延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟的研究

[目的]对延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟进行研究.[方法]以延边奶山羊为试验对象,研究不同超排方案对羔羊卵泡发育的影响,比较了羔羊超排处理后与成年母羊卵巢内的卵母细胞体外成熟的差异.[结果]延边奶山羊的最佳超排方案为CIDR＋PMSG 800 IU注射1次＋FSH（加拿大）20 IU/次,间隔12 h注射6次;宁波产FSH超排效果不稳定,卵泡回收率低.成年母羊卵母细胞的体外成熟率显著高于母羔羊超排卵母细胞.[结论]该研究为建立延边奶山羊JIVET技术体系提供依据.     

不同核成熟抑制剂对延边黄牛卵母细胞发育的影响

通过在卵母细胞成熟液中单独添加卵母细胞核成熟抑制剂--次黄嘌呤(hypoxanthine,HX)、异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxantihine,IBMX),研究其对卵母细胞卵丘扩散程度、极体形态以及后期发育的影响.结果表明:抑制剂(HX、IBMX)组卵母细胞卵丘扩散程度与对照组相比差异不显著(P>0.05),抑制剂组第一极体完整率显著高于对照组,但抑制剂组囊胚发育率与对照组相比差异不显著.最终结果提示,虽然HX和IBMX并未明显提高卵母细胞发育潜力,但仍为两种行之有效的核成熟抑制剂.     

透明质酸对绵羊卵母细胞体外成熟与早期胚胎发育的影响

[目的]探讨不同浓度透明质酸对绵羊卵母细胞的体外成熟和早期胚胎发育效果的影响。[方法]以绵羊卵母细胞为试验材料,分别在绵羊卵母细胞体外成熟和体外胚胎培养液中添加0、1.5、3.0、4.5 mg/ml的透明质酸（HA）,研究其对绵羊卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。[结果]当HA浓度为1.5和3.0 mg/ml时,绵羊卵母细胞的成熟率分别为72.54%和62.17%,显著高于对照（P〈0.05）。当HA浓度介于1.5～3.0 mg/ml时,HA对绵羊卵母细胞体外成熟有促进作用。当HA浓度为1.5 mg/ml时,绵羊卵母细胞的卵裂率和囊胚率均显著高于对照组与其他组（P〈0.05）,囊胚细胞总数显著高于其他各组（P〈0.05）。这说明HA可以促进绵羊卵母细胞的早期胚胎发育。[结论]HA不仅可以促进绵羊卵母细胞成熟,而且在细胞分化中也会起作用。当HA浓度为1.5 mg/ml时,最有利于绵羊的早期胚胎发育。     

基于均匀设计优化延边黄牛卵母细胞体外成熟及核移植后卵裂体系

[目的]应用均匀设计对延边黄牛卯母细胞体外成熟及核移植后的卵裂体系进行优化。[方法]用抽吸法回收卵母细胞,在不同条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养。采用均匀设计法,选用U10（10^3）均匀设计,比较了不同的卵巢保存温度、成熟培养时间以及卵泡直径大小对牛卵母细胞体外成熟率及卵裂率的影响。[结果]延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳条件为：在卵巢保存温度为26℃或31℃的条件下,选取直径为8．0mm的卯母细胞成熟培养24h;卵母细胞核移植后卵裂的最佳条件为：在卯巢保存温度为26℃的条件下,选取直径为6．0mm或8．0mm的卵母细胞培养24h。[结论]该结果对延边黄牛或其他种黄牛的育种及种群扩繁具有一定的参考意义。     

EDTA-Na、半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响

在成熟液中添加不同浓度的乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)、半胱氨酸,研究两者对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响。结果表明:(1)将卵母细胞置于100μmol/L的EDTA-Na的成熟液中培养,其成熟率和后期发育率均好于其他浓度组;(2)将卵母细胞置于0.56 mmol/L的半胱氨酸的成熟液中进行培养,成熟率和后期发育率均优于其他浓度组。试验结果证明此两种药的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞体外成熟培养。     

猪卵母细胞体外成熟研究

[目的]探讨猪卵母细胞体外成熟的最佳培养条件。[方法]以NCSU-23为基础培养基,研究不同激素组合和培养时间（36、40、44和48 h）对猪卵母细胞体外成熟的影响。[结果]猪卵母细胞体外培养44 h后,成熟率最高,为81.4%;猪卵母细胞在成熟培养液培养22h后,再在无激素培养液中继续培养22 h时,成熟率最高;添加性腺激素的组成熟率显著高于不添加组,差异显著（P〈0.05）。[结论]在体外成熟培养过程中,添加性腺激素能显著提高猪卵母细胞成熟率。     

次黄嘌呤对小鼠卵母细胞成熟的抑制作用

试验以小鼠为试验动物,研究了次黄嘌呤(HX)对小鼠卵母细胞减数分裂恢复抑制作用,以期更好地掌握小鼠卵母细胞的成熟机制,提高卵母细胞成熟效率。研究表明,①HX能有效地抑制卵母细胞发生生发泡成熟;②HX作为抑制剂对裸卵成熟的抑制作用是可逆的;③在生发泡抑制期间,卵母细胞胞质并没有成熟。结果显示,次黄嘌呤是一种有效的生发泡破裂抑制剂。     

β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

在成熟培养液中添加不同浓度的β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol,β-ME),研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响。结果表明,将卵母细胞置于100μmol/L的β-巯基乙醇的成熟培养液中进行体外培养,其成熟率、卵裂率和囊胚发育率均好于对照和其他处理,说明β-巯基乙醇的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞的体外成熟培养。     

