醇、醛类有机物对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛和戊二醛为效应物,研究它们对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:戊二醛对NAGase活力影响不大;低浓度的甲醇和乙醇对NAGase有激活作用;高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇和甲醛对NAGase的作用为可逆抑制.甲醇、乙醇、异丙醇对NAGase表现出竞争性抑制,抑制常数(KI)分别为3.663、0.360和0.480 mol.L-1;甲醛表现为非竞争性抑制类型,其KI为0.288 mol.L-1.     

亚硫酸钠、过氧化氢和尿素对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以亚硫酸钠(Na2SO3)、过氧化氢(H2O2)和尿素为效应物,研究它们对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明,Na2SO3、H2O2和尿素对酶活力有不同程度的抑制作用.Na2SO3和H2O2对酶的抑制均表现为可逆反竞争性类型,它们对游离酶的抑制常数(KI)分别为254.00和136.78 mmol.L-1;尿素对酶的抑制表现为可逆的混合型抑制,它对游离酶的KI和对酶—底物复合物的抑制常数(KIS)分别为379.02和1182.00 mmol.L-1.     

菊花总黄酮对凡纳滨对虾N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的效应

为菊花在凡纳滨对虾健康养殖、疾病预防和饲料添加方面的开发利用提供参考,通过乙醇回流法提取菊花总黄酮,以提取物为效应物研究其对凡纳滨对虾N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响。结果表明:菊花总黄酮提取物对NAGase活力具有明显的抑制作用,其抑制作用属可逆的竞争型抑制,抑制常数KI为0.35mg/mL。     

山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰够-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较

山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase,EC3．2．1．52）比活力为85．30U·mg-1,纯化倍数为10．48．睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537．00U·mg-1,纯化倍数为59．20．睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点p,为5．05．以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP—NAG）为底物研究酶催化底物水解的反应动力学．结果表明：山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5．70和5．60,酶在pH为3．00—8．43时较稳定,而pH〉8．43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活．睾丸NAGase在40℃下处理30min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30min,酶活力保持稳定,酶催化pNP．NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的K分别为0．17和0．21mmol·L-1,k分别为8．82和7．25p．mol·L-1·min-1,活化能分别为57．57和79．47kJ·mol-1．     

全氟己酸对罗非鱼肝脏NAGase的抑制动力学

对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在全氟己酸中水解pNP-NAG活力的影响进行了研究.结果表明,全氟己酸对NAGase具有可逆抑制,IC_(50)为0.29 mg·mL~(-1).应用Lineweaver-Burk双倒数法可知,全氟己酸对NAGase的抑制类型为竞争型抑制,与自由酶结合的抑制平衡常数(K_I)为0.18 mg·mL~(-1).采用底物反应的动力学方法建立全氟己酸对NAGase的抑制动力学模型,其微观速度常数可以在全氟己酸对NAGase的底物反应中求出.     

醇、醛类有机物对中华绒螯蟹N-乙酰毋-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛和戊二醛为效应物，研究它们对中华绒螯蟹N·乙酰·归国·氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响．结果表明：戊二醛对NAGase活力影响不大；低浓度的甲醇和乙醇对NAGase有激活作用；高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇和甲醛对NAGase的作用为可逆抑制．甲醇、乙醇、异丙醇对NAGase表现出竞争性抑制，抑制常数（K）分别为3．663、0．360和0．480mol·L^-1；甲醛表现为非竞争性抑制类型，其K1为0．288mol·L^-1．     

河田鸡与艾维菌肉鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的特性比较

河田鸡和艾维菌肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54．84U·rag～,纯化倍数为8．86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）制剂．艾维菌肉鸡睾丸NAGase经SephacryS-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171．50U·mg-1,纯化倍数为19．8倍的NAGase制剂．以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学．结果表明：河田鸡和艾维菌肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5．6、5．7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3．0—9．2、4．0-9．2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数（k）分别为0．223、0．319mmol·L-1,最大反应速度（k）分别为9．438、6．238μmol·L-1·min-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85．74、73．47kJ·mol-1．     

PUGNAc对罗非鱼肝脏NAGase的抑制动力学

探究PUGNAc对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的抑制作用.通过建立PUGNAc对NAGase的抑制动力学模型,表明PUGNAc对NAGase的抑制是一种缓慢的、可逆的反应,IC_(50)为0.18μmol·L~(-1),抑制类型为混合性;与自由酶结合的抑制平衡常数K_I为0.110μmol·L~(-1),K_(IS)为0.827μmol·L~(-1);微观速率常数k_(+0)大于k′_(+0),表明游离酶分子比抑制剂存在下的酶—底物复合物更脆弱,从而推测底物的存在对PUGNAc抑制下的NAGase起着保护作用.     

