金乌贼和曼氏无针乌贼胚胎发育及其盐度耐受能力的比较研究

采集金乌贼(Sepia esculenta)及曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)受精卵,观察了金乌贼胚胎发育过程,比较分析了2种乌贼受精卵和仔乌的形态特征;分别研究了金乌贼受精卵在盐度20,25,30(对照)、33,36及曼氏无针乌贼受精卵在盐度15,20,25,30(对照)、36条件下的孵化率,分析了2种乌贼受精卵在192 h盐度突变过程中卵液渗透压和受精卵Na~+/K~+-ATPase活力的变化,比较了其在相同盐度20,25,30,36条件下的孵化率及耐受盐度突变的生理适应过程.结果表明,金乌贼胚胎发育第7天器官开始分化,第14天器官开始形成,盐度30、水温22～24℃时,其孵化时间为20～21 d;盐度30处理组,2种乌贼受精卵的孵化率均显著高于其他盐度处理组(P<0.01);在192 h盐度突变过程中,2种乌贼受精卵卵液渗透压随环境盐度的变化而变化,金乌贼受精卵卵液渗透压与环境渗透压相等,而曼氏无针乌贼受精卵卵液渗透压比环境渗透压平均高出60 mOsm/kg,2种乌贼受精卵均未检测到Na~+/K~+-ATPase活性.比较发现,虽然2种乌贼受精卵调节渗透压能力均较弱,但曼氏无针乌贼受精卵比金乌贼能更好地适应盐度变化.本研究旨在探明两种乌贼受精卵对盐度的适应性,为开展规模化人工繁育与资源增殖提供基础依据.     

拟目乌贼的胚胎发育

采捕野生拟目乌贼进行室内培育,利用显微成像系统观察其胚胎发育过程.结果表明,拟目乌贼受精卵乳白色,半透明,呈椭圆形,乳头状,一端呈圆环状套住附卵基质,如葡萄般成串有规律地聚集一起.刚产出的受精卵长径为(39.7±1.7) mm,短径为(17.1±1.1) mm,体质量为(4.3±0.2)g.胚胎呈椭圆形,长径(8.85±0.41) mm,短径为(7.74±0.54) mm.在水温为27℃,盐度为30条件下,孵化第10天卵粒变得最小,长径为(27.2±0.6) mm,短径为(13.3±0.6)mm,体质量为(2.02±0.02)g.第11天后受精卵开始膨大,孵化前受精卵长径为(32.7±0.8) mm,短径为(19.3±0.6)mm,体质量为(4.68±0.02)g.胚胎发育分为11个阶段:受精卵期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、胚体形成期、器官形成期、红珠期、心跳出现期、色素出现期、内骨骼形成期和孵化期.胚胎发育历时20 d,初孵乌贼胴长(8.1±0.2)mm,胴宽(6.1±0.2) mm,体质量(0.18 ±0.02)g.     

金乌贼腕式研究

对金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)的腕式及其在分类学中的应用进行了探讨。研究结果表明：金乌贼不同时期的不同个体出现了不同的腕式。Duncan多重比较分析表明，腕式依个体、大小、左右和性别不同而有差异。当一个种雌性及雄性样本左、右腕的腕式都一致时，可以认为是该种的腕式。否则，需指出性别、大小、左右等前提。建议在金乌贼研究中慎重使用腕式。     

金乌贼精子的超微结构

应用扫描电镜和透射电镜观察了金乌贼精子的超微结构.结果表明,精子全长为191.84μm(n-10),由头部和尾部组成.其中,头部主要由顶体和细胞核组成,尾部分为中段、主段和末段3个部分.头部顸体为呈倒"U"字形的囊状体,亚顶体腔呈形.细胞核细长,呈圆柱状,稍弯曲,为高电子密度的均质结构.核后窝偏离细胞核中心位置.尾部中...     

