抗烟草青枯菌菌株的分离、鉴定和发酵条件研究

烟草青枯病是一种全球性的土传性病害,其危害严重,每年都给烟草行业带来巨大的损失.筛选对烟草青枯 病的致病菌青枯劳尔氏菌有较好拮抗作用的菌株,用分子生物学方法鉴定其种属,并对拮抗菌株的发酵条件进行 初步研究,为烟草青枯病生物防治奠定基础.测试菌共246株,来自从土壤样品中分离得到的155株菌株和实验室 保藏91株.以强致病青枯菌为测试菌,用双层平板法筛选得到2株拮抗菌.16SrDNA 序列分析表明,这两株分别 为娄彻氏链霉菌和短小芽孢杆菌.对活性较好的链霉菌开展进一步的发酵条件研究,初步获得活性最佳的发酵条件 和生物量最大的培养条件.为防治烟草青枯病提供了新的菌株.     

花生品种(系)对青枯菌的抗性鉴定

在大田中用菌液浸种法对 1 0 8个花生品种 (系 )对福建地区青枯病菌的抗性进行鉴定 .结果表明 :供试花生品种 (系 )中没有高抗品种 (系 ) ;中抗品种 (系 )有金花 1 0 1 2、泉花 1 0号、泉花 646、粤油 1 93、3 8F5-45 -2 1 -CS1 等 3 0个 ,占全部供试品种的 2 7.78% ;其余均为感病品种 (系 ) ,占 72 .2 2 % .花生不同品种 (系 )对青枯菌的抗性差异显著     

青枯假单胞杆菌运动性的分子研究技术

通过检测,从１０７株野生型青枯假单胞杆菌菌株中获得３０株具有明显运动性的野生型菌株。运用分子技术克隆到控制运动性的基因,并将控制运动性的基因导入不同菌株,从而获得运动性不同的各种工程菌株。运用这些工程菌株进行趋向性和致病性测定,初步试验表明,有运动性的野生型青枯假单胞杆菌菌株具有比非运动性的野生型青枯假单胞杆菌菌株更强的趋向性和致病性。     

白肋烟青枯菌的分离鉴定及药敏性研究

[目的]分离鉴定白肋烟青枯菌并测定该菌对6种杀菌剂的药敏性。[方法]采用半选择培养基（PCCG）和聚合酶链式反应（PCR）技术相结合的方法,对四川省达州市白肋烟茎秆中的青枯菌进行分离,并对其生化型进行了鉴定;通过药敏试验,研究了所得青枯病菌在实验室条件下对叶枯唑、乙蒜素、农用硫酸链霉素、石硫合剂、47%聚赖氨酸、99%曲酸6种杀菌剂的敏感性。[结果]共分离得到23株青枯菌,均为生化Ⅲ型。分离所得青枯菌株对乙蒜素、农用硫酸链霉素、叶枯唑较为敏感,其中乙蒜素对烟草青枯病菌有良好的防治效果,其EC50为0.086 ml/L。[结论]为白肋烟青枯病的防治提供了理论依据。     

安徽省姜青枯假单胞菌生物型鉴定初报

根据海沃德制订鉴定青枯假单胞菌生物型的方法,对舒城、铜陵、桐城、临泉、阜阳、全椒、巢县、屯溪和休宁等9县市分得的32个菌株进行鉴定。其中4个菌株SC78、SC710、SC81和SC93能利用乳糖、麦芽糖和纤维二糖,不能利用甘露醇、山梨醇和甜醇,属生物型Ⅲ;其它28个菌株则相反,属生物型Ⅳ。生物型Ⅲ的4个菌株是由前作番茄、辣椒和茄子田中的姜瘟病株上分得的;它对姜株致病力较生物型Ⅳ弱。     

茄科作物青枯病原菌的脂肪酸鉴定

 【研究目的】采用脂肪酸鉴定技术对茄科作物青枯病原菌进行鉴定,以期为青枯病的预防与防治提供技术支持。【方法】采用选择性培养技术对茄子、番茄和辣椒病株进行青枯病原菌的分离和纯化,而后对青枯病原菌进行脂肪酸鉴定。【结果】经选择性培养分离得到的36株青枯病原菌中,有33株鉴定为典型的青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）,占91.67%;茄子、番茄和辣椒上的青枯病原菌被鉴定为青枯雷尔氏菌的比例分别为100%、90%和89.47%。【结论】脂肪酸鉴定技术具有快速性、准确性,并可通过计算机的运用使分类达到数据化、自动化,可在茄科作物青枯病的检测中得到广泛的应用。     