尿嘧啶和ATP对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响

[目的]探究尿嘧啶(Uracil)和三磷酸腺苷二钠盐(ATP)对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响。[方法]在体外成熟培养液中添加不同浓度的尿嘧啶和ATP,研究其对牛卵母细胞体外成熟及激活后孤雌胚胎发育能力的影响。[结果]在成熟培养液中添加50μg/ml尿嘧啶能够显著提高卵母细胞的成熟率、分裂率及孤雌胚胎囊胚率;在成熟培养液中分别添加0、250、500、750μg/mlATP,对卵母细胞成熟率影响不大,但添加500μg/ml ATP能显著提高激活后孤雌胚胎囊胚率。[结论]该研究为牛卵母细胞IVM研究提供了参考资料。     

磷酸二酯酶抑制剂对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响

哺乳动物有腔卵泡中的卵母细胞在体外会自发恢复减数分裂,适当延迟减数分裂的自发恢复,能促进核与胞质成熟的同步化,有利于后续胚胎的发育。本试验研究了磷酸二酯酶3(PDE 3)特异性抑制剂milrinone对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,milrinone抑制山羊卵母细胞体外成熟的时间为6 h,其最佳剂量为100μmol/L,经milrinone处理体外培养28 h成熟的山羊卵母细胞用于孤雌激活,能显著提高孤雌激活胚的卵裂率及囊胚率。说明成熟培养液中添加适当剂量的milrinone,能显著提高体外成熟的山羊卵母细胞的质量。     

“胰岛素-转铁蛋白-硒钠”对山羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

[目的]为提高山羊卵母细胞及胚胎体外培养的效率,探索无血清体外培养体系。[方法]在目前卵母细胞体外成熟及胚胎培养所用的常规培养液中添加1%ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒钠)或以1%ITS分别替代2种培养液中FBS,对山羊卵母细胞及孤雌激活胚胎进行体外培养,检测ITS对其发育率的影响。[结果]添加ITS到卵母细胞成熟液中,对卵母细胞成熟率没有明显提高,但显著提高了其激活后孤雌胚胎的囊胚率(58.06%vs.48.19%);以ITS替代成熟液中FBS,取得了与FBS组相似的成熟率、卵裂率和囊胚率。添加ITS到胚胎培养液中,显著提高了山羊孤雌胚胎的囊胚率(68.30%vs.56.82%);以ITS替代胚胎培养液中FBS,卵裂率与FBS组无显著差异,囊胚率显著低于FBS组(42.33%vs.56.82%)。[结论]ITS对山羊卵母细胞体外成熟及胚胎早期发育均有促进作用;另外,ITS可以替代卵母细胞成熟培养液中的血清,作为无血清培养体系用于相关研究。     

“胰岛素-转铁蛋白-硒钠”对山羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响(英文)

[Objective] The research aimed to enhance culture efficiencies of oocyte and embryo of goat in vitro and to explore serum-free culture system in vitro.[Method] At present,the conventional solutions of oocyte maturation and embryo development in vitro were always added into 1% ITS(Insulin-transferrin-selenium) or using 1% ITS to replace FBS in 2 kinds culture solutions for conducting in vitro cultures of goat oocyte and parthenogenetic embryo.The influences of ITS on their developments were detected.[Result] ITS in maturation liquid of oocytes could not increase oocytes maturation rate but significantly increased blastocyst rate (58.06% vs. 48.19%)of parthenogenetic embryo.If FBS in maturation liquid of oocytes was replaced by ITS, the maturation rate, cleavage rate and blastocyst rate were basically unchanged.Adding ITS into embryo medium could increase blastocyst rate (68.30% vs. 56.82%)of parthenogenetic embryo of goat.If FBS in embryo medium was replaced by ITS,the cleavage rate didn’t change basically,while the blastocyst rate in ITS was obviously lower than that in FBS group(42.33% vs.56.82%).[Conclusion] ITS could promote maturation of oocyte in vitro and early embryonic development, in addition,ITS could replace serum in maturation medium of oocyte as serum-free culture system for conducting relevant researches.     

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养,比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响,并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。【结果】卵巢保存温度为20～25℃时,山羊卵母细胞体外成熟率显著高于卵巢保存温度26～30℃(P=0.021)。蒙古牛卵巢保存于20～25℃时,其卵母细胞成熟率极显著高于卵巢保存在26～30℃(P=0.001)。保存温度为20～25℃时,绵羊、牦牛和奶牛的卵母细胞体外成熟率都较高于卵巢保存温度为26～30℃时的成熟率。另外,牦牛卵母细胞在四孔板中成熟培养的成熟率与在35 mm培养皿中成熟率并没有显著差异(P=0.65)。【结论】绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛的卵巢保存于20～25℃为宜,该卵巢保存温度可提高卵母细胞体外成熟率。牦牛卵母细胞在四孔板中培养的成熟率高于在35 mm培养皿中成熟率。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

不同激素对卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验对比在成熟液中添加不同来源的促性腺激素,即进口的和国产的促性腺激素(FSH+LH)对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。二者对山羊卵母细胞成熟均有促进作用,卵母细胞成熟率都极显著高于对照组(P<0.01),分别为67.3%、68.9%和15.6%,但是它们之间的成熟率差异不显著(P>0.05)。国产激素成本低,使用方便,在卵母细胞体外成熟培养时,完全可以用国产的促性腺激素代替进口的FSH和LH。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响

[目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查,对绵羊不同成熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养19~21 h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体外成熟培养16~18 h(P(0.05),在去核成功率上显著高于体外成熟培养22~24 h(P(0.05);3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不显著(P(0.05),但是体外成熟培养19~21 h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P(0.05)。[结论]体外成熟培养19~21 h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植,可以显著提高囊胚的质量。