金乌贼(Sepia esculenta)早期发育阶段相关酶活性的变化

采用生化方法测定了金乌贼(Sepia esculenta)不同发育阶段的受精卵以及0-10日龄幼体的胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性磷酸酶、脂肪酶和谷丙转氨酶5种酶比活力的变化.结果显示,可溶性蛋白浓度总体呈先上升后下降再上升的变化趋势,其中,在囊胚和原肠期(Ⅱ)最高,在初孵幼体(Ⅶ)中最低,含量分别为81.50 mg/g和4.24 mg/g.胰蛋白酶、胃蛋白酶和谷丙转氨酶比活力的变化趋势相近,总体呈先上升后下降再上升的变化趋势,其中,在胚胎发育阶段均能检测出这3种酶的活性,说明主要自母体获得,但活力相对较低;在初孵幼体中,这3种酶活性均显著升高,比活力分别为0.51 U/g、1.68 U/mg和37.84 U/g;5日龄幼体(Ⅷ)中,3种酶比活力均显著下降至出膜前水平;10日龄幼体(Ⅸ)中,3种酶比活力均有小幅度上升.碱性磷酸酶和脂肪酶比活力的变化趋势相近,总体呈上升趋势,其中,在胚胎发育阶段仅检测到这2种酶的极低活性,幼体孵出后2种酶的比活力才显著上升,标志着器官发育的逐步完善和消化能力的逐步增强.     

金乌贼精子的超微结构

应用扫描电镜和透射电镜观察了金乌贼精子的超微结构。结果表明,精子全长为191.84μm(n=10),由头部和尾部组成。其中,头部主要由顶体和细胞核组成,尾部分为中段、主段和末段3个部分。头部顶体为呈倒U字形的囊状体,亚顶体腔呈∩形。细胞核细长,呈圆柱状,稍弯曲,为高电子密度的均质结构。核后窝偏离细胞核中心位置。尾部中段较长,由线粒体距及其不完全包围的鞭毛组成。线粒体距分为上段和下段,上段含较多线粒体,下段无线粒体。尾部鞭毛主段细长,由9+2结构的轴丝及外围9束粗纤维组成,构成典型的9+9+2结构。     

金乌贼同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳技术对金乌贼（Sepia esculenta）同工酶的组织特异性及其山东日照近海群体的遗传结构进行研究。对金乌贼眼、鳃、肌肉、口球、肝脏、鳃心6种组织的19种同工酶进行分析，检测出PGDH、GPI、MPI、IDHP、SOD、ME、AAT、DIA、MDH、LDH、G3PDH、PGM共12种同工酶在几种组织中有较稳定而清晰的表达。结果表明，金乌贼同工酶的表达有明显的组织特异性。选择金乌贼3种组织（眼、口球、鳃心）进行同工酶分析，共记录了18个基因座位，其中3个基因座位LDH-2^＊、G3PDH-1^＊、PGM^＊呈多态，其多态座位比例为0．1667（P0．99）和0．0556（P0.95），平均观测杂合度和预期杂合度分别为0．0159和0．0143，平均有效等位基因数为1．0201，表明日照近海金乌贼群体的遗传多样性较低。     

曼氏无针乌贼胚胎发育的初步观察

将曼氏无针乌贼受精卵卵膜剥离,在显微镜或解剖镜下观察胚胎发育的全过程,结合室内人工育苗的孵化技术进行探讨。曼氏无针乌贼卵为粘性卵,呈黑色,类型属端黄卵,卵膜属三级卵膜,卵裂类型为不全卵裂,囊胚呈盘状,发生类型为直接发生型。在水温为23.8～26.2℃、盐度29.3时,最快14d孵出幼体,最慢23天孵出幼体,孵出幼体高峰期为18～21d,高峰期的孵出量占总孵出量的79.4%,孵化率为83.1%。胚胎发育速度与温度高低（20～30℃）成正比,盐度低于22对孵化率有严重影响。     

