壮蚕感染微孢子虫的显微镜判别时期研究

研究了壮蚕（４￣５龄）微孢子虫感染与微粒子病显微镜判别时期的关系。结果表明，在一定范围内，显微镜检别出微粒子病的时期随微孢子虫接种剂量的增大而提早，并且３个取样部位从先到后镜检出的顺序分别为病蚕中肠、病蚕整体、病蚕粪便。     

家蚕微孢子虫感染雄蛾交配对雌蛾的影响

微孢子虫是母蛾检疫的唯一对象,为探明家蚕微孢子虫感染雄蛾交配对雌蛾的影响,了解其对蚕种生产的危害性,用患微粒子病的家蚕雄蛾与未患病雌蛾(各50只)进行交配试验,并统计分析交配后的感染率。结果表明:患有家蚕微孢子虫的雄蛾,能通过雌雄蛾交配把微孢子虫传给雌蛾,雌蛾微孢子虫检出率为66%,其交配传染率达78.57%,增加了各级蚕种因母蛾检测有微孢子虫而淘汰的风险系数。因此,蚕种生产过程中防微病工作很重要,必须贯彻预防为主、综合防治的方针,切断幼虫期食下感染的途径,减少因雄蛾感病通过交配而传给雌蛾的概率,减少蚕种损失。     

浙江省若干原蚕区养蚕环境微孢子虫污染情况的调查分析

本文调查了我省３个县有代表性的原蚕区的养蚕环境中微孢子虫分布，污染及消长状况，并以消毒防疫角度对其调查结果进行了分析讨论。本文对当前我省家蚕微粒子病防治工作具有一定的指导意义。     

消毒药剂对蚕粪和泥土中微孢子虫孢子的杀灭效果研究

研究了含氯制剂和甲醛制剂对蚕粪以及地表土中家蚕微孢子虫孢子的杀灭效果和温度对杀灭效果的影响。结果表明福尔马林液对蚕粪和地表层土中微孢子虫孢子的杀灭效果明显优于漂白粉液，其杀来效果受温度的影响。     

蚕蛾鳞毛和蛾尿的微孢子虫感染及其传染性

调查研究了家蚕微孢子；Ｎｏｓｅｍｅｂｏｍｂｇｃｉｓ）感染蚕蛾鳞毛和蛾尿中微孢子虫存在状况及对家蚕的传染性。结果表明被微孢子虫感染的蚕蛾，它的鳞毛和蛾尿中寄生和存在形态、大小、折光性均无异的微孢子虫孢子，对家蚕幼虫均具有较强的致病性，对健康蚕蛾具有较大的污染性，其致病性和污染性大小与蚕蛾患病程度强弱呈平行关系，这一结果可作为蚕种生产上对蚕蛾鳞毛和蛾尿的控制与消毒的依据。     

家蚕微孢子虫（Nosemabombycis）孢子人工发芽的研究

研究表明，目前常用的适合于向昆虫培养细胞接种的Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子的几种人工发芽方法的发芽率存在较大差异．同一种方法在不同的发芽培养基中的发芽率也有所不同．并发现在Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子的人工发芽过程中Ｋ＋促进作用比Ｎａ＋明显，而且还证实Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子在人工发芽过程中的完全发芽时间为６０ｍｉ     

灰蜗牛微孢子虫感染家蚕的研究

[目的]通过控制桑园中昆虫等生物的传染环境,达到控制家蚕微粒子病爆发。[方法]将桑园蜗牛镜检发现携带微粒子孢子的磨液添食家蚕后镜检,同时将家蚕微粒子孢子添食蜗牛后镜检。[结果]灰蜗牛携带的微孢子虫能够感染家蚕;家蚕微粒子孢子可以感染蜗牛。[结论]通过综合治理灰蜗牛,至少可以辅助控制和净化桑园环境。     

