伏马毒素B_1对猪肾上皮细胞增殖的影响

研究旨在探究伏马毒素B_1(FB_1)对猪肾上皮细胞增殖的影响,通过MTT检测FB1对PK15细胞活力和qPCR检测周期相关基因的mRNA表达水平。结果表明,FB1显著减少细胞活力,降低细胞核增殖抗原PCNA和周期蛋白Cyclin B和Cyclin D的mRNA表达水平,升高P21和P27的mRNA表达水平。说明FB1可通过调控细胞周期相关基因的表达抑制猪肾上皮细胞增殖。     

安氟醚低流量吸入麻醉对犬呼吸系统的影响

实验应用吸入麻醉药安氟醚 ,对小型观赏犬进行吸入麻醉试验 ,行间歇正压通气控制呼吸 ,并以 Datex呼吸监护仪对呼吸系统的各项指标进行监测。结果表明 ,尽管安氟醚对呼吸功能有抑制作用 ,但使用机械通气不要求动物自主呼吸 ,应用旁气流通气监测法 (SSS) ,通过调节安氟醚吸入浓度和潮气量 ,可保证呼吸系统功能正常 ,使麻醉在安全状态下进行     

隆朋复合氟哌利多麻醉对犬循环、呼吸系统影响的研究

试验主要检验隆朋复合氟哌利多麻醉对犬的循环和呼吸系统的影响情况,并探讨其安全性,从而为该合剂在临床中的应用和推广提供一定的理论依据。隆朋按6mg·kg-1体重、氟哌利多按0.4mg·kg-1颈部肌肉注射麻醉,对麻醉前后犬的循环、呼吸系统进行监测。结果表明,隆朋复合麻醉合剂对犬的循环、呼吸系统有轻微的抑制作用;隆朋复合氟哌利多可以安全地应用于兽医临床犬的麻醉。     

抑制钙信号转导对柔嫩艾美耳球虫入侵细胞的影响

 【目的】探讨柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）入侵细胞与钙信号转导之间的关系,揭示鸡柔嫩艾美耳球虫病的发生机制。【方法】采用体外狗肾细胞（madin-darby canine kidney cell,MDCK细胞）培养技术,检测了细胞外缺钙、Ca2+内流阻断剂（硝苯地平）和钙调蛋白抑制剂（三氟拉嗪）对E. tenella子孢子入侵率的影响,并测定了培养细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）和细胞活性。【结果】E. tenella子孢子入侵细胞的抑制率随着细胞外Ca2+浓度的降低而升高。钙离子浓度降低到600 μmol•L-1时,入侵率（23.33%）均极显著低于对照组（P＜0.01）;细胞外无钙时,入侵抑制率高达53.18%;硝苯地平和三氟拉嗪均能极显著抑制子孢子的入侵（P＜0.01）,其中10 μmol•L-1的硝苯地平和50 μmol•L-1三氟拉嗪分别对子孢子的入侵抑制率达71.41%和97.13%,二者合用入侵抑制率可达98.59%。在E. tenella子孢子入侵细胞的过程中,MDCK细胞的活性均在90%以上,与对照组差异不显著（P＞0.05）,接种E. tenella子孢子的MDCK细胞培养液中LDH的活性与未接种的活性差异不显著（P＞0.05）。【结论】细胞外钙缺乏、钙通道阻断剂硝苯地平和钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对E.tenella子孢子入侵MDCK细胞均有抑制作用,但子孢子入侵对MDCK细胞的活性无明显影响。     

N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻种子萌发及幼苗生长的影响

【目的】研究N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻种子萌发和幼苗生长的影响,探究N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻的适宜作用浓度,为N-硝基-2,4,6-三氟苯胺的应用开发提供理论基础。【方法】选取“黄华占”水稻种子为试材,采用“纸床发芽法”和“平皿生根法”研究N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻种子发芽参数(发芽率、芽苗鲜重、种子生活力和α-淀粉酶活性)及根长茎长的影响。用“水培法”研究N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻秧苗发育过程中根系活力和根系形态指标的影响。【结果】结果表明：2.5 mg/L的N-硝基-2,4,6-三氟苯胺浸种后,水稻种子的生活力都有所提高,α-淀粉酶活性显著增强,发芽率升高,根长茎长显著增加。水培实验的结果表明,2.5 mg/L-5 mg/L的N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻秧苗的主根和侧根在根长,根系比表面积都有促进作用,根系分生更加活跃,根系活力有所增强。【结论】N-硝基-2,4,6-三氟苯胺对水稻具有较好的植物生长调节活性,有一定的应用前景。     