金乌贼荧光标志方法的研究

建立一种简单实用的标志方法,对更好地评价金乌贼增殖放流效果和渔业资源现状非常重要.以金乌贼为实验对象,利用荧光物质茜素络合指示剂(Alizarin Complexone,ALC)浸泡金乌贼幼体,对其内壳进行标志,所用荧光染色剂浓度为(6.0～8.0)×10-3%,浸孢染色时间24 h.将标志组和对照组的金乌贼幼体分别暂养于1.5 m×1.5 m×1.5 m水泥池30 d,后将暂养的幼体放养于面积为2 667 m2的室外土池,并在60 d后,将平均胴背长达91.4mm(对照组)、87.6 mm(标志组)金乌贼幼体移入室内水泥池越冬,整个实验历时210 d.实验期间,分别在标志后15、30、45、60、90、210 d对金乌贼进行随机取样,解剖出内壳观察标志色保留状况并对金乌贼生长发育及存活率进行测量.结果显示,标志金乌贼的成活率为100%;方差分析显示,标志组和对照组金乌贼的生长发育差异不显著(P0.05);210 d后内壳骨针部仍清晰保留初染时的半椭圆形淡紫色圆圈;实验所采用的ALC内壳标志方法操作容易,可一次性大量进行标志处理,鉴别简单,无需借助其它仪器,肉眼便可直接观察到标志色,并且标志色保持率高,保留时间长,是一种理想的标志金乌贼的方法.     

金乌贼人工越冬养殖技术

利用工厂化养殖设施,人工调控水温在8～22℃范围内,通过冬季153天的人工养殖,金乌贼越冬养殖成活率达到86．8％。越冬期间,金乌贼仍保持较高的生长速度,胴长总增长率达到151．5％,体重总增重率达到1137．3％。研究认为金乌贼偏爱摄食虾类,养殖饵料系数为2．91。在人工调控下,金乌贼生长不足10个月即达到性成熟,3月份即开始交配产卵繁殖。     

金乌贼亲体驯养与繁殖特性研究

为开发利用金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)资源,研究了金乌贼亲体驯养与繁殖特性.结果表明:通过药浴、自然条件模拟、投喂活饵等方法能够提高金乌贼亲体驯养成活率,成活率可达82.5%;繁殖过程中,金乌贼求偶、争偶、交配、挂卵等繁殖行为特征明显;产卵基受精卵附着效果对比试验表明,海参筐架附卵效果较好,附卵量大且集中;繁殖过程结束后,金乌贼亲体逐渐死亡,死亡率为100%;并探讨了金乌贼繁育的难点和解决方法.     

金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)人工孵化与培育技术

本文对金乌贼受精卵采捕、洗浴、人工孵化、幼体培育等技术管理措施进行了阐述,提出了一系列操作工艺。     

金乌贼生长期DNA甲基化水平和模式

DNA甲基化在基因表达、细胞衰老、性状分化中发挥重要调控作用,为探讨生长期金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)不同性别、不同组织DNA甲基化水平和模式的差异,本研究采用荧光标记的甲基化敏感扩增多态性(Fluorescence-labeled Methylation Sensitive Amplified Polymorphism,F-MSAP)技术,选取12对特异性引物,检测分析了雌、雄金乌贼肌肉、心脏、胰脏和性腺4种组织的基因组DNA甲基化。结果显示,生长期金乌贼基因组DNA总甲基化水平为23.97%~39.70%,在水产无脊椎动物中处于较高水平;金乌贼4种组织中,肌肉的总甲基化水平最高,这可能与金乌贼存在异速生长现象且在生长期运动器官优先发育有关;金乌贼甲基化水平和模式存在性别差异,雌性金乌贼肌肉组织DNA总甲基化水平显著低于雄性,心脏和胰脏组织DNA总甲基化水平却显著高于雄性;此外,雌性金乌贼肌肉组织全甲基化水平对总甲基化水平贡献最大,与之不同的是,雌性其他组织、雄性金乌贼各组织中半甲基化水平和全甲基化水平差异不大,说明金乌贼DNA甲基化的水平和模式具有性别和组织差异。上述结果可为深入研究金乌贼生长发育、组织分化和衰老死亡等生命过程的表观遗传学调控提供基础数据。     

