硅磁微球的制备及其在植物核酸分离纯化中的应用

本文采用改进的共沉淀方法制备Fe₃O₄纳米粒子,并利用表面活性剂柠檬酸对其表面改性;然后利用溶胶凝胶法,催化TEOS水解和缩合反应,使SiO₂包裹在Fe3O4纳米粒子表面,成功制备出了Fe₃O₄@SiO₂复合纳米粒子。结果表明,Fe₃O₄@SiO₂复合纳米粒子粒径在200-400 nm之间,粒径均匀,具有超顺磁性,磁响应时间在10-20 s,半沉降时间在20 min。根据高盐吸附低盐洗脱原理,建立了一种以磁性微球为载体的核酸快速提取和纯化方法。在白桦基因组DNA提取中,OD260/OD280均在1.8左右,OD260/OD230均在2.0以上,提取的质量和浓度比传统方法要好。在白桦RNA提取过程中,OD260/OD280和OD260/OD230均在2.0以上,提取的RNA浓度要比传统方法更高。磁珠法与传统方法比较时,核酸提取纯化效果上更佳,提取速度快、安全、成本低,具有很高的推广价值。     

一种高效的草莓总核酸提取方法

探索一种新的适合草莓组培苗、大田苗总DNA的快速高效提取方法。试验以草莓叶片为材料,用改良CTAB法对其DNA进行提取,并对提取的DNA进行了电泳检测、浓度测定。结果表明,提取的DNA具有清晰的条带,且无明显降解。D260/D280为1.79～1.96,具有较高的纯度,且含量高。用该法提取的DNA可满足进一步的分子生物学试验要求。     

一种简便快速制备水稻PCR模板的方法及其应用

目前在水稻分子生物学实验中DNA提取的常用方法有CTAB提取法和SDS提取法。CTAB提取法提取的DNA质量高而且量大，主要用于RFLP、Southem杂交等实验；SDS方法提取的DNA杂质略多，也可以大量提取，适合用于基于PCR的分子标记实验。但这两种DNA提取方法所需成本较高，技术性强，叶片用量大，难以满足水稻育种实践的需要，实用性不强。因此，在水稻分子育种实践中，急需一种叶片用量小、提取程序简单快捷的方法提取DNA，以满足开展分子标记辅助选择育种、分子标记快速检测种子纯度等应用研究的需要。许多分子标记都基于PCR技术，如AFLP、SSR、RAPD、SNP、EST等。目前已开发出大量的水稻SSR标记。由于水稻基因组中存在着丰富的SSR标记而且多态性较好，在水稻群体分子标记连锁图谱构建、基因定位、QTL分析等研究中广泛应用，在水稻种子纯度鉴定和分子标记辅助选择育种方面已有研究报道。本文报道了一种简便的DNA提取方法，既能快速提取DNA。又只需要少量叶片，同时利用SSR标记鉴定了“两优培九”种子的纯度。     

一种改良的鞘翅目昆虫核酸的提取方法

介绍了一种简单快速地提取鞘翅目昆虫核酸的方法.以异色瓢虫和青杨脊虎天牛为试验材料,采用改良的CTAB法分别提取这2种昆虫不同部位的核酸.电泳检测和紫外分光光度分析结果表明,改良的CTAB法提取的DNA和RNA具有较高的质量和纯度,其A260/A280分别为1.7～1.9和1.9～2.0.RT-PCR和ISSR-PCR分析结果表明,利用该方法提取的总RNA和总DNA可用于基因克隆和分子标记等下游技术实验.     