三氟羧草醚对水田杂草药效及安全性的影响

对21.4%三氟羧草醚水剂茎叶处理防除水田杂草效果及其对水稻的安全性进行研究。结果表明:有效成分用量为225 g.hm-2的21.4%三氟羧草醚水剂能有效防除杂草,对水稻分蘖数、株高、产量无明显影响,且对水稻比较安全。     

4,4,4-三氟-3-(吲哚-3-)丁酸对大麦根长和养分吸收的影响

10.0μmol/L4,4,4-三氟-3-(吲哚-3-)丁酸(TFIBA)通过培养基处理在连续提供条件下显著促进了大麦初生根的伸长生长,抑制大麦幼植物的养分吸收,但用100.0μmol/LTFIBA处理种子在促进大麦初生种子根的伸长的同时也促进大麦幼植物的养分吸收。     

转染抑癌基因PTEN对人乳腺癌ZR-75-1细胞的细胞周期和增殖能力的影响

目的：观察PTEN（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因）对人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞增殖和细胞周期的影响。方法；利用脂质体介导法将携带有野生型和突变型PTEN cDNA的真核表达载体pBP—wt—PTEN和pBP—G129R—PTEN导八人乳腺癌ZR-75-1细胞（质粒转染成功后实验分为C—WT—PTEN组、CG129R—PTEN组和未转染质粒组即对照组）后，以RT—PCR、Western blot分析目的基因的表达，并采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期。结果：C—WT—PTEN组、C—G129R—PTEN组细胞PTEN mRNA及PTEN蛋白出现明显的高表达。C—WT—PTEN组细胞生长的抑制率可高达42．7％，与对照组比较．差异有显著性（P〈0．05）。但C—G129R—PTEN组细胞生长的抑制率与对照组比较，差异无显著性（P〉0．05）。流式细胞术显示C—WT—PTEN组细胞周期从G1期到S期已发生抑制。结论：野生型PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制肿瘤细胞的增殖,并最终诱导细胞凋亡。     

3-二辛硫基-1,1,1-三氟-2-丙烷(OTFP)对小菜蛾生长发育及农药敏感性的影响

保幼激素是昆虫体内最重要的激素,保幼激素酯酶又是最重要的保幼激素代谢酶。为了探寻通过抑制保幼激素酯酶控制小菜蛾的可行性,测定保幼激素酯酶抑制剂3-二辛硫基-1,1,1-三氟-2-丙烷(OTFP)对小菜蛾(Plutella xylostella)3龄、4龄幼虫的毒力,研究OTFP对小菜蛾3龄幼虫蜕皮、4龄幼虫化蛹的影响,分析OTFP处理后小菜蛾3龄、4龄幼虫农药敏感性的变化。结果表明:OTFP对小菜蛾3龄幼虫、4龄幼虫的毒力都很低,但能显著延迟3龄幼虫蜕皮和4龄幼虫化蛹,而且影响随其质量浓度升高而加剧;OTFP处理后的3龄试虫对LC50时的丁醚脲、茚虫威、Bt、印楝素的敏感性显著下降,协同毒力指数都显著低于-20,达到拮抗水平,说明OTFP在所设质量浓度下,能够降低小菜蛾3龄幼虫对这几种农药的敏感性;但是对4龄幼虫,OTFP与以上4种农药的共毒系数都显著高于130,除个别处理外,OTFP与各农药在所研究质量浓度下协同毒力指数都大于0,并在几个处理中超过20,显示OTFP能够提高4龄幼虫对农药的敏感性。说明保幼激素酯酶抑制剂在小菜蛾控制中具有一定应用前景,但是若与农药配合使用,需要慎重选择使用时机、农药质量浓度等。     