河田鸡与艾维茵肉鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的特性比较

河田鸡和艾维茵肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54.84 U.mg-1,纯化倍数为8.86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)制剂.艾维茵肉鸡睾丸NAGase经Sephacry S-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171.50 U.mg-1,纯化倍数为19.8倍的NAGase制剂.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:河田鸡和艾维茵肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5.6、5.7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3.0-9.2、4.0-9.2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数(Km)分别为0.223、0.319 mmol.L-1,最大反应速度(Vm)分别为9.438、6.238μmol.L-1.m in-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85.74、73.47 kJ.mol-1.     

山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较

山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)比活力为85.30 U.mg-1,纯化倍数为10.48.睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537.00 U.mg-1,纯化倍数为59.20.睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点pI为5.05.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5.70和5.60,酶在pH为3.00-8.43时较稳定,而pH>8.43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活.睾丸NAGase在40℃下处理30 min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30 min,酶活力保持稳定,酶催化pNP-NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的Km分别为0.17和0.21 mmol.L-1,Vm分别为8.82和7.25μmol.L-1.min-1,活化能分别为57.57和79.47 kJ.mol-1.     

有机溶剂对中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)为研究对象,探讨10种有机溶剂对酶活力的影响。结果表明:甲醇、乙醇、正丙醇、乙二醇、丙三醇、二甲亚砜、二氧六环和丙酮对NAGase的作用均表现为低体积分数时有一定的激活作用,高体积分数时转化为抑制作用;而正丁醇在0%~55%范围对NAGase表现为激活作用;甲醛对NAGase的抑制作用则呈现明显的浓度效应。进一步研究甲醛和丙酮对NAGase的作用机理,结果显示:甲醛对NAGase的抑制作用是一个可逆过程,而低体积分数丙酮对NAGase的激活作用和高体积分数丙酮对NAGase的抑制作用均属于可逆过程。说明不同有机溶剂对NAGase活力有不同的影响,NAGase在不同体积分数有机溶剂中的催化作用存在差异性。     

患红体病凡纳滨对虾肝胰腺NAGase基本性质的改变研究

[目的]为虾养殖过程中红体病的诊断和控制提供重要的理论依据。[方法]分别测定健康和患红体病的凡纳滨对虾（Litopenaeus vanname）的肝胰腺N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3.2.1.52,NAGase）的比活力及其性质差异。[结果]2种来源NAGase的比活力、基本酶学性质等均存在差异。对虾患红体病后,肝胰腺NAGase的比活力和最适温度下降,但催化反应动力学常数Km、Vm值和活化能上升。[结论]该研究表明NAGase与对虾患病可能存在着密切关系。     

曲酸对小菜蛾酚氧化酶抑制作用的研究

 研究了曲酸对小菜蛾酚氧化酶的单酚酶和二酚酶活力的影响并初步探讨了其抑制作用机理，结果表明,曲酸对小菜蛾酚氧化酶的单酚酶和二酚酶活力均有抑制作用，其I50分别为0.07 mmol·L-1和1 mmol·L-1。曲酸对单酚酶活力表达的迟滞时间有明显的延长效应，对二酚酶的抑制作用表现为典型的可逆竞争型抑制类型，其抑制常数Ki为0.47 mmol·L-1。曲酸与酚氧化酶中催化氧化反应活性中心的Cu2+鳌合可能是其产生抑制作用的重要原因。金属铁离子可明显地缩短单酚酶的迟滞时间，但对单酚酶的活力无明显影响。     

猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究

 【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定;采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17 606.15 U•mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖（pNP-NAG）水解的最适pH为5.5,最适温度为50℃。该酶在pH 3.0～8.9区域较稳定;在45℃以下处理30 min,酶活力保持稳定。酶分子中亚基的分子量为58.03 kD,等电点为9.42。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为1.94 mmol•L-1,最大反应速度Vm为27.53 µmol•L-1•min-1。酶催化pNP-NAG反应的活化能为88.73 kJ•mol-1。【结论】本试验选用的分离纯化的方法是可行的。     

茶叶提取物对N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的调控

采用乙醇浸提法提取绿茶中的有效物质,紫外光谱特征显示,提取物主成分为二氢黄酮类物质;绿茶提取物对N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性具有显著的抑制作用;绿茶提取物对NAGase的作用属可逆的竞争型抑制,抑制常数K1为0.16 mg/mL.     

