脉孢霉纤溶酶体外抗凝与溶栓作用初步研究

使用实验室制备的脉孢霉纤溶酶组分Ⅱ和组分Ⅲ冻干粉(均达到电泳纯),进行体外血凝块溶解试验、抗凝血实验和对小鼠一般行为的影响和毒理性试验,对不同组分的溶栓、抗凝及毒理效果进行初步研究。体外抗凝试验表明,脉孢霉纤溶酶粗酶液、组分Ⅱ、组分Ⅱ+Ⅲ具有明显的抗凝血作用,其抗凝血效果明显优于尿激酶。体外溶栓试验表明,脉孢霉粗酶液和各组分对血栓的溶解率均高于80%,明显优于对照组;脉孢霉纤溶酶粗酶液、组分Ⅱ、组分Ⅲ和组分Ⅱ+Ⅲ组溶解血栓后的液体中的红细胞分散程度较好,形态完整,尿激酶组血细胞凝集成块状,说明脉孢霉纤溶酶对细胞的损伤小,可以维持细胞的完整形态和功能,其血栓溶解效果要优于尿激酶。小鼠皮下注射试验显示脉孢霉纤溶酶无出血活性。急性毒理试验显示脉孢霉纤溶酶无明显的急性毒性,对小鼠的一般行为和协调运动无影响。     

高产纤溶酶蛹虫草菌株的诱变育种

蛹虫草中含有多种生理活性物质,是中国名贵中药材之一。前期试验发现其发酵液中含有纤溶酶,具有开发成一种新型溶栓药物的价值。以试验室保存的8株蛹虫草为试验菌株,以纤溶酶酶活为指标,进行液体深层培养,确定以C-5作为诱变出发菌株,对其进行原生质体紫外诱变处理,筛选得到31株抗制霉素突变株,抗性菌株以纤溶酶酶活为指标进行液体深层发酵,得到8株纤溶酶产量高于出发菌株15.00%以上的突变株,并从中筛选出3株遗传稳定性良好的正突变株CY-8,CY-18,CY-25,其纤溶酶产量分别比出发菌株提高了28.58%,28.22%,21.78%。     

利用氦氖激光诱变提高枯草芽孢杆菌纤溶酶活力的研究

通过诱变筛选纤溶酶活性高的枯草芽孢杆菌菌株,得到突变株HDBF-N7HN5。使用氦氖激光诱变,设置不同的诱变时间,通过不同的蛋白平板处理,筛选高产突变株并检测纤溶酶活力。实验结果表明,在氦氖激光诱变处理45 min后,最高产突变株纤溶酶活力达到429.89±5.74 IU/mL。突变株经过10次传代培养后,保持稳定的高产纤溶酶特性。纤溶酶粗酶液处理血凝块的绝对溶解率可达到57.74±0.72%,10倍稀释液处理血凝块的绝对溶解率也能达到26.89±0.68%,菌株产生的纤溶酶具有良好的体外溶栓效果。本研究结果既提高了微生物纤溶酶活性,也为该菌株产纤溶酶的产业化提供了依据。     

盾壳霉产葡聚糖酶培养条件的研究

通过在SMCS培养液中加入不同的碳源、氮源,改变培养时间、温度及培养液的pH值,研究了盾壳霉产葡聚糖酶的培养条件。结果表明：盾壳霉接种在改良的SMCS液体培养基中置于恒温摇床（200 r/min,20℃）上培养15 d,可以诱导产生大量的葡聚糖酶。改良的SMCS培养液配方为：KH2PO4680 mg,K2HPO4870 mg,KCl 200 mg,NH4NO31 g,Mg-SO4.7H2O 200 mg,CaCl2200 mg,FeSO42 mg,ZnSO42 mg,MnSO42 mg,蔗糖10 g,加水1 000 mL,调pH值到6.5。     

盾壳霉产葡聚糖酶培养条件的研究

通过在SMCS培养液中加入不同的碳源、氮源,改变培养时间、温度及培养液的pH值,研究了盾壳霉产葡聚糖酶的培养条件.结果表明:盾壳霉接种在改良的SMCS液体培养基中置于恒温摇床(200 r/min,20℃)上培养15 d,可以诱导产生大量的葡聚糖酶.改良的SMCS培养液配方为:KH2PO4 680 mg,K2HPO4 870 mg,KCl 200 mg,NH4NO3 1 g,MgSO4·7H2O 200 mg,CaCl2 200 mg,FeSO4 2 mg,ZnSO4 2 mg,MnSO4 2 mg,蔗糖 10 g,加水1 000 mL,调pH值到6.5.     