青枯雷尔氏菌致病机制及其相关基因的研究进展

阐述青枯雷尔氏菌致病基因以及它们之间的相互调节。由于青枯雷尔氏菌的复杂性,进而发展了许多青枯雷尔氏菌分子鉴定技术,并且对青枯雷尔氏菌的鉴定逐渐走向快速、便捷和灵敏高的趋势。青枯雷尔氏菌基因组约5.8Mb,具有高(G+C)含量和约5 120个可能的编码基因;它是由3.7Mb的染色体和2.1Mb的大质粒所组成,主要的致病因子有Ⅲ型hrp分泌系统产物、胞外多糖、细胞壁降解酶(包括果胶质酶以及纤维素酶等),其涉及的基因主要包括hrp基因簇、avr基因、毒性基因;青枯雷尔氏菌通过Ⅲ型分泌系统(T3SS)、II型分泌系统(T2SS)等分泌系统将多种毒性因子输送到胞外使寄主植物致病。同时,T3SS和T2SS之间也是相互影响的。上述致病因子的协调作用是由一个复杂的网络调节系统控制的,并以PhcA调节基因的启动和转录为核心,自动而精密地调节有关致病基因的表达及关闭,从而控制细菌的生长状态。     

植物青枯菌致病因子研究

植物青枯菌致病因子研究中国农业科学院植保所康耀卫，毛国璋植物细菌性青枯病（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ），简称青枯病，是一种世界性分布的重大病害。青枯菌可以为害多种植物，据最近报道其可侵染４４个科数百种植物，比５０年代初记载的３３个...     

醋菌纤维素高产菌株筛选和菌物鉴定

从１５０份自然材料中分离得到了２６个产纤维素菌株。其中,Ａｘ－１、Ａｃ－Ⅱ两高产菌株初步鉴定为巴氏醋杆菌木醋亚种（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｔｉｎｕｓ Ｓｕｂｓｐ．Ｘｙｌｉｎｕｍ）和汉森醋杆菌（Ａ．Ｈａｎｓｅｎｉｉ）。该二菌株在２８℃～５ｄ静态培养中,从５０ｇ／Ｌ蔗糖（或葡萄糖）培养液中产出１４ｇ／Ｌ或１６ｇ／Ｌ纤维素,并初步测试了该纤维素的基本特性。     

2株真菌的鉴定及对禾谷孢囊线虫的防治效果

【目的】生防菌株的种类鉴定及对禾谷孢囊线虫Heterodera avenae的防治效果。【方法】以形态学特征和rDNA-ITS序列比对及系统发育树分析相结合的方法鉴定生防菌的种类,测定菌株A1和B1发酵液对孢囊、卵和2龄幼虫的活性及对小麦孢囊线虫病的盆栽防治效果。【结果】菌株A1和B1分别鉴定为寄生曲霉Aspergillus parasiticus和长枝木霉Trichoderma longilbrachiatum。处理14 d后,A1和B1的菌丝对线虫孢囊的寄生率可达80.00%以上。处理12 d后,菌株A1和B1的发酵液原液对卵孵化的抑制率分别为63.98%和67.56%,处理72 h后,对2龄幼虫的校正死亡率分别为68.14%和92.98%。盆栽试验发现,菌株A1和B1的3%菌肥培养物处理90 d后,孢囊减少率分别为31.71%和36.04%,小麦根长分别增加28.82%和59.62%,株高分别增加20.38%和21.43%。【结论】菌株A1和B1对禾谷孢囊线虫具有防治作用,是2株极具开发潜力的生防菌株。     