甜菜夜蛾多酚氧化酶的特性及其对曲酸等抑制剂的反应

 以甜菜夜蛾5龄幼虫为试材提取多酚氧化酶,经40%饱和度硫酸铵沉淀、SephadexG-100凝胶过滤等步骤部分纯化后,总活力回收率为26.67%,酶活力提高8.56倍。以邻苯二酚为底物,测得该酶反应的最佳条件:pH=6.5,T=40℃,米氏常数Km=10.73mmol·L-1。研究了曲酸、香草酸等5种化合物对该酶活力的影响,结果表明,除芦丁外均对其酶活力产生一定的抑制作用,其中以曲酸抑制力最强,其抑制中浓度I50为36.71g·ml-1。曲酸对该酶活力的抑制动力学研究表明,该化合物是典型的可逆竞争型抑制剂,     

黄芪多糖对实验性乳腺炎山羊血清及乳中生化指标的影响

选择同处于泌乳初期的6头睢宁白山羊为试验动物,于左、右乳区分别灌注黄芪多糖和生理盐水5 mL,连续灌注5 d,第6天注入大肠杆菌内毒素诱导产生山羊实验性乳腺炎。于注入内毒素前1 h及灌注后3、6、9、24 h取颈静脉血和采集乳样,测定乳液及血清中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛含量(MDA)等指标。结果表明:与灌注内毒素前相比,灌注生理盐水的对照乳区乳中的NAGase活力在注入内毒素后9 h时达到峰值(23.95 U/mg),而灌注黄芪多糖的试验乳区乳中的NAGase活力6 h时达到峰值(28.29 U/mg),24 h时乳中NAGase活力已下降到灌注内毒素以前的水平。山羊乳导管注入内毒素后,2种处理的乳区乳中的总抗氧化能力显著下降,乳中MDA的含量显著升高,SOD活力显著下降;2种处理的乳区乳之间比较无显著差异。     

农药胁迫下溞类生物量与水体中NAGase活性的关系

为探索游离态N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(简称NAGase,又称壳二糖酶)作为农药对水生节肢动物胁迫效应指示因子的可行性,将大型溞、多刺裸腹溞、老年低额溞作为受试生物,虱螨脲、丁醚脲、乙螨唑作为受试药剂,研究了游离于水中的NAGase的活性与溞类生物量之间的对应关系。以全部63个被暴露群体的生物量为自变量(x),以相应群体释放到水中的NAGase的活性为应变量(y),得到回归方程y=0.000 603x+0.004 33,该方程的r值和P值分别为0.687和0.00。两者之间的对应关系证明了利用水中NAGase活性来预测被暴露群体生物量的可行性。进一步的研究显示,作为胁迫因子,乙螨唑在高浓度(1.6μg·L-1)下促使溞类群体萎缩,NAGase活性下降则相对滞后。涉及10种农药的离体试验表明,农药直接影响NAGase活性的最低浓度远高于其在野外水体中可能存在的最高浓度,说明农药实际上不可能通过直接影响酶活性(无论是诱导,还是抑制)来干扰被暴露群体的生物量预测。     

几种低分子量有机酸、磷酸对土壤胶体和矿物吸附酸性磷酸酶的影响

 研究了有机酸根和磷酸根等配体体系中 ,针铁矿、高岭石和黄棕壤、砖红壤胶体对酸性磷酸酶的吸附。结果表明 ,磷酸根对针铁矿表面酶的吸附量抑制最显著 ,酒石酸根对酶与土壤胶体和高岭石表面酶的吸附量影响最强。随着配体浓度增加 ,乙酸根对酶吸附的影响表现为先促进 (0～ 10mmol·L-1)后轻微抑制 (>10mmol·L-1) ;草酸则表现为先抑制 (0～ 5mmol·L-1)后促进 (5～ 5 0mmol·L-1) ;酒石酸和磷酸对酶的吸附表现为一直抑制。在乙酸、草酸和低浓度的酒石酸和磷酸根体系中 ,酶在土壤胶体和矿物表面的吸附等温线符合Langmuir方程 (L型 ) ,高浓度的酒石酸和磷酸对应的吸附等温线符合线性方程 (C型 )。在酒石酸根和磷酸根体系中 ,配体与酶加入顺序对酶吸附的影响较大 ,一般来说 ,配体和酶同时进入体系具有最低的酶吸附量。     

黑白花乳牛腕关节滑液某些成分的研究

检测了黑白花乳牛3个年龄组腕关节滑液中 N-乙酰-β-D 氨基葡萄糖苷酶(NAG)、果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)、碱性磷酸酶(AKP)各酶活性和总蛋白(TP)含量。结果表明:初生犊牛组 NAG、ALD、AKP、TP 值均极显著地高于2岁龄和成年乳牛组(P<0.001);2岁龄乳牛组与成年乳牛组之间无显著差异(P>0.05)。