用单克隆抗体检测枣疯病类菌原体

植物类菌原体(MLO)至今未能人工培养,又不易提纯,因而以前所制备的多克隆血清效价低、特异性差,在使用中存在许多问题.枣疯病是枣树生产的重要病害,为了对枣疯类菌原体进行准确、快速、灵敏的检测,我们利用抗枣疯病 MLO 的单克隆抗体采用间接ELISA 方法测定病枣树,获得了满意的结果.本试验所用病枣树样本采自南京中山植物园。病组织在0.05mol/L 碳酸缓冲液     

‘滁菊’病毒脱除及脱毒苗品质分析

[目的]本文旨在比较3种脱毒方法对‘滁菊’病毒脱除的效果,并对‘滁菊’脱毒苗和非脱毒苗在遗传稳定性、产量和品质等方面的表现进行分析和比较。[方法]采用电镜观察和巢式PCR两种方法检测‘滁菊’8种(类)病毒;比较茎尖分生组织培养、热处理结合茎尖分生组织培养及病毒唑结合茎尖分生组织培养3种脱毒方法的脱毒率,筛选出确定‘滁菊’病毒脱除的最适方法。采用SRAP分子标记技术检测脱毒苗和非脱毒苗的遗传稳定性,并以总黄酮、绿原酸以及鲜花产量等为检测指标,比较脱毒苗与非脱毒苗的产量品质。[结果]病毒检测结果表明:侵染‘滁菊’的主要(类)病毒为菊花B病毒(CVB)和菊花矮化类病毒(CSVd)。热处理结合茎尖分生组织培养和病毒唑结合茎尖分生组织培养脱毒效果较单独采用茎尖分生组织培养脱毒效果好且差异显著,当2种(类)病毒CVB和CSVd都脱除时,脱毒率能达到35.21%、36.62%。3种脱毒方式均能保持‘滁菊’的遗传稳定性。采用脱毒‘滁菊’种苗生产,其在单株产量和品质上都显著优于非脱毒苗‘滁菊’,花直径、单株花数、单株产量分别比非脱毒苗高4.5%、21.2%、24.0%。[结论]茎尖分生组织培养结合热处理或病毒唑处理脱除‘滁菊’病毒效果明显,采用脱毒‘滁菊’种苗生产能有效提高产量和品质。     

枣疯病研究的进展

枣疯病是枣树的毁灭性病害,仅河北省就因该病平均每年毁树40万余株。本病的症状特点为枝叶丛生并且经冬不落。其病原长期被认为是病毒或病毒与菌原体混合侵染,但现已查明为菌原体(MLO),并初步看到 MLO 在寄主体内有季节性变迁规律。目前明确的自然传病媒介有中国拟菱纹叶蝉(Hichimonides chinensis Anufriev),凹缘菱纹叶蝉(Hichimonides sellatus Ulhler)、橙带拟菱纹叶蝉(Hichimonides aurifacialis Kuon)和红闪小叶蝉(Typhlocyba SP)。枣摘病的防治,目前可采用抗病品种,肥水管理,手术治疗、药物治疗和消灭传病媒介等项措施。枣疯病的研究,目前虽已取得很大进展,但仍有许多问题,期待于今后研究明确。     

枣疯病脱除方法及病原检测技术研究进展

枣疯病是对枣具有毁灭性危害的病害。自从20世纪40年代国内外将枣疯病作为枣树病害研究的焦点以来,研究人员对枣疯病脱毒及其检测技术等已进行了大量研究。报道了利用热处理、茎尖培养、试管微嫁接、选育抗病品种、化学防治以及生物防治等技术对枣疯病的脱除方法,以及电子显微镜检测、分子生物学检测等检测技术在枣疯病病原检测中的应用研究现状,并对它们之间的优缺点进行了初步探讨。通过对不同技术的比较,建议在生产中将几种脱除技术及检测方法结合使用,可实现枣树脱除植原体与无病毒化栽培。     

土霉素灌注治疗枣疯病研究初报

<正> 近年来,枣疯病在我国各枣区均有不同程度的发生,其中山东、河北、河南等省尤为严重。在我省内黄枣区,枣疯病严重蔓延,仅1987年就刨除病树13万株,影响了枣区的经济效益。枣疯病的病原是类菌质体(MLO),大量科学研究表明,类菌质体对四环素类药物敏感,因此,多年来,国内外研究人员在利用四环素类治疗由类菌质体引起的病害方面做了许多探索,但由于种种原因,作为一     

生长素类物质对甘薯茎尖分生组织培养成苗的影响

以豫薯4号和豫薯12号为试材,研究了生长素类物质(IBA和NAA)、温度和光照时间对转移后甘薯茎尖分生组织培养成苗的影响.结果表明,适宜甘薯茎尖分生组织培养成苗的温度为28℃,光照时间以不低于14h@d-1为好,培养基中加入0.1～0.5mg/L的IBA(或NAA)有利于甘薯茎尖分生组织培养成苗,IBA的效果优于NAA.与不加任何生长素类物质的MS培养基相比,添加IBA 0.5mg/L的MS培养基可使甘薯茎尖分生组织培养成苗率提高9.9%～15.4%,平均成苗天数缩短3.3～8.5d.IBA(或NAA)浓度过高时(达到1.0mg/L),甘薯茎尖外植体形成大量的愈伤组织,导致成苗率降低,平均成苗天数延长.     