玉米螟幼虫感染玉米螟微孢子虫(Nosema furnacalis)后的组织病理变化

利用玉米螟微孢子虫侵染亚洲玉米螟4龄幼虫，对患病幼虫的各组织器官进行解剖和显微镜观察，并对病变组织进行石蜡切片，复染后光镜观察并拍照。结果表明玉米螟幼虫的马氏管、丝腺、涎腺、神经、消化管为易感组织，感染后期可在玉米螟气管管壁细胞、中肠外纵肌等组织中也能发现微孢子虫，同时在实验过程中发现不能被感染的组织（细胞）有体壁的真皮细胞、体壁肌肉组织和脂肪组织，并查明了上述各组织中微孢子虫的侵染顺序和细胞的病理学变化。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对蝗虫的防治效果

用不同浓度梯度的家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对中华稻蝗(Oxya chinensis)和云南板齿蝗( Sinstauchira yunnan)进行了转宿主添食感染试验.结果表明,家蚕微孢子虫在高浓度(107个/mL)添食的情况下对蝗虫有较强的感染力和致死率,家蚕微孢子虫对蝗虫的半致死浓度(LC50)为6.9×106个/mL.     

家蚕微粒子虫(Nosema bombycis)感染家蚕的病理学研究

Nosema bombycis感染家蚕后 ,家蚕中肠海藻糖酶活性显著下降 ,大量裂殖体的形成是其下降的重要原因 .血淋巴总糖和海藻糖等与能量代谢密切相关物质的含量也明显下降 .感染后血淋巴海藻糖酶活性略有上升 ,但对血糖总量无明显影响 .血淋巴蛋白质含量的下降要滞后于与能量代谢有关的物质 ,其中贮存蛋白量的下降明显高于 30 K蛋白     

经营桑园和蚕室环境内家蚕微粒子病原消长和分布的研究

通过对桑园家蚕微粒子病原消长和分布的调查,发现经营桑园内蚕微粒子病原的发生量为:收蚁前<收蚁<三龄盛食<五龄盛食,五龄期的发生量最大。在桑树上的分布量为:桑叶<枝条<树干;在桑园土层中的分布量:表层>1cm>2cm>3cm。对蚕室环境的调查分析认为:蚕室内存在着微粒子病原严重污染的情况;病原孢子的发生量在蚕室内随蚕龄增加明显上升;凡与桑叶相关的场所病原孢子的发生量明显高于其它场所;种场外原蚕饲育区室病原孢子发生量高于场部。     

常用消毒药剂对不同存在状态微孢子虫孢子的消毒效果

研究了甲醛制剂（福尔马林液）和含氯制剂（漂白粉液）对蚕粪、地表层土、蚕体、蛹体、蛾体内微孢子虫（Nosema bombycis）孢子的消毒效果。结果表明福尔马林液的消毒效果明显优于漂白粉液的消毒效果。但是在养蚕生产常规消毒条件下,两种消毒药剂对蚕体、蛹体、蛾体、深处土层、蚕粪(除福尔马林液外)中微孢子虫孢子均没有彻底的消毒效果。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对三峡库区菜青虫(Pieris rapae)的感染性研究

本试验用不同浓度的家蚕微孢子虫感染三峡库区菜青虫,结果表明:家蚕微孢子虫对菜青虫感染性较强,致死率高,其致死中量(ID50)为:1.5×104个/m l。当微孢子虫浓度为1.0×107个/m l时,菜青虫死亡率高达87.8%,校正死亡率也高达86.4%,体现了家蚕微孢子虫对菜青虫的显著致病能力,由此探索了家蚕微孢子虫作为生物农药的可行性。     