转枯草芽孢杆菌纤溶酶基因对烟草氧自由基和保护酶系统的影响

除个别时期外,转枯草芽孢杆菌纤溶酶(Bacillus subtilis fibrinolytic enzyme,BSFE)基因及其信号肽和前肽序列烟草叶、茎、根氧自由基含量、超氧化物歧化酶活性均显著高于野生型烟草植株,抗坏血酸过氧化物酶活性也较野生型烟草植株高,但二者差异不显著。推测氧自由基含量的变化与BSFE的蛋白水解活性有关;超氧化物歧化酶和抗坏血酸过氧化物酶活性变化可能与该转基因烟草植株对外源BSFE基因表达和产物累积产生的逆境适应有关。     

拟康氏木霉产胞外多糖发酵培养基及培养条件的研究

以生物量和胞外多糖产量为指标,采用单因素和正交试验对摇瓶培养的拟康氏木霉(Tricho-dermapseudokoning)的液态发酵条件进行优化。优化后的拟康氏木霉发酵控制参数为:最佳培养基配方为麦麸30g/L,玉米粉30g/L,葡萄糖7.5g/L,KH2PO41g/L;发酵培养时间为6d;培养基的初始pH值为5.0～6.0;发酵温度为30±1℃。最佳培养条件下菌丝干重及胞外多糖的产量分别5.272g/L、0.622g/L。     

假蕈状芽孢杆菌34kDa纤溶酶成熟肽基因的原核表达、纯化及活性分析

为进一步探讨全长基因和成熟肽基因的关系,根据已发表的假蕈状芽孢杆菌34 kDa纤溶酶全长基因DNA序列(GenBank FJ463037)和纤溶酶活性位点的位置,设计合成一对引物,扩增得到纤溶酶成熟肽基因G(951 bp编码317个氨基酸),连接pET-28a构建pET-28a-G载体,热激转化大肠杆菌BL21,成功获...     

蛹虫草深层培养产菌丝体及胞外多糖的初步研究

蛹虫草是我国的一种名贵野生中药材,其主要活性成分多糖因具有多种药理作用而备受人们关注。采用4因素3水平L9(34)正交试验方法,分析了蛹虫草深层培养产菌丝体及胞外多糖的培养基组成,确定最佳培养基组成为:葡萄糖4%,豆浆30%,KH2PO40.15%,MnCl20.1%。10L发酵罐深层培养试验的结果表明,菌丝体最大生物量为:41.08mg/mL,比摇瓶培养提高29.3%;胞外多糖最大产量为6.424mg/mL,比摇瓶培养的提高5.7%。     

氨基酸复合微肥对甘蔗产质量及土壤有效态微量元素的影响

探究氨基酸复合微肥对甘蔗产量、品质及土壤残留有效态微量元素的影响,分别应用氨基酸复合微肥500倍稀释液浸种和拌种处理甘蔗种苗,甘蔗生长前期以喷施清水处理为对照,氨基酸复合微肥500倍稀释液进行叶面喷施与沟施。结果表明：氨基酸复合微肥能够促进甘蔗的生长,施用氨基酸复合微肥甘蔗出苗率与分蘖率显著高于对照。施用氨基酸复合微肥的增产增糖效果明显,喷施与沟施较对照分别增产甘蔗19.3%和8.5%,产糖量分别提高14.9%和10.6%。此外,施用氨基酸复合微肥对土壤有效Mn,有效Zn和有效B的供给有一定的改善作用。     

白灵菇液体培养菌丝的富锌能力研究

探讨白灵菇富锌能力,为其富锌培养提供依据,对培养基锌浓度对菌丝生长及锌含量的影响进行研究。采用0~500 mg/L以25 mg/L递增的不同锌浓度的培养基摇床培养白灵菇菌丝2周,用重量法测定菌丝生物量,用双硫腙比色法测干菌丝锌含量。结果表明：随着培养基中锌浓度升高菌丝生物量逐渐增加,至325 mg/L达最大值,为1.146 g,是对照的5.63倍,随后逐渐降低;锌含量一直呈现增加趋势,最高为26.5056 mg/kg,是对照的6.32倍,各处理之间差异达极显著水平。故认为培养基中锌离子浓度对白灵菇菌丝生长和锌含量有较大影响。综上所述,白灵菇富锌培养时,培养基中的锌浓度应该以 325 mg/L为宜。在此浓度菌丝锌含量可达24.79 mg/kg,虽不是最高含量,但高于此浓度,锌对白灵菇菌丝生长有抑制作用。     

豆渣悬浮发酵转化为秀珍菇多糖的纯度研究

豆渣可用于液体悬浮培养食用菌菌丝体,并且可以进一步提取食用菌菌丝体多糖,但所得食用菌菌丝体多糖的纯度尚不清楚。为了检测其纯度,以麦角甾醇为指标,间接测定生长在豆渣表面的秀珍菇菌丝体含量,并依据对照秀珍菇菌丝体多糖提取率以及发酵豆渣残渣的多糖提取率,推断秀珍菇多糖的纯度。在此基础上,以秀珍菇多糖纯度为指标,以正交试验L9(34)优化培养基配方。极差分析表明,4个因素对提高多糖提取率的影响顺序为麦麸 > 豆渣 > 葡萄糖 > 马铃薯。最优豆渣固体悬浮发酵配方为：葡萄糖3%、豆渣5%（不过滤）、麦麸（使用滤液）0.5%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%、VB1 0.01%、酵母粉0.15%,pH自然。发酵7天后,秀珍菇多糖的纯度可达75.27%,得率为发酵豆渣残渣质量的3.67%。     