金乌贼的早期生长发育特征

收集金乌贼(Sepia esculenta)受精卵, 对孵化后1~56日龄金乌贼幼体的胴背长、胴宽、体质量、骨板壳长、壳宽及骨板层数进行了测量, 分析了金乌贼幼体早期发育特征和功能器官的异速生长特征。结果表明, 金乌贼幼体早期发育过程中, 胴背长、体质量和骨板层数分别与日龄呈指数关系, 但由于器官发育的逐步完善和饵料生物种类的转变, 早期发育过程可分为两个不同阶段。两个发育阶段骨板层数的增长率均显著小于1(P<0.05), 因此骨板层数不能成为判定其日龄的指标。胴体和骨板的生长均出现异速生长的特点, 表明金乌贼有关运动的重要器官具有优先发育的特征。研究结果验证了在头足类早期发育过程中功能器官亦存在异速生长的假设, 并为金乌贼种苗的人工培育提供了参考依据。

     

养殖金乌贼卵子发生和卵巢发育的组织学观察

为了深入了解金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)的生殖生理特性,本研究采用解剖学方法及组织切片技术,观察和描述了金乌贼卵巢形态和卵子各个时相结构特征及其变化规律。研究结果表明,金乌贼卵子发生过程的主要特征表现为,卵子成熟之前滤泡细胞一直存在且伴随着其结构变化,滤泡细胞解体与卵黄物质出现同步发生,卵黄物质从无到有再到大量积累直至充满整个卵母细胞,细胞核则随着滤泡细胞内折逐渐发生偏移直至最后消失。研究还发现金乌贼卵巢内卵子发生不同步且形态差异显著,未成熟的卵子粘连在卵巢基质上,依次环布于卵巢基质周围,越靠近中心,卵母细胞发育程度越低;成熟后的卵子游离在卵巢腔中,经过输卵管排出体外。根据卵巢内卵子的大小和形态、滤泡细胞形态及卵黄形成情况,将金乌贼卵子发生分为增殖期(卵原细胞期)、小生长期(无滤泡期,单层滤泡期,双层滤泡期)、大生长期(滤泡内折期,卵黄形成早期,卵黄形成晚期)、成熟期、退化吸收期共5个时期9个时相。卵巢发育分期则是以卵子时相为基础,根据卵巢的外观形态、性腺系数以及切面上优势卵子的时相,把卵巢分为Ⅰ~Ⅵ共6个时期。金乌贼卵巢发育和卵子发生的动态观察与描述,对丰富头足类繁殖生物学理论及提升人工繁殖技术都具有重要意义。     

东方扁虾胚胎发育的观察

东方扁虾的胚胎发育包括以下九个阶段：卵裂期、囊胚期、原肠胚期、卵内无节幼体期、五对附肢期、胸部附肢发生期、复眼色素形成期、近孵化期和孵化期。东方扁虾胚胎复眼的色素斑随胚胎发育的进程而增大。与日本龙虾和中国龙虾不同的是,东方扁虾整个胚胎发育未能观察到第一颚足。     

Toxic effects of ammonia on the embryonic development of the cuttlefish Sepia pharaonis

The objective of this study was to investigate the effects of ammonia nitrogen on the embryonic development of the cuttlefish Sepia pharaonis . Embryos were exposed to different concentrations (0, 1, 3, and 5 mg/L) of total ammonia–nitrogen (TAN) during incubation. The developmental rate, malformations, mortality, hatching rate, incubation period, yolk utilization efficiency ratio, and weight of the newly hatched cuttlefish were determined. The results showed that ammonia nitrogen significantly inhibited the development of S. pharaonis embryos and induced malformations and even death. Hatching was delayed, the hatching rate was reduced, mortality and the incubation period increased, and the yolk utilization efficiency ratio and weight of the newly hatched cuttlefish significantly decreased in a dose‐dependent manner after the embryos were exposed to more than 1 mg/L TAN for prolonged period. These variables could be used as an integrative biomarker or indicator of aquatic environmental ammonia contamination. In summary, our results indicated that ammonia caused toxicity in the embryos. When the concentration of TAN is greater than 1 mg/L, ammonia levels should be reduced to prevent toxic effects on embryonic development.