成果介绍

成果主要内容:该研究首次报导了发生在香蕉上的类菌原体病害(暂定名为香蕉簇矮病),并经介体昆虫(香蕉冠网蝽)传病和抗菌素治疗试验,确认其病原是类菌原体(MLO)。系统地进行了流行病学的研究,初步提出了一整套简便易行的综合防治措施,在14多公顷试验地上,连续     

基因枪轰击法将蜘蛛丝蛋白基因(ADF3)转入海岛棉的研究

用海岛棉茎尖作为基因枪转化的靶材料,建立了可重复的海岛棉转化系统.将海岛棉茎尖分生组织经过3～6周的诱导、继代培养生长后,可以形成足够量的再生植株.用含有Npt-Ⅱ基因和蜘蛛丝蛋白基因的质粒轰击新疆海岛棉4个品种茎尖分生组织,在含有70～100mg/l卡那霉素的培养基上筛选、预再生、再生及生根培养,获得的24株抗卡那霉素转基因再生植株.所获得的转基因植株经卡那霉素筛选,再生植株总DNA提取,Southern点杂交分子检测,初步证明有2株转化植株目的基因已整合到海岛棉基因组中,同时也已得到种子.研究为通过植物基因工程的方法以期改良棉花纤维品质提供了一条新的途径.     

甘薯病毒病脱毒及检测

甘薯茎尖分生组织脱毒培养技术是目前防治病毒病最有效的方法。阐述了我国甘薯病的田间症状及病原种类,并综述了茎尖分生组织脱毒及检测甘薯病毒常用的生物学、血清学、分子生物学等几种主要检测技术的特点。     

提高甘薯茎尖分生组织培养成苗率的研究

以豫薯7号、豫薯8号等品种为试材,研究了甘薯茎尖分生组织第二次培养时生长调节剂和温度对培养成苗的影响。结果表明,适宜茎尖分生组织培养成苗的温度为25～28℃。附加GA3lmg·L-1和IBA0．5mg·L-1的MS培养基可使茎尖分生组织培养成苗率提高11％～17％．平均成苗天数缩短7～10d。     

枣疯病和酸枣丛枝病植原体16S rDNA和tuf基因的序列同源性分析

 【目的】枣疯病是枣树上由植原体引起的一种毁灭性病害，遍布于中国华北、西北、华东、华南等25个省(市)的枣区，造成了巨大的经济损失。【方法】经PCR扩增，分别对中国陕西的彬县、阎良、武功、佳县、杨凌，河北沧州和山东德州7个枣区的枣疯病样品和杨凌4个酸枣丛枝病样品植原体16S rDNA基因保守序列和延伸因子tuf基因进行克隆和测序。【结果】获得枣疯病和酸枣丛枝病植原体的16S rDNA基因片段均为1 239 bp，tuf基因均为851 bp。通过序列同源性比较，结果表明中国陕西、河北、山东的枣疯病的病原一致，归属于植原体16S rⅤ-B组。由于枣疯病和酸枣丛枝病的植原体16S rDNA有5个碱基的差异，tuf基因的同源性为99.6%，推测为同一个种的不同寄主生物学型。【结论】首次报道了中国枣疯病和酸枣丛枝病植原体16S rDNA和延伸因子tuf基因的序列，确定了枣疯病和酸枣丛枝病植原体的分类地位，为研究枣疯病植原体的致病分子机理、遗传本质提供理论依据。     

宁薯10号茎尖离体培养及种薯生产

为了保持宁薯10号甘薯品种的优良种性,延长种薯的田间应用年限,运用茎尖分生组织培养,指示植物检测方法获得脱毒苗。结果表明,以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L为宁薯10号茎尖初代培养基,成苗率达94.4%;以6-BA0.2 mg/L+NAA0.05 mg/L为茎切段继代增殖培养基,繁殖系数达2.54倍;宁薯10号脱毒苗产量比对照原品种提高16.5%,达到极显著水平,可大面积推广应用。     