蜜环菌液体深层发酵培养基的优选

蜜环菌(Armillaria mellea)是一种与传统中药天麻(Gastrodia elata Blume)共生的著名的药用真菌。在我国,天麻有广泛的治疗疾病的效果,但由于生产限制,不能完全满足临床用药的需要。试验用蜜环菌代替天麻,通过对蜜环菌液体深层发酵最适碳源、氮源的筛选,以及正交试验,确定了蜜环菌液体深层发酵的最适培养基配方为:马铃薯20%,葡萄糖1%,蔗糖1%,酵母浸粉2%,蚕蛹粉1%,磷酸二氢钾0.15%,硫酸镁0.075%,VB10.001%。经过此培养基的验证培养后,得到菌丝体的生物量平均为1.525g/100mL,菌体生长状态良好。     

岩栖蝮蛇毒纤溶酶基因克隆、序列分析及真核表达载体的构建与鉴定

克隆岩栖蝮蛇（Gloydius saxatilis）纤维溶解酶（Fibrinolytic enzyme,FLE）基因,分析基因序列并对该基因的功能进行分析;构建真核表达载体并鉴定。从岩栖蝮蛇毒腺细胞中提取总RNA,通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因,与pMD18-T载体连接进行TA克隆,再进行序列的测定并且对该序列进行分析。测序鉴定后将纤溶酶基因克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建该基因的真核表达载体pEGFP-FLE,进行双酶切、PCR和测序鉴定。扩增得到包括完整开放读码框在内的长为774 bp的纤溶酶基因序列,成功克隆了编码岩栖蝮蛇纤溶酶的基因序列,开放读码框编码257个氨基酸,其分子质量约为30 KDa,成功构建了真核表达载体pEGFP-FLE。成功克隆岩栖蝮蛇毒纤溶酶基因并构建该酶的真核表达载体为该基因的真核表达及后续研究提供依据。     

白灵菇液体培养工艺的初步研究

本文用摇瓶发酵研究了白灵菇液体培养的条件,研究结果表明,最适碳源、氮源分别为葡萄糖和蛋白胨,最适葡萄糖浓度和C/N分别为4.0%、20:1。最适培养条件是接种量10%,250mL三角瓶装液量为100mL,初始pH值为7.0,培养温度为30℃。     

UV-C辐照对平菇贮藏品质的影响

以平菇为试材,经过不同剂量(0、2.5、5.0、7.5、10.0 k J/m2)短波紫外线(UV-C)辐照后,于4℃条件下贮藏,研究UV-C辐照对平菇中黄酮、还原糖、丙二醛(MDA)、VC含量及感官品质的影响。结果表明,经辐照处理后平菇中的MDA含量总体低于对照组,黄酮、还原糖和VC含量高于对照组。其中以辐照剂量为7.5 k J/m2UV-C处理后的平菇MDA含量最低,黄酮、还原糖、VC含量最高,感官品质评分整体高于对照组,说明该剂量UV-C辐照较好地保持了平菇的贮藏品质。     

不同发酵工艺对资丘木瓜酵素品质的影响

以药食两用的资丘木瓜为主要原料,采用自然发酵、酵母菌-德氏乳杆菌保加利亚亚种-嗜热链球菌先后顺序接种发酵、酵母菌-长双歧杆菌-嗜热链球菌先后顺序接种发酵3种工艺制备木瓜酵素,并对其发酵过程中的3种清除自由基能力、淀粉酶和有机酸进行研究。结果表明,不同发酵工艺制得的木瓜酵素均有较强的抗氧化性,对自由基的清除率在80%以上,其中自然发酵制备的酵素清除自由基清除能力最强,工艺相对稳定;人工接种-嗜热链球菌后可以提高木瓜酵素清除DPPH·和O2-·的能力,分别提高30%和10%;自然发酵的淀粉酶活力最高,大约是人工接种的2号和3号发酵工艺的3倍,有机酸含量也最高,但人工接种发酵工艺所制得酵素产品活菌数比自然发酵的高,其中3号发酵工艺所得酵素产品的益生菌数量是自然发酵的2倍多,2号和3号发酵工艺中增加了乙酸种类。     

基于姬菇菌糠为主的番茄育苗基质配方研究

为了筛选以姬菇菌糠为主的番茄育苗基质配方.以番茄品种'6629'为指示品种,选用姬菇菌糠、草炭、珍珠岩、蛭石等物料,按不同比例混合配制成4种育苗基质,以荷兰瑞克斯旺公司的草炭育苗基质为对照(CK),采用随机区组设计,进行穴盘育苗试验.结果表明,T4(菌糠∶草炭∶珍珠岩∶蛭石=5∶3∶1∶1)配方育苗基质的容重为0.20...