半胱胺促进奶山羊乳腺发育的试验研究

为了研究半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响,选6只空怀奶山羊进行自身前后对照试验和8只妊娠奶山羊进行同胎次配对试验。结果表明,空怀奶山羊对照期乳腺的腺泡很少发育,几乎看不到乳导管,试验期乳腺有明显导管生长和少量腺泡发育;妊娠奶山羊对照组乳腺随着妊娠的进行有少量腺泡发育,腺导管有明显的生长,试验组乳腺有大量的腺泡发育,腺导管生长更明显,且有分泌物出现,血浆中与乳腺发育相关的激素水平明显升高。     

半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响

为了研究半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响,选6只空怀奶山羊进行自身前后对照试验和8只妊娠奶山羊进行同胎次配对试验.结果表明,空怀奶山羊对照期乳腺的腺泡很少发育,几乎看不到乳导管,试验期乳腺有明显导管生长和少量腺泡发育;妊娠奶山羊对照组乳腺随着妊娠的进行有少量腺泡发育,腺导管有明显的生长,试验组乳腺有大量的腺泡发育,腺导管生长更明显,且有分泌物出现.试验期血浆中与乳腺发育相关的激素水平明显升高.以上结果提示半胱胺在一定程度上促进了奶山羊乳腺发育.     

半胱胺对奶山羊乳腺发育及血浆有关激素水平的影响

选3只空怀奶山羊进行自身前后对照试验和4只妊娠奶山羊进行同胎次配对试验 ,且各自进行自身前后对照 ,以消除妊娠过程中乳腺自身发育的影响。空怀奶山羊在试验期添加半胱胺(CS) ,妊娠奶山羊在试验组的试验期添加CS(每5天一次 ,剂量为100mg/kgBW ,共3次)。结果表明 ,与对照期相比 ,试验期空怀奶山羊乳腺组织的DNA含量明显升高(P<0.05) ,RNA含量变化不明显(P>0.05) ,RNA/DNA值显著下降(P<0.05)。组织学观察发现 ,对照期乳腺的腺泡很少发育 ,几乎看不到乳导管 ;试验期乳腺有明显导管生长和少量腺泡发育。与对照期相比 ,试验期血浆生长激素(GH)水平升高39.5 %(P<0.05) ,血浆催乳素(PRL)水平提高28.7 %(P<0.05)。与对照组相比 ,试验组妊娠奶山羊乳腺DNA含量明显提高(P<0.05) ,RNA含量显著下降(P<0.05) ,RNA/DNA值明显下降。组织学观察发现 ,对照组山羊乳腺随着妊娠的进行有少量腺泡发育 ,腺导管有明显的生长 ;而试验组山羊乳腺有大量的腺泡发育 ,腺导管生长更明显 ,且有分泌物出现。与对照组相比 ,试验组山羊血浆GH水平提高52.1 %(P<0.05) ,血浆PRL水平提高19.8%(P<0.05)。     

体外培养奶山羊乳腺上皮细胞的形态学观察

采用胶原酶和透明质酸酶组合消化法分离培养奶山羊乳腺上皮原代细胞,并通过胰蛋白酶和EDTA选择性消化法纯化奶山羊乳腺上皮细胞.建立了奶山羊乳腺上皮细胞系.显微镜下观察,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;角蛋白免疫组化染色后,呈现阳性反应.     

灌注葡萄糖对奶山羊乳腺营养摄取的影响

本试验研究了阴外动脉灌注葡萄糖对乳腺营养物质吸收和乳成分的影响。选用体重和产奶量相近的4只泌乳中期关中奶山羊,做阴外动脉和腹部皮下静脉手术安装血插管,采用4×4拉丁方设计,每天分别灌注葡萄糖0、12、24g和36g。结果表明:乳脂率随葡萄糖灌注量的增加而显著降低(P0.01)。灌注36g/d处理组乳脂产量显著低于其他处理组(P0.01);葡萄糖灌注提高了奶山羊的产奶量,24g/d处理组的产奶量显著高于对照组(P0.01);36g/d处理组乳腺对葡萄糖的摄取量和乳糖的产量都显著高于对照组(P0.01)。甘油三酯和非脂固形物的含量各组间差异不显著(P0.05),但葡萄糖灌注提高了乳蛋白产量,其中24g/d处理组乳蛋白产量最高,并显著高于对照组(P0.05)。葡萄糖的灌注显著降低了奶山羊干物质的采食量(P0.01)。葡萄糖的灌注对乳腺氨基酸的摄取影响不显著。葡萄糖的灌注使氨基酸合成乳蛋白的产出率提高1%～9%,葡萄糖合成乳糖的产出率提高0%～5%,有效改善了乳成分。     

