鸡副嗜血杆菌（HPG—A221.C668）对10个家系BWEL—SPF鸡胚的感？…

用鸡副嗜血杆菌国际标准株（ＨＰＧ－Ａ２２１．Ｃ６６８０分别接种１－１０个家系的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡６月龄鸡胚,观察攻毒后１６－３０小时鸡胚死亡的情况。结果,第５,７,８家系死亡率为１００％,１,４,６家系死亡率为９０％;２,３,９,１０家第死亡率为８０％。８５％,１０个家系ＨＰＧ平均死亡率为９０．５％。对照组（ＨＷＬ－ＳＰＦ鸡胚）平均死亡率为９０％。     

马立克强毒MDV-GA对BWEL-SPF鸡的感染试验

134只1日龄BWEL-SPF鸡随机分成2组,攻毒组84只腹腔注射2 000 PFU的MDV-GA细胞毒0.2 mL,对照组50只注射同等剂量的病毒稀释液。结果显示,攻毒后27 d攻毒组鸡只开始发病并持续到攻毒后51 d,发病高峰期在攻毒后28~42 d。经过60 d的观察发现,该毒株可以引起很高的肿瘤发生率(61.90%),死亡率为75.00%。肿瘤主要出现在肾脏、心脏、肝脏、性腺、脾脏、肺、胸腺、皮肤、腺胃等组织,其中以肾脏、心脏、肝脏、性腺、脾脏肿瘤发生率较高,分别为:36.90%,28.75%,25.00%,21.43%,17.86%。其中2个以上组织发生肿瘤的个体占44.08%;3个以上组织发生肿瘤的个体占27.38%。多数肿瘤个体同时伴有胸腺、法氏囊萎缩,脾脏、性腺肿大等症状。经过对发病鸡的肾脏作组织切片观察,发现其基本结构已经消失,伴随大量的淋巴细胞和浆细胞浸润,呈现典型的马立克症状。结果表明,利用2 000 PFU的MDV-GA毒株感染BWEL-SPF鸡可以得到大量的肿瘤样本,可用于探讨马立克淋巴瘤内部的基因变化。     

副鸡嗜血杆菌PCR试验及应用

在Ｈｐｇ核酸探针试验基础上设计ＰＣＲ引物和ＰＣＲ试验方法。检测４１株Ｈｐｇ和２６株非Ｈｐｇ证明ＰＣＲ试验特异性好，敏感性比Ｈｐｇ核酸探针高１０００～１０，０００倍。用ＰＣＲ检验直接临床棉拭子样品，与Ｈｐｇ细菌分离结果完全一致。ＰＣＲ试验简便敏感快速，有可能作为一种新方法用于临床Ｈｐｇ诊断。     

副鸡嗜血杆菌人工感染鸡抗体动态的研究

本研究采用阻断ELISA（B－ELISA）和血凝抑制试验（HI）方法,检测了鸡体分别人工感染副鸡嗜血杆菌Hp8株（A型）和H668株（C型）后0－9周的血清抗体消长情况,并绘制了示意抗体曲线。结果表明,Hp8人工感染后,从第2周到第9周,B－ELISA阳性检出率一直保持100％,其中抗体效价在感染后第4周达到效价高峰,平均约为15．2。而H688人工感染鸡则在感染后第7周检出率最高,此后急剧下降。AI方法对A型抗体的阳性检出率亦在在第4－5周达到高峰,而对C型抗体的检出率一直较低。结果进一步显示了B－ELISA良好的特异性和敏感性,为本方法及其试剂盒产品的进一步应用提供了参考。     

蜂胶对鸡副嗜血杆菌的抑菌效果试验

蜂胶是一种具有广谱生物学活性的天然物质,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫功能和促进组织再生等作用,本文就其对鸡副嗜血杆菌的抑菌作用进行了试验.结果表明,终浓度为1mg/ml-5mg/ml的蜂胶乙醇浸出物对试验菌株具有完全抑制作用,终浓度为0.5mg/ml和0.1mg/ml的蜂胶乙醇浸出物对试验菌株具有部分抑制作用,终浓度为0.01mg/ml的蜂胶乙醇浸出物对试验菌株没有抑制作用.     

副鸡嗜血杆菌的初步分离与鉴定

从某鸡场发病鸡中分离出一株细菌，经过病原的分离培养、生化鉴定试验、动物回归试验等实验室方法，初步鉴定为副鸡嗜血杆菌。通过药敏试验筛选敏感药物，对该病的防治起到了积极的效果。     

混合感染中鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从冀南地区某养鸡场患呼吸道疾病的病鸡群采集5份样品（气管和眶下窦分泌物）中，同时分离到鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌两种病原体。通过病原的分离培养、细菌L型检验、生化试验、血清学试验等鉴定，证明分离的鸡毒支原体与国际标准株S6的血清型一致，副鸡嗜血杆菌的血清型为A型，动物试验表明，分离的鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌均具有明显的致病性，说明该病鸡群同时混合感染了鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌。     

鸡传染性喉气管炎、传染性支气管炎和新城疫病毒对10个家系BWEL-SPF鸡或鸡胚的感染试验

用传染性喉气管炎（ＩＬＴ）强毒株感染１０个家系１５０日龄ＢＷＥＬＳＰＦ鸡,观察比较临床症状和剖检所见病变;用传染性支气管炎（ＩＢ）强毒株和新城疫（ＮＤ）疫苗株分别接种这１０个家系的鸡胚,收获胚液并测定其毒价。从而评估这三种呼吸道病毒在每个家系鸡或鸡胚上的敏感性。     