三氟苯嘧啶对灰飞虱及其解毒代谢酶和保护酶活性的影响

【目的】明确山东省不同地区灰飞虱种群对新型介离子类杀虫剂三氟苯嘧啶的敏感性,探讨亚致死剂量三氟苯嘧啶对灰飞虱保护酶和代谢酶活性的影响,为田间科学合理应用三氟苯嘧啶防治灰飞虱提供理论依据。【方法】分别采用稻苗浸渍法和点滴法测定三氟苯嘧啶对山东省6个灰飞虱种群[鱼台(水稻)种群、鱼台(小麦)种群、济阳种群、岱岳种群、莱芜种群和长清种群]3龄若虫和成虫的室内活性,并比较亚致死剂量(LC₁₀和LC₃₀)三氟苯嘧啶处理对灰飞虱3龄若虫3种保护酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)]和3种解毒代谢酶[谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)、羧酸酯酶(CarE)和细胞色素P450酶(P450)]活性的影响。【结果】稻苗浸渍法测定结果显示,三氟苯嘧啶对灰飞虱3龄若虫的致死中浓度(LC₅₀)为0.776～1.644 mg/L,对成虫的LC₅₀为0.752～1.076 mg/L。点滴法测定结果显示,三氟苯嘧啶对灰飞虱3龄若虫的致死中量(LD₅₀)为3.487×10     

MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究

分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。     

应用套式PCR在MDCK细胞系中发现犬细小病毒

本研究自１９９７年至１９９９年从国内部分大学实验室、卫生防疫站和动检局陆续收集１１个犬肾（ＭＤＣＫ）细胞系样品,选取犬细小病毒基因组的ＶＰ２基因上４段核苷酸序列作引物,对样品ＤＮＡ进行套式ＰＣＲ（Ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）检测;ＰＣＲ扩增产物经０．０１ｇ／ｍＬ琼脂糖凝胶电泳和克隆到ｐＧＥＭ＾－Ｔ载体并进行核苷酸序列测序鉴定后,发现我国ＭＤＣＫ细胞系中存在犬细小病毒的传代病毒株。该病毒基因组部分序列测定结果显示与犬细小病毒ＣＰＶ－Ｎ株有９１％同源性。     

静置培养MDCK细胞的生长及代谢动力学研究

为研究MDCK细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:MDCK细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖密度为53.8×104 upf·mL-1,倍增时间为24.2h;对数生长期Gluc和Gln的比代谢(消耗速率为-2.20 mg·(106cells·d)-1和-3.85μmol·(106cells·d)-1,Lac和NH4+的比生成)速率为2.25mg·(106cells·d)-1和2.22μmol·(106cells·d)-1。     

胰蛋白酶浓度对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上增殖的影响

[目的]探讨不同胰蛋白酶浓度对低致病力禽流感病毒在MDCK细胞上增殖后的HA滴度。[方法]通过3株禽流感H9亚型病毒分别接种MDCK细胞单层,加入含有不同胰蛋白酶浓度的DMEM维持液,每隔24 h观察细胞病变,并测定上清液中的HA滴度。[结果]当维持液中胰蛋白酶含量为10～20μg/ml时,培养液上清液中的HA滴度最高,达到7 log2（1∶128）。当病毒的接种浓度为10-3和10-4时,MDCK细胞在96 h几乎全部病变,峰值出现在接种后的72～96 h。[结论]当维持液中胰蛋白酶含量为10～20μg/ml时,有利于H9亚型AIV病毒在MDCK细胞上增殖。     

雌激素对奶牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期变化规律的影响

目的 研究雌激素对乳腺上皮细胞增殖及细胞生长周期变化规律的影响。方法 选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200 μmol/L雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在0、12、24、48、72 h后检测各组细胞增殖及细胞周期。结果 培养12 h时,50 μmoL/L雌激素组的OD值显著高于对照组及100 μmoL/L雌激素组(P＜0.05),且极显著高于200 μmoL/L雌激素添加组(P＜0.01);培养至12 h时,对照组及添加50 μmoL/L雌激素组其G1期极显著高于其他两组(P＜0.01),对照组S期极显著高于其他各组(P＜0.01),添加100 μmoL/L雌激素组其G2期极显著高于其他各组(P＜0.01)。结论 添加雌激素可以促进乳腺上皮细胞的增殖,且50 μmoL/L、12 h时雌激素促进乳腺上皮细胞的增殖效果最好。添加雌激素不影响乳腺上皮细胞在各时期时细胞生长的基本规律,各雌激素添加组在12 h时的细胞周期由G1、S期向G2期转化较快。     