一种快速纯化相思子凝集素的方法

介绍了一种快速提取、纯化相思子凝集素(Abrus agglutinin,AGG)的方法。以Sepharose 6B(琼脂糖凝胶)为亲和层析介质,结合Hiload 26/60 Superdex 75凝胶层析柱,粗提物经2步层析分离纯化,获得了高纯度的AGG。SDS-PAGE电泳时其相对分子量约为65.4 kD,凝集兔红细胞的最小浓度约为0.5μg/mL,LD50为3.6 mg/kg。采用该方法可从相思豆中快速制备高纯度AGG。     

8种随机引物扩增鳜鱼病毒核酸的初步研究

从感染鳜鱼病毒（Siniperca chuatsi virus)的鳜鱼中分离病毒，提纯核酸作模板，用8种带酶切位点的引物，进行病毒酸随机扩增，探讨了在多聚酶链反应（RCR）过程中，引物长度，Mg^2 浓度和生温度对获得扩增带谱的影响。     

从感染叶片中提取柑橘衰退病毒总核酸3种方法的比较

用分光光度计检测微量抽提法、Trizol法和氯化锂法提取的CTV总核酸,再用RT-PCR和实时RT-PCR法检测,结果表明：3种抽提方法均可以获得CTV的总核酸,其中Trizol法获得的总核酸质量最好,平均浓度为329.3521（μg/mL）,A260/A280平均值为1.8052;进行RT-PCR反应后电泳条带亮度最强;实时RT-PCR显示其Ct值最小.氯化锂法与微量抽提法获得的总核酸质量差异不大,但是微量抽提法更为简便快捷.     

SARS-COV结构蛋白N的核酸PCR扩增

[目的]探讨SARS-COV结构蛋白的PCR扩增条件。[方法]采用正交试验对SARS全基因组进行PCR反应筛选目标片段,确定退火温度、模板浓度、聚合酶量、引物浓度P、CR延长时间对于PCR反应的影响。[结果]结果表明,在退火温度55~60°C、模板浓度5 mg/ml加入1μl、DNA聚合酶加入0.25μl、引物浓度25 pmol/LP、CR反应时间为60 s时,DNA回收量最高,为4.37μg。[结论]该研究为SARS冠状病毒核酸的转录和复制提供科学依据。     

一种简便高效的大豆基因组DNA快速提取方法

CTAB或者预混试剂盒是当前提取植物基因组DNA的常用方法,提取步骤比较繁琐,提取时间较长且在提取过程中会用到易制毒试剂,具有一定风险性。探索一种适用于植物基因组DNA的绿色不易制毒、操作简单、效率高和耗时短的提取技术,不仅可以节省时间,还能提高效率,避免易制毒试剂对人身和环境的危害。基于上述目的,本研究借鉴其他作物快速高效提取基因组DNA的方法,基于NaOH裂解法建立了一个简便快速提取大豆基因组DNA的技术方法。该技术方法能满足常规分子辅助育种的高通量样品基因组PCR检测,具有一定的利用价值和应用前景。     

奶牛瘤胃胃液微生物总DNA的提取和纯化

本研究建立了从奶牛瘤胃液中提取混合微生物总DNA的方法，对现有的方法进行改进使其适合于瘤胃混合微生物总DNA的提取。粗提后的瘤胃DNA可以直接扩增出16SrDNA。提取效率为每毫升瘤胃液的DNA提取量为0.1～0.3μg。通过SiO2回收进行纯化，纯化回收率达到34%～50％；用clean-up试剂盒纯化，纯化率可达到85％以上。经过纯化后的DNA可进行其它的分子生物学操作。     

一种适于甜菜RAPD分析的DNA快速提取方法

实验用CTAB法、SDS法Ⅰ及SDS法Ⅱ提取甜菜叶片DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度.实验表明,CTAB法所提取甜菜总DNA的纯度高,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定.CTAB法是作为甜菜RAPD分子标记研究的最佳DNA提取方案.     