半胱胺颗粒料促进羔羊增重的试验

为观察半胱胺颗粒料对羔羊增重的影响，用３日龄羔羊３０只，随机分成试验组和对照组各１５只，试验组每周喂１次ＣＳ颗粒料，观察８周，结果试验组比对照组增重提高１３．０％（Ｐ〈０．０１），表明半胱胺颗粒料具有促生长作用。     

日粮添加半胱胺对淮南麻鸭十二指肠发育的影响

本研究采用常规解剖组织学方法研究日粮添加半胱胺制剂对淮南麻鸭十二指肠发育的影响。选取1日龄淮南麻鸭200羽,随机平均分成4组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为试验组。适应性饲养1周后,从8日龄开始,分别在试验组基础日粮中添加100、200及400 mg/kg的半胱胺制剂,进行为期28 d的对比饲喂试验。结果表明:(1)与对照组相比,添加100 mg/kg半胱胺制剂组鸭十二指肠重量、绒毛高度、宽度显著增加(P<0.05);(2)添加200 mg/kg半胱胺制剂组鸭十二指肠重量、长度、肠绒毛长度、肠绒毛宽度、肠隐窝深度、肌层厚度显著增加(P<0.05);(3)添加400 mg/kg半胱胺制剂组鸭十二指肠发育无显著性变化。结果提示,日粮中适当添加半胱胺可以促进淮南麻鸭十二指肠发育。     

崂山奶山羊乳腺上皮细胞系的建立及鉴定

实验采用组织块培养法、高密度培养和连续传代法等对崂山奶山羊乳腺上皮细胞进行培养、传代及鉴定。在对纯化的乳腺上皮细胞进行形态观察和生长动力学分析的基础上,进行染色体核型分析、免疫组化、质粒转染等方面的研究。结果表明:利用组织块培养法能够有效地进行崂山奶山羊乳腺上皮细胞的培养,并已传至40代,核型分析其染色体众数为60条,证明得到具有正常形态的崂山奶山羊乳腺细胞;进一步免疫组化显示培养细胞的波形蛋白、细胞上皮膜抗原、角蛋白和β-酪蛋白等上皮细胞标记蛋白呈阳性,证明该细胞为崂山奶山羊乳腺上皮细胞;最后油红染色可见到明显的脂肪滴,外源质粒PEGFP-N1-H-FABP能够稳定地在培养细胞中表达,表明所获得的细胞具有分泌功能。由此可见,利用组织块培养法能够成功建立崂山奶山羊乳腺上皮细胞系,并且所培养的乳腺上皮细胞具备一定的泌乳潜能。     

WGCNA鉴定奶山羊妊娠至泌乳期乳腺发育关键基因

旨在通过加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）筛选奶山羊不同生理阶段乳腺发育的关键基因。本研究从GEO数据库中下载奶山羊不同生理阶段（妊娠46天、70天、90天、110天和产后40天）的乳腺组织微阵列数据集GSE14008,使用R语言的WGCNA包对数据进行共表达分析。将得到的模块与生理阶段进行关联分析,选择目标模块,并根据连接度选出枢纽基因。使用DAVID网站对模块进行富集分析后,使用String网站构建模块的蛋白互作网络,并使用Cytoscape软件得到核心基因,最终与枢纽基因取交集得到目标基因。对18个样本的8 443个基因进行加权基因共表达分析,得到30个模块,并选出4个与不同生理阶段相关的目标模块及每个模块的30个枢纽基因,同时也得到4个模块的蛋白互作网络及每个网络的20个核心基因。最终,4个模块共得到13个与乳腺发育相关的目标基因（UQCR、RGL2、NOTCH1、PTBP1、PPP5C、FZR1、UBE2L3、TNF、MAT2A、ITGB2、GPR18、JAK1、CSN2）。本研究通过WGCNA、GO富集分析和PPI网络等生物信息学技术,阐明了不同生理时期乳腺发育的关键过程,及在这些过程中起关键作用的基因,这为进一步研究乳腺发育机制提供了新的思路和线索。     