不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究

[目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg/ml胰蛋白酶的3种培养基作为维持液,培养病毒,每隔24 h观察其细胞病变,并测定上清HA滴度。[结果]在培养72～96 h时,无血清培养基病毒液的HA滴度高于低血清培养基,而低血清培养基则高于含血清培养基。[结论]3种培养基均可用于制备禽流感病毒抗原,其中无血清培养基、低血清培养基更适用于流感病毒抗原的制备。     

犬肾细胞系的染色体组型分析与致癌/致瘤性的实验研究

 以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 4 5代的完整活细胞或冻融裂解细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的几株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MDCK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 ,只有超二倍体以上细胞才具有高的致癌 /致瘤率 (如YA株的为 2 8/ 5 8) ,亚二倍体细胞的致癌 /致瘤率很低 (其它 3株MDCK细胞的致癌 /致瘤率为 5 / 5 4 ) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。冻融裂解癌细胞系 (X株Hela、JA株Vero、M株BHK 2 1、YA株MD CK)的致癌 /致瘤性相应降低 ,极低致癌 /致瘤性细胞系 (M株或JC株MDCK)不会因冻融裂解而增加致癌 /致瘤性。证明MDCK细胞系冻融裂解物不致癌 ,降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (M ,JB ,JC株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞     

人脂肪干细胞体外增殖的安全性评价

目的探讨体外培养条件下增殖的人脂肪干细胞是否具有做为种子细胞的安全性。方法体外分离、培养人脂肪干细胞并传代,观察其生物学特性,分别对第4代及第12代的人脂肪干细胞用TRAP法检测端粒酶活性,并进行染色体核型分析。结果新鲜分离和传代的人脂肪干细胞在体外培养12代的端粒酶活性呈阴性或者低水平表达,且未见染色体核型的改变。结论体外分增殖过程中,人脂肪干细胞的端粒酶活性及染色体核型未发生异常变化,符合作为种子细胞安全性的要求。     

乌龙茶水提取物对人大肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的影响

以赛珍珠5800铁观音为材料,测定乌龙茶中水浸出物、茶多酚、游离氨基酸、可溶性糖、黄酮类物质、没食子酸、8种儿茶素和3种生物碱的含量;并将0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物作用于体外培养的人大肠癌LOVO细胞中,分别处理24和48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,并在倒置显微镜下观察细胞形态的变化;以0.6和0.8 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物处理LOVO细胞48 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,扫描电镜下观察细胞凋亡情况.结果表明,乌龙茶中各化学成分的含量均较高,水浸出物含量达40.8%以上,茶多酚含量14.2%,游离氨基酸含量1.8%,可溶性糖含量6.9%,黄酮类物质含量0.7%,儿茶素总量12.2%,咖啡碱含量1.7%,这些成分为其品质保证和功效发挥奠定了一定的物质基础.MTT法试验结果表明:0.2 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物对LOVO细胞生长无抑制作用;处理24和48 h后,0.4~1.0 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物对LOVO细胞生长的抑制率分别达13.9%~79.6%和16.4%~89.2%.0.6和0.8mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物处理下LOVO细胞凋亡率分别为60.4%和62.3%,且低含量下细胞凋亡主要呈早期凋亡形式.扫描电镜观察显示,0.6和0.8 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物处理48 h后LOVO细胞出现明显的凋亡现象,细胞体积缩小,细胞间隙增大,表面微绒毛断裂、减少甚至消失,细胞膜表面出现塌陷,产生类似空洞的结构等.因此,乌龙茶水提取物能有效抑制人大肠癌LOVO细胞增殖,并可诱导其凋亡的发生.     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体(shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306)及1条阴性对照载体(shRNA-NC),利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染sh-RNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48hshRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组(P0.05),故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);转染后24～48h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。