副鸡嗜血杆菌PCR检测方法的建立

参照GenBank中已发表的副鸡嗜血杆菌血凝素（HA）基因设计合成了一对引物,预计扩增片段大小约为412bp。利用这对引物,通过对PCR反应体系和反应条件的优化,建立了针对副鸡嗜血杆菌的PCR检测方法。结果表明,该方法敏感性较高,最低可检出1．7×10^4CFU／mL的副鸡嗜血杆菌,对副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌在相同反应条件下未扩增出任何片段,说明该方法具有较好的特异性。     

二株副鸡嗜血杆菌分离株的生物学特性鉴定

本试验对从广西分离的４株疑似副鸡嗜血杆菌（Ｈ．ｐｇ）（ＧＸ－９５,ＧＸ－９７,ＧＸ－９８－１,ＧＸ－９８－２）进行生物学特性研究。根据生物学特性,ＧＸ－９７和ＧＸ－９８－１被定为Ｈ．ｐｇ,ＧＸ－９５和ＧＸ－９８－２的生化反应特性有明显差异,用标准Ｈ．ｐｇ血清未能定型。交叉血凝抑制（ＨＩ）试验显示,各菌株之间的交叉ＨＩ效价达１６０,但各菌株与其本身的抗血清ＨＩ效价达１２８０,显示出很强的菌株特异性。抗菌素敏感试验也显示ＧＸ－９７、ＧＸ－９８－１和参考菌株的药敏谱更加相似。     

Dot-ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清抗体的研究

本研究建立了检测副鸡嗜血杆菌特异性抗体的Ｄot－ＥＬＩＳＡ方法,结果证明,本方法不与８种常见病原体产生交叉反应,对人工感染和临床病鸡的检出率为８０％,抗原预点膜在４℃可保存５周以上,采用抗原预点膜进行检测可使整 个过程在９０分钟内完成,因此本方法是一种具有较高敏感性和特异性,并且更加快速和简便的鸡传染性鼻炎诊断方法。     

一株A型副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从山东省某蛋鸡场发病鸡群中分离到一株细菌,经培养特性观察、生化试验、V因子生长试验、致病性试验和PCR试验,证实分离菌为一株致病性副鸡嗜血杆菌,血清型鉴定该菌为A型。药物敏感性试验表明分离菌对头孢噻肟、头孢曲松、丁胺卡那霉素高度敏感,对硫酸新霉素、强力霉素中度敏感,对磺胺间甲氧嘧啶钠、环丙沙星、庆大霉素耐药。     

培养副鸡嗜血杆菌用干粉培养基的优化研究

优化副鸡嗜血杆菌干粉培养基配方。通过单因素平行对比配方中碳源、血清、辅酶等营养物质,确定各个因素对副鸡嗜血杆菌生长的影响。研究筛选出了适宜副鸡嗜血杆菌生长的干粉培养基配方：鸡肉蛋白胨、酪胨、多价胨、酵母粉、葡萄糖等,再添加7.5%鸡血清和10 mg/L辅酶Ⅰ,于37℃、5%CO₂恒温培养箱中160 r/min振荡培养14～16 h。优化后的配方更适于培养副鸡嗜血杆菌,为副鸡嗜血杆菌疫苗大规模生产提供了参考依据。     

单抗阻断ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗体的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌Ａ、Ｃ型特异性单克隆抗体的基础上成功地建立了能区分Ａ、Ｃ血清型抗体的阻断ＥＬＩＳ诊断方法,并应用此法对９种常见病原体阳性血清及多份免疫鸡。     

传染性法氏囊病疫苗免疫雏鸡局部体液的免疫学变化

应用间接ELISA法,检测了传染性法氏囊病疫苗免疫雏鸡4种局部体液(泪液、气管液、胆汁、肠液)免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量的动态变化。结果发现免疫雏鸡局部体液3种免疫球蛋白含量较未免疫对照雏鸡均有不同程度地升高;IBD超强毒株攻击后,对照雏鸡上述指标均明显低于疫苗免疫雏鸡,发生典型IBD,并全部死亡,而疫苗免疫雏鸡免疫保护率达60%,表明疫苗免疫后,可增强雏鸡的局部体液免疫功能。     

乳胶凝集试验检测鸡传染性鼻炎血清抗体的研究

将Ａ型和Ｃ型鸡副嗜血杆菌培养后,菌落计数,离心计数,离心后用０．０１ＭｐＨ７．４磷酸盐缓冲液洗涤菌体２次。经过对致敏温度、致敏时间、致敏乳胶的菌体浓度及菌体的处理方式等条件的选择,建立了检测鸡传染性鼻炎血清抗体的乳胶凝集试验。与琼脂扩散试验相比,特异性一致,但更加敏感,且操作简便、快速。结果说明,该方法有较好的应用前景,尤其适用于本病的现场快速诊断。     

Dot—ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗原的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌型特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该菌 Ａ、 Ｃ 型特异性抗原的 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法,结果表明本方法在检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗原时未呈现与其它 ８ 种常见病原体的交叉反应,新鲜肉汤的最低检出量为 Ａ 型 １３×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ和 Ｃ 型 ８×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ,抗原的最低检出量均为 ２５μｇ／ｍ ｌ,对 ２０ 份抗原、肉汤和卵黄样品的检测结果与其已知结果相符。这就证明本方法具有较好的敏感性和特异性,是一种能直接检测分离株血清型的良好方法。