1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其产脂肪酶特性

【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定;通过菌落和芽胞计数、生长曲线测定,对MY016的生长特性进行分析;通过产脂肪酶量和酶活检测、脂肪酶基因扩增和系统进化分析,对MY016菌株的产脂肪酶特性进行探讨。【结果】产脂肪酶细菌MY016经形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA分析,被鉴定为枯草芽胞杆菌。MY016在培养2 h后进入对数生长期,生长迅速;培养10 h其菌液600 nm吸光度最高达到4.7,随后进入稳定期;12 h时活菌数约为5.3×10⁹ CFU/mL;培养22 h后开始二次生长,吸光度最高达5.2;培养46 h后进入衰退期。芽胞观察和计数结果显示,MY016菌株在接种16 h后开始形成芽胞,随着培养时间延长,芽胞形成率逐渐升高,直至72 h完全形成芽胞,芽胞数最高为1.9×10⁹ CFU/mL。产脂肪酶能力检测结果显示,MY016菌株在培养36 h时产酶量达到最大,为246.918 mg/L,然后总酶量逐步降低;48 h时总酶活达到最高,约为281.883 U/L。成功扩增了MY016菌株的脂肪酶基因,并构建系统进化树,结果显示MY016脂肪酶基因与其他芽胞杆菌的脂肪酶基因亲缘关系最近,表明其脂肪酶基因进化保守。【结论】产脂肪酶枯草芽胞杆菌MY016生长迅速、产酶量稳定,总酶活较高,适合后期规模化生产和在畜牧业中推广应用。     

一株野生地生亚侧耳的分离鉴定及其生物学特性

从西藏农牧学院校园采集到一株野生亚侧耳(编号为HGHZ02),为了使该菌种得到更好的开发和利用,对其进行了鉴定和生物学特性研究。通过形态学和ITS序列聚类分析,鉴定菌株HGHZ02与勺状亚侧耳(Hohenbuehelia petaloides)的相似度达到100%,但通过形态学鉴定与地生亚侧耳形态特征最相似,因此将菌株HGHZ02鉴定为地生亚侧耳(Hohenbuehelia geogenia)。菌株HGHZ02菌丝最适生长碳源为麦芽糖,最适生长氮源为麦芽浸粉,最适温度为25℃,最适pH为pH 7.0,最适无机盐为磷酸氢二钾。正交试验结果表明,菌株HGHZ02最佳生长因子组合为麦芽糖25.0 g/L、麦芽浸粉3.0 g/L、pH 7.0和温度26℃。     

两株生防芽孢杆菌的分子鉴定及拮抗活性测定

对两株分离自青海年宝玉泽及玛多高寒草甸根围土壤的拮抗菌株GL18和MD1进行鉴定分析。生理生化试验鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌群;16SrDNA分子鉴定表明,菌株GL18、MD1与Ba-cillus methylotrophicus及Bacillus amyloliquefaciens的序列相同(或一致)性均为99%;gyrB分子鉴定表明,菌株GL18、MD1与B.methylotrophicus具有最高序列相同(或一致)性;以两株菌株的16SrDNA及gyrB基因序列与模式菌株序列构建系统发育树,结果表明,两株菌株均与B.methylotrophicus具有更近亲缘关系;综合几种鉴定结果最终将菌株GL18、MD1鉴定为B.methylotrophicus。平板对峙试验表明,菌株GL18和MD1对油菜菌核菌具有显著拮抗活性;油菜离体叶片接种试验表明,菌株对油菜菌核病菌的侵染具有较好的防效。     

两株白粉寄生孢的生物学特性比较

对L9和L3两个白粉寄生孢菌株的生物学特性研究表明,它们的生长适温为10～30℃,其中最适生长温度分别为25℃和20℃;适宜生长的pH为4～10,其中最适pH均为8.有利于L9菌株菌落生长的碳、氮源分别为可溶性淀粉、乳糖和牛肉膏;有利于L3菌株菌落生长的碳、氮源分别为葡萄糖、乳糖和蛋白胨;改良查氏培养基有利于两者菌落的生长.     

Sequence Polymorphisms and Phylogenetic Relationships of hina Gene in Wild Barley from Tibet, China

The hina gene encodes a HINA protein in seeds of barley （Hordeum vulgare）, which was known to affect the grain hardness. 171 hina gene sequences from Tibetan wild barley accessions and worldwide were characterized. Across 1 452 nucleotides of 171 hina genes, 152 SNPs were detected, giving an average frequency of one SNP per 9.5 bases. There were 93 singleton variable sites （the nucleotide polymorphism only observed in a single accession）, 59 polymorphic sites （the polymorphisms found in two or more accessions） and 8 indels. A total of 18 haplotypes were defined, and most of the barley accessions shared one gene haplotype. H. spontaneum had a wider haplotype distribution. Through the analysis of median-joining network of the 18 haplotypes, 4 haplotype groups were found, which were testified by neighbor-joining tree based on the complete sequence alignment. Extremely low level of hina gene diversity was observed in Tibetan wild barley accessions, indicating that Tibet is unlikely a center of origin for cultivated barley.     

