油红O染色,细胞内可见脂肪细胞特有的红色脂滴沉淀,并且随着诱导时间的延长,油红O阳性细胞比例增加,脂滴增大,表明大鼠BMSCs已成功分化为脂肪细胞.大鼠BMSCs分化阻断试验显示:诱导30d后经油红O染色细胞内红色脂滴沉淀明显下降,表明阻断后的细胞具有脂肪细胞的特性,但分化不完全;形态学鉴定表现出:细胞接触抑制消失,细胞核异常,微核畸变率高,核型异常,表明阻断后的干细胞发生恶性转变.【结论】通过地塞米松、胰岛素和吲哚美辛的联合作用,诱导BMSCs成功向脂肪细胞分化.在BMSCs向脂肪细胞分化的过程中加入阻断剂3-MC,阻断其分化过程,表明干细胞分化过程受到阻断,细胞停止在分化的中间阶段,有转化成肿瘤细胞的趋势.     

信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯(AHLs)诱导铜绿微囊藻细胞凋亡的研究

[目的]研究信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）与铜绿微囊藻细胞凋亡的关系。[方法]以铜绿微囊藻为试验材料,采用5μmol/L AHLs处理铜绿微囊藻细胞,用DAPI染色后观察细胞凋亡的形态。[结果]AHLs在1μmol/L浓度下能诱导铜绿微囊藻的细胞凋亡,从而抑制铜绿微囊藻的生长和增殖。[结论]该研究结果为治理铜绿微囊藻水华爆发提供了科学依据。     

一种荧光素衍生物的表征及活细胞荧光示踪应用

【目的】通过研究荧光素二叔丁基二甲基硅醚(FTBS)的聚集诱导发光效应,将FTBS用于活细胞的长期荧光示踪。【方法】采用荧光素与叔丁基二甲基氯硅烷发生亲核取代,合成荧光素二叔丁基二甲基硅醚;通过测试其荧光发射强度和粒子直径,首次证实其具有聚集诱导发光效应;通过对人宫颈癌细胞株HeLa的染色试验,确定细胞染色时间和浓度。【结果】通过细胞染色,证实FTBS是具有良好细胞通透性的荧光探针,实现基于FTBS的活细胞长期荧光示踪。【结论】基于FTBS的聚集诱导发光效应和良好的细胞通透性,可将其用于对癌细胞及分裂产生的子细胞进行长时间跟踪监测,对于标记癌细胞和监测癌细胞增殖具有一定意义。     

信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）诱导铜绿微囊藻细胞凋亡的研究

[目的]研究信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）与铜绿微囊藻细胞凋亡的关系。[方法]以铜绿微囊藻为材料,采用5μmol/lN-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）处理铜绿微囊藻细胞后,用DAPI染色后观察细胞凋亡的形态。[结果]信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）在1μmol/L浓度下能诱导铜绿微囊藻细胞凋亡,从而抑制铜绿微囊藻的生长和增殖。[结论]该研究结果为治理铜绿微囊藻水华爆发提供重要的科学依据和新颖的治理思路。     

不同溶剂索氏提取的白花丹叶中白花丹醌的含量测定

[目的]测定不同方法提取的白花丹鲜叶中白花丹醌的含量并加以比较,优选出最佳提取溶剂。[方法]采用索氏提取法,选用不同的溶剂提取白花丹鲜叶中的白花丹醌,并通过HPLC测定其含量,从而确定最佳提取溶剂。[结果]测得用氯仿、石油醚(II)、浓度95%乙醇、无水甲醇提取白花丹醌的含量依次为0.511%、0.341%、0.233%和0.191%;用氯仿提取的白花丹醌含量(提取率)最高。[结论]不同方法提取的白花丹鲜叶中白花丹醌的含量差异明显。     

菲律宾蛤仔酶解多肽抗前列腺癌DU-145细胞的活性研究

[目的]探讨菲律宾蛤仔酶解多肽抗人前列腺癌DU-145细胞增殖的活性。[方法]对菲律宾蛤仔内脏进行酶解,经超滤截取3 kD以下的多肽,应用MTT法、倒置显微镜观察和AO/EB染色等方法检测其体外抗DU-145细胞的活性。[结果]MTT法检测结果表明不同浓度的多肽对DU-145细胞有明显的生长抑制作用。通过倒置显微镜观察和AO/EB荧光双染观察到DU-145细胞出现细胞凋亡的形态学特征。[结论]菲律宾蛤仔3 kD以下的多肽具有抑制DU-145细胞生长,呈浓度和时间依赖性,并诱导细胞凋亡作用。     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Caski细胞增殖与凋亡作用的影响

[目的]探讨海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Caski细胞株增殖和凋亡的影响。[方法]MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率,PI单染法测定细胞周期;Hoechst33258/PI荧光染色法观测Caski细胞的形态学改变;RT-PCR法测定宫颈癌Caski细胞株内Bcl-2和Bax基因表达。[结果]海洋珍珠生物提取液在一定浓度范围内,以浓度依赖性和时间依赖性的方式抑制宫颈癌Caski细胞的生长（P〈0.05）.以0、6、30和60μg/ml海洋珍珠生物提取液处理细胞24h,Caski细胞早期凋亡率分别为7.6%,7.15%,18.5%和38.9%,晚期凋亡比例为0.45%、2.85%、8.55%和23.2%。荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变;RT-PCR显示海洋珍珠生物提取液处理后宫颈癌Caski细胞内的Bcl-2mRNA表达降低,BaxmRNA表达升高。[结论]海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性和时间依赖性的方式抑制宫颈癌Caski细胞增殖,并通过降低Bcl-2,升高BaxmRNA来诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。     

红花苷对白血病细胞的抑制增殖和诱导分化作用

[目的]研究红花苷对K562白血病细胞的抑制增殖和诱导分化作用。[方法]以培养的K562白血病细胞为试验对象,通过XTT试验、集落形成试验、血红蛋白联苯胺染色试验以及形态学试验,考察红花苷对白血病细胞抑制增殖和诱导分化作用。[结果]红花苷剂量依赖性地抑制了K562白血病细胞的活性及集落形成(P0.05),形态学观察及联苯胺染色试验也证实了红花苷剂量依赖性地诱导K562白血病细胞向产生血红蛋白的终末细胞分化。[结论]红花苷对K562白血病细胞具有明显的抑制增殖和诱导分化作用。