黄牡丹花粉生活力测定方法的比较研究

以黄牡丹的新鲜花粉为试材,利用单因子试验比较了液体培养基中蔗糖浓度、硼、钙、镁、钾对黄牡丹花粉萌发的影响,在此基础上进行了正交试验,比较了蔗糖、H₃BO₃及CaCl₂对黄牡丹花粉萌发的影响;通过对醋酸洋红染色法、I-KI染色法和TTC染色法的比较,寻找快速测定黄牡丹花粉生活力的方法。试验结果表明:蔗糖及H₃BO₃对黄牡丹花粉萌发有极显著影响。在pH值为6.0时,蔗糖150 g·L^-1+H₃BO₃30 mg·L^-1+CaCl₂20 mg·L^-1适宜黄牡丹花粉培养,萌发率为68.7%;纯水培养没有造成花粉原生质体破裂,内含物外流,但萌发率极低,仅为3%;200 g·L^-1以上的高浓度蔗糖溶液和300 mg·L^-1以上的高浓度盐溶液会造成原生质体失水萎缩,质壁分离,这两种情况都抑制花粉萌发;TTC染色法测得的花粉活力率为64.9%,是快速测定黄牡丹花粉生活力的最适染色法。     

鹅掌楸Genomic-SSR反应体系优化

The optimization of the Genomic-SSR reaction system is a basic protocol when the Genomic-SSR is used for genetic analysis in Liriodendron. The concentrations of Mg²⁺, dNTP, Primer and rTaq were tested by L₉(3⁴) orthogonal experiment and single factor gradient experiment to gain the optimal reaction system. The results indicated that the optimal reaction system should contain 75 ng of genomic DNA, 1 μL of 10×buffer, 0.4 μL of 10 mmol·L^-1 dNTP, 0.75 μL of 2.5 mmol·L^-1 MgCl₂, 0.25μL of 10 μmol·L^-1 Primer, 0.05 μL of 5 U rTaq and final volume of 10μL. Repeated trials and two verification tests showed that this optimal reaction system was stable, reliable, efficient and suitable for the applications of Genomic-SSR in Liriodendron population genetics and quantitative genetics research.     

红楠ISSR-PCR反应体系的建立和优化

为建立稳定的红楠ISSR-PCR最佳反应体系,在探索红楠基因组DNA提取的基础上,利用单因子试验和正交试验设计对反应体系进行优化。首先采用单因子试验对Mg²⁺、引物、模板DNA、dNTPs的不同浓度水平进行优化,找出ISSR-PCR反应各因素的最佳浓度;同时为进一步增加结果的可靠性,采用正交试验设计方法 对Mg²⁺、引物、模板DNA、dNTPs 4个因素3个浓度水平进行优化和筛选。综合两种试验方法结果,最终获得了红楠ISSR-PCR最佳反应体系:反应体系为20 μL,Taq酶0.05 U·μL^-1,Mg²⁺ 2.0 mmol·L^-1,模板DNA 1 ng·L^-1,dNTPs 0.3 mmol·L^-1,引物(835) 0.5 μmol·L^-1,1×PCR缓冲液。建立重复性好、稳定性优良的ISSR-PCR反应体系,为下一步红楠群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持。     

施肥配比与芸苔素内酯对油茶生长的影响研究

采用L₉(3⁴)正交试验设计,分别对长林系列3个优良油茶无性系进行施肥配比和叶面喷施芸苔素内酯(BR)试验研究,结果表明:(1)油茶品种是影响油茶各项生长指标的最根本的因素;(2)各因子对地径、冠幅、产量和净光合作用影响权重依次是品种、因子间互作、施肥和芸苔素内酯,施肥对叶绿度影响比因子间互作影响大,而对高生长影响刚好相反;对出籽率影响依次是品种、施肥、芸苔素内酯及因子间互作;(3)18号品系、N₂P₂K₂和0.067 mg·L^-1 芸苔素内酯浓度组合时,树高、冠幅和出籽率表现最好;4号品系、N₁P₁K₁和0.067 mg·L^-1芸苔素内酯组合时,地径增长、叶绿度和产量最大;4号品系、N₂P₂K₂和0.033 mg·L^-1芸苔素内酯组合时,日均净光合速率最大。     