自噬对奶牛乳腺发育和功能影响的研究进展

自噬是细胞降解自身受损细胞器和长寿命蛋白的过程,有助于在饥饿、应激等情况下保护细胞存活。奶牛乳腺组织在青春期和妊娠期经历生长发育,在泌乳后期和干奶期进行退化再生,自噬在这2个过程中均发挥重要作用,既可以保护乳腺上皮细胞存活,又可以促使细胞发生程序性死亡。自噬也与机体中许多生理、病理过程相互作用,并受体内外多种因素的影响。本文就自噬的过程、自噬在奶牛乳腺组织生长发育和退化再生过程中发挥的作用及其影响因素进行综述,以期为通过调控自噬改善奶牛生产性能提供理论依据。     

胰岛素、催乳素和孕酮对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

具有泌乳功能的乳腺上皮细胞系可作为乳腺发育学、乳腺病理学、泌乳生物工程学研究的细胞模型,本研究测定了激素对奶牛乳腺上皮细胞系泌乳功能的影响,为阐述泌乳机制提供工作基础。应用HPLC方法对体外培养奶牛乳腺上皮细胞的酪蛋白和乳糖的分泌情况和细胞培养液中的酪蛋白、乳糖含量进行测定,以确定胰岛素、催乳素和孕酮处理后的奶牛乳腺上皮细胞的泌乳功能。试验结果表明：奶牛乳腺上皮细胞具有酪蛋白和乳糖的分泌能力,在72h内,随着细胞培养时间延长,胰岛素处理组细胞中的酪蛋白和乳糖的升高趋势不明显,孕酮处理组升高趋势较明显,催乳素处理组升高趋势很明显;胰岛素处理组、催乳素处理组和孕酮处理组细胞培养液中酪蛋白升高趋势均很明显,乳糖含量均很高,三组激素比较而言,胰岛素处理组乳糖含量最高。此外,三组激素对乳腺上皮细胞活力影响均很大,在72h之内,总体变化为：催乳素处理组和孕酮处理组细胞活力均升高,胰岛素处理组细胞活力下降。     

Identification of Key Genes of Mammary Gland Development from Pregnancy to Lactation in Dairy Goats by WGCNA

The purpose of this study was to select the key genes of mammary gland development at different physiological stages in dairy goats by weighted gene co-expression network analysis(WGCNA). GSE14008 mammary gland tissue microarray data set of dairy goats at different physiological stages (pregnancy 46 days, 70 days, 90 days, 110 days and 40 days postpartum) was downloaded from GEO database, and co-expression analysis was carried out using WGCNA package of R language. The target modules were selected by correlation analysis between the modules and physiological stages, and the hub genes were selected according to the connectivity degree. After enrichment analysis of the modules using DAVID website, the protein-protein interaction network of the modules was constructed using String website and the core genes were obtained using Cytoscape software, and finally the target genes were obtained from intersection of core genes and hub genes. A total of 8 443 genes from 18 samples were analyzed for co-expression of weighted genes. The 30 modules were obtained, and 4 target modules related to different physiological stages and 30 hub genes of each module were selected. Meanwhile, protein-protein interaction network of 4 modules and 20 core genes of each network were also obtained. Finally, 13 target genes related to mammary gland development were obtained from the 4 modules, which were UQCR, RGL2, NOTCH1, PTBP1, PPP5C, FZR1, UBE2L3, TNF, MAT2A, ITGB2, GPR18, JAK1 and CSN2 genes. The key processes of mammary gland development at different physiological stages and the genes that played the key role in these processes were elucidated by WGCNA, GO enrichment analysis, PPI network and other bioinformatics techniques, which provided a new idea and clue for the further research on the mechanism of mammary gland development.     