茯砖茶中冠突散囊菌的分离鉴定及富硒菌株筛选

对陕西茯砖茶中冠突散囊菌进行分离与鉴定,并筛选出具有较强富硒能力的菌株。从8种陕西茯砖茶中分离出54株纯化菌株,通过形态学观察及ITS基因序列分析鉴定得到32株冠突散囊菌。经硒胁迫培养从中筛选出8株耐硒能力强的冠突散囊菌,并确定其生长最适硒质量浓度为30μg/mL。进一步的富硒培养结果表明,菌株SXFCD.8在此硒浓度下的富硒能力最强,其生物量为(28.92±0.94)mg/100mL,富硒量为(628.38±20.96)μg/g。最后利用LC-ICP/MS对菌株SXFCD.8的硒形态进行分析,共检测到6种硒形态,其中4种与标准物质相匹配,包括SeMet、SeCys2、MeSeCys和Se(IV)。硒形态分析表明冠突散囊菌具有较强的有机硒转化和富集能力。     

枯草芽孢杆菌bioW基因在大肠杆菌中的表达及其对宿主生长的抑制作用

【目的】克隆枯草芽孢杆菌(B.subtilis)生物素基因(bioW),在bioW基因缺陷型大肠杆菌中进行表达,探讨其对bioW基因缺陷型大肠杆菌的遗传互补作用和对宿主的生长抑制作用,为生物素基因工程菌的构建奠定基础。【方法】用大肠杆菌表达载体pEXT20和枯草芽孢杆菌bioW基因构建表达载体pEXT20-bioW,并将其转化到大肠杆菌DH5α和生物素基因缺陷型大肠杆菌株R876中,构建重组菌DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)。分别将R876、DH5α(pEXT20-bioW)、R876(pEXT20-bioW)在不同培养基和不同IPTG浓度下进行培养,检测bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌株的遗传互补和生长抑制作用。【结果】在生物素限制性培养基中,只有同时加入庚二酸和IPTG时,R876(pEXT20-bioW)才能生长。在不含IPTG的LB培养基中,R876(pEXT20-bioW)生长正常;在添加不同浓度IPTG的LB培养基中,DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)生长均受到不同程度的抑制。【结论】bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌有遗传互补作用。在大肠杆菌中,bioW基因的表达对宿主有生长抑制作用。     

白狐源星状病毒RdRp基因的鉴定及遗传演化分析

目的 探究广州动物园一例死亡白狐Alopex lagopus肾脏中鉴定出的星状病毒的遗传变异情况。方法 对死亡白狐进行剖检,利用半巢式RT-PCR对内脏器官进行病原学检测,对扩增出的病毒株的RdRp基因序列进行相似性分析。结果 死亡白狐的肾脏苍白肿大,被膜难以剥离,肾脏中检测出的星状病毒RdRp基因呈阳性。RdRp基因与9株参考毒株的核苷酸相似性为67.5%～96.2%,其中与香港猫源星状病毒1637F的核苷酸相似性(96.2%)最高。结论 本研究为星状病毒在野生哺乳动物间的跨种传播及肠外器官中的感染提供了依据。     

野生和栽培甜瓜对瓜列当抗性鉴定及评价

采用温室盆栽评价和大田种植评价两种方法,以寄生列当数量、列当生物量及甜瓜生物量指标为依据,对19份栽培甜瓜和9份野生甜瓜进行抗瓜列当寄生能力鉴定。结果表明,在大田种植试验中,28份甜瓜种质中有2个高抗列当寄生材料,14个抗性材料。将大田种植初筛出的抗性较好的14个甜瓜材料进行盆栽试验,其中‘Sekine’‘PI 614391’和‘安农2号’具有减缓瓜列当生长发育抗性,有96.70%的瓜列当在‘Sekine’上停滞于结节生长阶段,成功生长至幼苗及出土阶段的瓜列当仅占总寄生数量的3.30%;94.42%瓜列当在‘PI 614391’上停滞于结节生长阶段,成功生长至幼苗及出土阶段的仅占总寄生瓜列当的5.58%;87.88%瓜列当在‘安农2号’上停滞于结节生长阶段,成功生长至幼苗及出土阶段的列当占总寄生瓜列当的12.10%。通过测定瓜列当寄生后对甜瓜植株生物量的影响,结果表明瓜列当寄生对‘PI 614391’和‘Sekine’的地上干质量、根干质量、株高和茎粗无显著影响。在28份甜瓜种质中,野生甜瓜‘PI 614391’和栽培甜瓜‘Sekine’对瓜列当有较强的耐寄生性。