利用PMI选择标记进行杨树转基因体系的研究

[目的]利用不同于抗生素的PMI为选择标记基因的遗传转化体系,对杨树进行双抗虫基因(Bt和CpTI)的转基因研究.建立杨树以PMI为安全标记基因的转基因体系,为安全、高效的林木转基因育种研究提供实验依据.[方法]选择已有的转CpTI抗虫基因(利用Km^r选择标记获得)的美洲黑杨杂种优良无性系南林895杨(Populus ×euramericana ‘Nanlin895’)为受体材料,对杨树叶片、叶片分化芽、茎段生根的甘露糖敏感性等筛选优化,采用农杆菌介导的方法进行双抗虫基因的研究.[结果]较为适合的杨树叶片筛选培养基为:甘露糖8 g·L^-1和蔗糖22 g·L^-1;叶片分化芽筛选培养基为:甘露糖10 g·L^-1和蔗糖20 g·L^-1;茎段生根筛选培养基:甘露糖8 g·L^-1和蔗糖22 g·L^-1.在此基础上,获得了转Bt和CpTI双抗虫基因的植株8株.[结论]初步建立了以PMI为安全标记基因的杨树转基因体系:确定了PMI筛选的最适选择压,成功构建了含PMI选择标记基因的植物抗虫表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化最终获得了转双抗虫基因植株.     

苦楝SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

[目的]借鉴以往楝属文献报道的SSR引物,筛选高度多态性、稳定性高、重复性好的苦楝SSR引物,为苦楝遗传图谱构建、QTL定位和分子标记辅助选择育种等研究领域应用奠定基础.[方法]本研究采用单因素法和正交试验设计进行SSR-PCR反应体系优化,并利用该体系以8个不同种源的苦楝基因组DNA为模板,从135对候选SSR引物中进行引物筛选.[结果]苦楝SSR-PCR最优反应体系为:1.0 μL 50 ng·μL^-1模板DNA,1.2 μL 100 μmol·L^-1引物,1.0 μL 10 mmol·L^-1 dNTPs,0.8 μL 25 mmol·L^-1 Mg²⁺,0.15 μL 5 U·μL^-1 Taq酶,1.5 μL 10×Buffer,补ddH₂O至15 μL;最终筛选出15对具有高度多态性、稳定性高、重复性好的SSR引物.[结论]本研究成功优化了苦楝SSR-PCR反应体系,并成功筛选出15对适用于苦楝的SSR引物.     

白花树花粉生活力检测方法与贮藏特性研究

以江西吉水种源的白花树花粉为研究材料,进行了扫描电子显微镜下的花粉形态结构观察以及采用离体培养基法、I₂-KI和TTC染色等花粉生活力测定方法的比较研究,探讨了不同贮藏条件对花粉萌发的影响。研究结果表明：白花树花粉粒为长球型,具3孔沟,外壁面具细网状纹饰;花粉平均极轴长52.33±0.577 μm,平均赤道轴长26.89±0.502 μm;3种花粉生活力测定方法中以离体培养基法最有效,花粉萌发的最佳组合为：10%蔗糖+0.05 g·L^-1硼酸+100 mg·L^-1 GA₃+3 h;花粉最佳贮藏条件为-80 ℃密封保存,贮藏180 d后花粉的萌发率仍可达40.97%。     

尖峰岭抗逆性根瘤菌的筛选及其16SrDNA序列的测定

为了探讨木本豆科植物根瘤菌对不良环境的抵抗能力,对分离自海南尖峰岭国家自然保护区的9株根瘤菌进行了初步研究。结果发现:9株根瘤菌最适生长pH值均为7,最适NaCl含量均为10.0 g·kg^-1;菌株CAF224的最适生长温度为37 ℃,菌株CAF416、CAF438和CAF279的最适温度为20 - 28 ℃,其余5株为28 ℃。9株根瘤菌均可在pH值4 - 11、NaCl 20.0 g·kg^-1 、37 ℃条件下生长,其中CAF224和CAF276菌株耐受pH值3; CAF226可以在40.0 g·kg^-1 NaCl培养基中生长;CAF276可耐受20 min 50 ℃、10 min 60 ℃高温。不同宿主、不同生态条件下的根瘤菌株具有不同的抗逆性,通过综合分析,筛选出4株高抗菌株(CAF226、CAF276、CAF224、CAF414)。16S rDNA序列系统发育分析表明:9菌株在系统进化树上与GenBank中序列号为EF054889的Rhizobium tropici Clone H12(热带根瘤菌)聚为一族,相似度为99.4%,初步确定9株根瘤菌为热带根瘤菌。     