家蚕微孢子虫极管蛋白2（NbPTP2）的表达、纯化和定位特征

【目的】微孢子虫是一种细胞内专性寄生的真核生物,几乎能感染所有生物,包括人类。极管作为微孢子虫特有的侵染器官,主要由极管蛋白组成。极管蛋白在微孢子虫侵染宿主与稳定孢子结构中发挥重要作用。本研究通过克隆、表达家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）极管蛋白2（NbPTP2）,分析其在成熟孢子极管上的定位特征,为深入研究极管蛋白的功能打下基础。【方法】克隆家蚕微孢子虫NbPTP2。利用Expasy、SignalP 4.1、TMHMM Server V.2.0和NetPhos 3.1 Server等在线软件对NbPTP2的序列特征进行分析,包括氨基酸组成、蛋白质理论分子量、等电点、信号肽、跨膜结构域和磷酸化位点。此外,利用MEGA 7.0软件构建不同种属微孢子虫极管蛋白2的系统进化树。通过克隆NbPTP2,将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建pET32a(+)-NbPTP2重组表达质粒。将测序正确的重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,IPTG诱导异源表达,经镍柱亲和层析纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用免疫印迹检测NbPTP2在成熟孢子中的表达情况,并通过间接免疫荧光试验（IFA）分析NbPTP2在家蚕微孢子虫成熟孢子中的定位特征。【结果】成功克隆并获得长为834 bp的NbPTP2基因序列,该蛋白编码278个氨基酸残基,理论分子质量为30.9 kD,等电点为9.39,无跨膜结构域,N端存在信号肽,具有潜在的磷酸化修饰位点。系统进化树分析结果显示,家蚕微孢子虫NbPTP2与西方蜜蜂微孢子虫NaPTP2、东方蜜蜂微孢子虫NcPTP2的亲缘关系最近。Western blot结果表明,NbPTP2编码的蛋白质在成熟孢子的孢子总蛋白中有表达,分子量大小约为39 kD。IFA定位特征分析结果显示,NbPTP2能定位于家蚕微孢子虫的整条极管上,证实其为一种极管蛋白。【结论】明确了NbPTP2与其他微孢子虫极管蛋白2的亲缘关系,NbPTP2在成熟家蚕微孢子虫中有表达,且能定位于微孢子虫发芽后的整条极管上。研究结果可为极管的结构解析与极管蛋白功能的研究提供依据。     

家蚕微孢子虫NbTom40的原核表达及定位

线粒体外膜易位酶是由Tom40基因编码的位于线粒体外膜上的转位酶复合体,能够将外界蛋白质转位运输到线粒体基质中.最近有研究称在一类仅具有简缩进化的线粒体——纺锤剩体的感染家蚕微孢子虫的基因组鉴定到一个NbTom40基因.本文首先通过克隆了长度为839 bp的NbTom40基因,通过构建重组载体pET30a(+)-NbTom40,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,经过HIS抗体的免疫印迹对表达的目的蛋白——31～43 kDa间存在一条单一条带进行验证,结果显示该条带即为分子量大小正确的带有HIS标签的目的蛋白,然后将其进行Ni-NTA亲和层析以及聚丙烯酰胺凝胶纯化并制备多克隆抗体.NbTom40抗体与家蚕微孢子虫总蛋白的Western Blotting结果显示,在32 kD处有明显杂交信号,与理论分子大小一致.最后,通过间接免疫荧光(IFA)对该基因编码的蛋白进行细胞定位,观察到NbTom40以散点状荧光信号分布在孢子内部.本研究为深入了解纺锤剩体的蛋白组成及其膜转运的分子机制奠定了分子生物学基础.     

塑料薄膜覆盖对壮蚕生长发育的影响

探讨了壮蚕（4～5龄）塑料薄膜覆盖1日2回育对其生长发育的影响,发现壮蚕每日用塑料薄膜覆盖10～20h，并将给桑次数从1日4回减少为1日2回，除5龄期经过缩短2h外，其4龄期经过、蚕体重、入眠整齐度、桑叶食下与消化、叶丝转化率和蚕茧产量、质量均无不良变化，并且在有些项目上比对照区的略有提高。这一结果表明：在做好其它饲养管理的条件下，壮蚕期每日用塑料薄膜覆盖10～20h，并将给桑次数减少至1日2回是可行的。