一种快速提取野生稻总DNA的方法

在常规CTAB的基础上建立一种快速提取纯化野生稻总DNA的方法，这种快速提取法能在短时间内处理大批量的材料，具有简便、快速、经济、稳定等优点。用这种方法提取的DNA作为模板进行PCR扩增，和用常规的CTAB法提取的DNA作为模板结果一致。因此，用这种方法提取的DNA质量完全可以满足植物分子标记分析的需要。     

一种适用于PCR的环境友好型高质量植物DNA提取方法

改进DNA提取方法，利用含2%CTAB、1%SDS、2% PVP、100 mmol/L Tris-Cl (pH8.0)、20 mmol/L EDTA (pH8.0)和1.4 mol/L NaCl的DNA提取缓冲液，提取了不同种属12种植物的DNA，并对其进行了PCR检测．结果显示，所提取的DNA符合PCR试验要求，用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带．该方法无需酚仿抽提，简单、高效、环保，特别适合大规模植物DNA的提取．     

天津海底淤泥微生物DNA的提取方法研究

[目的]探索一种快速、高效提取海底淤泥中微生物DNA的最佳方法,为开展海底淤泥微生物的分子生物学研究奠定基础。[方法]分析了不同DNA提取液浓度和不同的腐植酸去除方法对淤泥中微生物DNA提取的产率、纯度的影响,探讨天津市海底淤泥中微生物DNA提取的最佳方法。[结果]海底淤泥用焦磷酸钠和氢氧化钠混合浸提剂提取腐植酸后,再用蒸馏水洗去浸提液,用4 ml DNA提取液提取,所得DNA的产率及纯度均优于对照组。[结论]该试验结果为海底淤泥微生物的分子生物学研究奠定了基础。     

一种快速高效适于柑桔AFLP分析的DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8～1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.     

不同环境中土壤微生物总DNA的提取与纯化

采用SDS高盐缓冲液抽提法提取了林地、厂区、菜地3种不同环境中土壤微生物总DNA,结果表明,该方法可以从土壤微生物中提取到长度大于23.1kb的DNA;不同环境中提取的DNA产量和纯度都存在一定的差异,每克干土的DNA提取量介于53.55~579.93μg之间,其中以处于原始状态的丛林提取量最高。粗提的土壤微生物DNA采用酚氯仿和柱式腐殖酸去除剂进行纯化,纯化后的土壤微生物DNA可以用于PCR扩增,使用细菌16SrDNA基因的引物可以扩增到相应的片段。     

一种简便实用的玉米干种子基因组DNA提取方法

利用改良的CTAB法提取玉米干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,表明获得的DNA样品纯度较好、无明显降解,DNA质量可满足下游分子生物学实验要求,证实该方法是提取玉米基因组DNA的一种有效方法.     

落叶松-杨栅锈菌DNA提取新方法研究

对提取DNA“二球法”的一些步骤和提取成分进行了更新,使得PCR反应灵敏性显著增加。改进的 内容包括:(1)在有二钢珠和1．6 g／L Chelex的离心管中加入夏孢子,夏孢子可以来自带有风干寄主叶肉组织的夏 孢子堆;(2)在离心管中加入KOH而不是NaOH,然后剧烈斡旋30 min;(3)将离心管管底穿一小孔,套上一新离心 管,短暂离心甩出内容物。用该方法得到的DNA可用作ITS-nrDNA-PCR,RAPD和SSR的底物。同时,分析了 PCR扩增中提取上液的稀释倍数,发现RAPD和SSR扩增稀释倍数达到16倍以上有较好的反应结果。     

青稞及其加工制品的核酸提取方法的研究

【目的】从青稞及其制品中提取高质量的基因组DNA。【方法】选择改良的CTAB法、Tiangen核酸提取法和Qiagen核酸提取法,对所提取的核酸分别选用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光PCR法对各种方法提取的核酸进行质量评估。【结果】从实验的青稞及青稞制品中都可以提取到高质量的DNA,为后续青稞的真伪鉴别、溯源分析以及基因组检测奠定基础。【结论】青稞种子、糌粑粉、青稞谷物棒、青稞糕点、糌粑饼干、藏舒茶更适合用Tiangen核酸提取法,青稞精华片和青稞酵素则更适合用CTAB改良法+纯化法。