乳腺中脂肪细胞的转化和更迭

雌性动物的乳腺组织是由胚胎时期的外胚层发育而来,出生时只有少量导管和皮下基质结构,而后在性成熟、妊娠和泌乳期乳腺发育达到峰值,这一特点使乳腺成为出生后唯一可以重复再生的器官。在乳腺发育到退化的循环中,乳腺的上皮细胞、基质白色脂肪细胞、棕色脂肪细胞和肌上皮细胞经历了一系列转化和更迭,脂肪细胞的动态转化反映了乳腺的功能变化。研究乳腺细胞的转化和更迭与母畜的泌乳直接相关,对延续母畜的生产效率有重要意义。本文就乳腺中脂肪细胞转化方面的最新研究进展进行综述,为深度揭示乳腺发育过程中细胞更迭的机制提供前沿研究信息。     

甘氨酸对奶山羊乳腺炎性应答的调节及其作用机制研究

本试验在体内条件下研究了甘氨酸对奶山羊乳腺炎性应答的调节及其信号通路的变化。选用15只泌乳期经产健康萨能奶山羊,分为对照组、脂多糖(LPS)模型组和3个甘氨酸干预组,每组3只,饲养管理程序一致。对照组奶山羊不注射LPS和甘氨酸,以1 mL生理盐水取代;LPS模型组奶山羊于左右乳区通过乳头管分别注射1 mL LPS溶液(4μg/乳区);3个甘氨酸干预组奶山羊分别按照1、5、25 g/(只·d)的剂量,于左右乳区通过乳头管分别注射0.5 mL甘氨酸,连续注射5 d,第6天在左右乳区通过乳头管注射1 mL LPS(4μg/乳区)。各组奶山羊在注射LPS或生理盐水24 h后屠宰取乳腺组织样。制作乳腺组织切片,苏木精-伊红(HE)染色后用于观察病理变化;采用实时定量PCR法检测乳腺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、Toll样受体(TLR)2、TLR4、TLR9、髓样分化因子88(MyD88)、β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)基因的表达水平;采用Western blotting法检测乳腺组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达水平。结果显示:注射LPS 24 h后,3个甘氨酸干预组试验羊体温降至39.5℃以下。与LPS模型组相比,3个甘氨酸干预组炎性细胞侵润明显减少,乳腺细胞坏死程度明显减轻;高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了IL-1β、IL-8和COX-2基因的表达水平(P<0.05),只有中剂量甘氨酸干预显著下调了IL-6、TNF-α基因的表达水平(P<0.05);高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了TLR4基因的表达水平(P<0.05),只有中剂量甘氨酸干预显著下调了TLR2、TLR9基因的表达水平(P<0.05);高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了MyD88基因的表达水平(P<0.05),同时低、高剂量甘氨酸干预还显著下调了TRIF基因的表达水平(P<0.05);高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了核转录因子NF-κB p65蛋白的表达水平(P<0.05)。综上可知:1)甘氨酸通过下调TLR4及其下游关键信号分子MyD88和TRIF基因的表达,抑制转录因子NF-κB p65磷酸化,从而减少炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、COX-2的分泌。2)本研究初步阐明了甘氨酸通过抑制TLR-NF-κB信号通路从而抑制炎性细胞的激活或活性,阻止其炎症介质的释放,进而阻碍炎症反应过程实现。     

哺乳动物乳腺生物反应器的研究现状及存在问题

本文在阐述乳腺生物反应器概念的基础上，介绍了乳腺生物反应器的原理及应用现状，指出乳腺生物反应器将在生产新型牛奶和药用珍稀蛋白等方面为人类做出巨大的贡献，最后指出存在的问题并展望了乳腺生物反应器前景。     

转基因动物乳腺生物反应器研究进展

文章综述了转基因动物乳腺生物反应器的原理、应用、优点、存在问题及国内外研究进展,并对其发展方向进行了小结及展望。