灰树花的系统发育分析和主要木质素降解酶的测定

对灰树花菌株迁西二号进行了ITS序列扩增与测序(GenBank登录号为GU584099),并对灰树花及相关白腐菌进行了基于ITS序列的系统发育分析,结果表明灰树花与Grifola sordulenta (Mont.) Singer等白腐菌的亲缘关系较近。采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加4种不同底物,对菌株迁西二号在25 ℃恒温下静置培养,得到了不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测了在470 、420 、310 nm处对于2,6-二甲氧基苯酚 (2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、3,4-二甲氧基苯甲醇/藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(LiP)产生和活性大小的依据,从而获得了灰树花木质素降解酶系统的主要酶系及其与培养基的成分和酶作用底物的基本关系。结果表明,灰树花可产生MnP和漆酶,但不产生LiP;对比4种成分不同的培养液酶活力测定结果,未添加底物的培养液MnP最大酶活仅为2.96 U·L^-1,漆酶最大酶活仅为4.49 U·L^-1。添加底物木屑和2,6-DMP后MnP最大酶活为8.06 U·L^-1,漆酶最大酶活为9.85 U·L^-1,表明在培养液内添加酶的底物木屑后能轻微地提高两种酶的分泌量。     

Characterization and role of glucose-6-phosphate dehydrogenase of Populus suaveolens in induction of freezing resistance

Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH, EC 1.1.1.49) was purified from the leaves of 8-week-old Populus suaveolens cuttings. The enzyme activity in the absence and presence of reduced dithiothreitol (DTT_red) was determined. The results show that the G6PDH activity is not inactivated by pre-incubation with DTT_red, indicating that the purified enzyme probably presented in cytosol of P. suaveolens. The catalytic characteristics and kinetic parameters of cytosolic G6PDH purified from P. suaveolens cuttings were also studied. The results show that G6PDH is characterized by K _m value of 360 μmol·L⁻¹ for G6P and 16 μmol·L⁻¹ for NADP, a pH range of 7.3-8.9, and the maximum activity around pH 8.2. The enzyme activity is inhibited by various metabolites such as NADPH, NADH, GTP, UTP, ATP, AMP, ADP, CoA, acetyl CoA, fructose-6-phosphate (F6P), erythrose-4-phosphate (E4P), ribose-5-phosphate (R5P) and 3-phosphoglycerate (3-PG) (all at 1 mmol·L⁻¹ except for NADPH and NADH) to different extents. NADPH is the most effective inhibitor of enzyme activity, with an inhibition of 72.0%. The addition of metal ions such as MgCl₂, CaCl₂ and KCl (all 1.0 mmol·L⁻¹) to the standard reaction mixture has no remarkable influence on the cytosolic G6PDH activity. However, CdCl₂ (1.0 mmol·L⁻¹) causes high inhibitory effect on the enzyme activity. To explore the role of G6PDH on the enhancement of freezing resistance induced by freezing acclimation, the changes in the cytosolic G6PDH activity and freezing resistance (expressed as LT₅₀) of P. suaveolens cuttings during freezing acclimation at −20 °C were investigated. The results reveal that freezing acclimation decreases LT₅₀ of cuttings, and increases the activity of cytosolic G6PDH compared with control ones, while 2 d of de-acclimation at 25 °C result in a decrease in cytosolic G6PDH activity, and caused an increase in LT₅₀. Furthermore, the change in cytosolic G6PDH activity is found to be closely correlated to the degree of freezing resistance of cuttings during freezing acclimation. It is suggested that cytosolic G6PDH may be involved in the induction of freezing resistance of cuttings. [Supported by the Foundation of State-designated Base for Biology Researching and Teaching in Beijing Forestry University]     

利用深黄被孢霉发酵生产油脂的初步研究

为提高微生物油脂产量,以产油微生物深黄被孢霉为试验菌株,采用单因素试验设计,通过摇瓶培养,研究了产脂培养基中碳源、氮源种类及其浓度、接种量、初始pH值、无机盐离子对菌体生长和油脂积累的影响,确定了深黄被孢霉摇瓶发酵产油脂的优化培养条件为:葡萄糖100 g.L-1,酵母粉3.0 g.L-1,接种量为20%,pH值为5.0~6.0,硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5 g.L-1,磷酸二氢钾(KH2PO4)2.0 g.L-1。在优化培养条件下菌体生物量为20.62 g.L-1,油脂含量为43.02%,油脂产量为8.87 g.L-1。     

白花泡桐优树试管嫁接幼化及组培快繁技术研究

以白花泡桐优树‘白优2号’为试验材料,通过组织培养和试管嫁接方法,对白花泡桐优树材料的幼化技术进行了研究.结果表明:外植体初代培养萌发的嫩芽为最适合的接穗;‘建始桐3号’为试管嫁接较合适的砧木;采用劈接进行;MS+ NAA0.3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1为试管嫁接培养基;继代增殖和生根培养基分别为1/2MS ...     