果蔗Badila花叶病茎尖脱毒技术的研究

本文利用热带种 (Badila)茎尖培养进行脱毒研究。试验结果表明 :细胞分裂素是茎尖成苗所必需的激素 ,萘乙酸则不是 ,0 .5- 1 .0 mm外植体在附加 2 .0 mg/ L BA和 0 .2 mg/ L NAA的 MS液体培养基中进行离体培养 ,成苗率可达 30 %以上 ;采用液体培养和在培养基中添加少量的活性炭均能有效地防止酚污染 ,提高成苗率 ;茎尖培养结合热处理能有效地脱除花叶病毒 ,侧芽培养无法进行脱毒。田间调查表明 ,茎尖脱毒苗在光合速率、株高、茎径方面显著优于未脱毒的侧芽苗 ,分蘖数两者相近     

枣疯病植原体的分子检测与同源性鉴定

[目的]采用植原体16S通用引物建立枣疯病植原体PCR检测体系.[方法]采用植原体16S rDNA通用引物R16mF1/R16mR1,对陕西和山西具有枣疯病的枣树植株总DNA进行PCR扩增,获得了相关的枣疯病植原体序列.采用DNAMAN软件分析其同源性,绘制系统进化树.运用pDRAW32软件对17种具有16S rDNA分组的典型的限制性内切酶进行计算机模拟RFLP,确定枣疯病植原体同源性关系.[结果]从陕西和山西的枣疯病的植株中,分别得到1 433 bp和1 432 bp的条带,与已报道的枣疯病植原体比较,同源性达到99;以上,而与其他植物的植原体16S rDNA同源性多低于93;,并且与16S rDNA V-B组的遗传距离最近.pDRAW32软件模拟RFLP结果表明它们和已报道的JWB的RFLP图谱相似.[结论]枣疯病植原体归属于16SrDNA V-B,为枣疯病植原体PCR检测体系提供了理论基础.RFLP分析进一步验证了枣疯病植原体属于16SrDNA V-B,具有随地域变异性较小的特性,这将有利于不同地区枣疯病检测技术的建立.     

枣疯病研究的进展

本文综述了近年来对枣疯病的发生、症状发展过程、症状形成的病生理学基础、传病介体昆虫、病原菌在枣树体内的运行规律以及枣疯病MLO单克隆抗体的检测技术等的研究新进展。     

大蒜鳞芽生长点离体培养诱导小鳞茎的形成

用大蒜鳞芽生长点进行离体培养，结果表明，生长素ＮＡＡ浓度在０．１～１．０ｍｇ／１之间，细胞分裂素６—ＢＡ浓度在０～０．５ｍｇ／１范围内，其浓度愈低愈能促进小鳞茎的形成；贮期温度愈低，愈有利于小鳞茎的形成；３～８℃低温期大于６０天，才能保证小鳞茎的形成。     

马铃薯脱毒快繁抗菌污染的研究

分别加入10、20和50 mg/L的氨苄青霉素、硫酸链霉素、克林霉素及利用3种抗生素(20 mg/L)分别和病毒唑(10 mg/L)的配合使用,研究抗生素及抗生素浓度在马铃薯茎尖剥离及快繁过程中的综合影响。实验结果表明在茎尖剥离阶段,50 mg/L的链霉素对细菌的抗性最好;抗生素的不同浓度对霉菌抗性的效果不同,抗生素种类和浓度的互作对霉菌具有抗性效应,以使用10mg/L的链霉素对霉菌的抗性最好,链霉素 病毒唑组合在茎尖剥离时期对霉菌和细菌的抗性最好;在快繁阶段,以使用20 mg/L克林霉素对霉菌和细菌的抗性最好,但抗生素及抗生素 病毒唑的配比措施对组培苗的生根数、黄化率、生根率均有负效应,所以在马铃薯组培快繁阶段的污染控制主要靠控制环境和操作规程来达到。     

热处理和抗生素对桉树固有内生细菌去除的研究

为获得无内生细菌干扰的尾叶桉组培苗,本试验采用尾叶桉种子干热和湿热处理、组培苗热处理结合茎尖培养及组培苗抗生素处理3种方法去除内生细菌,并用透明染色法和血球计数法对其体内内生细菌的分布及数量的变化开展了研究.结果表明:经种子热处理桉树种苗根部内生细菌含量略高于对照,而茎、叶部略低于对照组;组培苗恒温37℃热处理第20、...     

甘蔗离体培养的变异机理及筛选技术 Ⅳ.茎尖培养技术的筛选

本文对旨在以脱毒为目的的甘蔗茎尖培养技术进行了探讨,茎尖长约2mm,成功的关键在于防止酚的污染,采用液体培养,并在培养过程中将培养物转移到新鲜的培养基中,能成功地防止酚的污染,并使茎尖成苗率达50％以上。促根率达80％以上,结果还表明,细胞分裂素是茎尖成苗所必需的激素,而萘乙酸则不是;侧茎茎尖比主茎茎尖易成苗;适当提高蔗糖的浓度及在培养基中加入活性炭均有利于茎尖苗发根,文中还对防止酚污的机理作了分析。