柚木花粉离体萌发试验

柚木(Tectona grandis L.f.)是世界名贵的用材树种,天然分布于印度、缅甸、泰国和老挝[1],具有生长快、用途广、纹理美观和价格昂贵的特点,已在热带、南亚热带地区广为引种,是世界上人工林种植面积最大的4个树种之一,也是单位面积产值最高的一个造林树种[2-3]。我国引种柚木已有170多年的     

宽叶杜香叶柄再生体系建立及种质离体保存研究

The tender leafstalks of Ledum palustre var.dilatatum were used as explants for the experiment.Uniform design for the most suitable media for shoots regeneration immediately at base of tender leafstalks,rooting and germplasm conservation in vitro was screened.The results showed that N6+ZT 2.65 mg·L-1+IAA 0.05 mg·L-1 was fits for shoots regeneration,the frequency of shoots induction was higher than 92.5%;MS(modified)+IAA 0.1 mg·L-1+Kt 0.75 mg·L-1 for rooting,the rate of rooting was 98%;N-68+B9 2.5 mg·L-1+ Ph...     

几种化学调节剂及其组合对板栗雌花数量及结实性能的影响

用 BR、GA3 、PP3 3 3 、KH2 PO4 、H3 BO3 共 5种化学调节物质进行了叶面喷布试验 ,观察它们在板栗开花结果上的效应。结果表明 ,不同药剂、浓度及药剂组合对板栗母枝平均结果枝数、长度、每结果枝雌花序数 ,母枝平均雄花枝数 ,单果质量 ,三果率和空苞率的影响有明显的差异。综合考虑化学调节物质在提高板栗雌花量和果实产量 ,以及降低空苞率上的试验效果 ,最佳的化学处理为 BR0 .0 1mg· L-1 PP3 3 3 1g· L-1 KH2 PO4 7.5g· L-1 H3 BO3 5.0 g· L-1,可使板栗结果枝数目平均由 1.2个增加至 2 .833个 ,结果枝平均雌花数由 1.56 7个增加到 1.8个 ,平均空苞率由 30 .70 %降至 9.0 3%     

不同绿僵菌菌株对筛胸梳爪叩甲幼虫的毒力测定

竹林金针虫是南方竹林笋期最为重要的害虫之一,筛胸梳爪叩甲幼虫是竹林金针虫的优势种群,应用绿僵菌防治具有重要意义。测定了3株绿僵菌对筛胸梳爪叩甲幼虫的毒力,并比较了毒土法和毒饵法两种施菌方式对绿僵菌致病力的影响。结果表明,平沙绿僵菌WP08菌株和金龟子绿僵菌30104菌株对筛胸梳爪叩甲幼虫具有明显的致病效果,在30 d的试验期内,校正累计死亡率分别为90.0%和66.3%,半数致死时间（LT₅₀）分别为15.8 d和25.8 d;毒土法的校正累计死亡率略高于毒饵法,分别为60.1%和52.0%,LT₅₀分别为22.6 d和28.0 d。金龟子绿僵菌LRC112菌株对金针虫无致病力。     

Cd及矿质营养元素在结缕草植株中的积累特性

以水培方法研究了镉在结缕草中的积累特性及对矿质元素含量的影响。结果表明:Cd²⁺处理下结缕草根、叶中镉的分布比例为细胞壁>胞液>细胞器。低浓度(1、10 mg·L^-1)处理下,结缕草茎细胞液中镉的比例分别较细胞壁中镉的比例高出61.70%、69.60%;高浓度(100 mg·L^-1)处理下,细胞壁中镉的比例较细胞液中镉的比例高出47.70%。低浓度(1、10 mg·L^-1)处理的结缕草地下部的镉含量显著高于地上部,而高浓度下(100 mg·L^-1)结缕草地上部的镉含量较地下部显著提高37.31%;随着处理浓度的升高,镉转运系数显著提高,100 mg·L^-1处理下镉转运系数分别较1、10 mg·L^-1提高了4.12、2.45倍。高浓度(100 mg·L^-1)处理下,结缕草地下部N、K、Ca、Mg含量下降,P、S含量有所提高。高浓度(100 mg·L^-1)镉处理下,地上部N含量较对照显著上升16.11%,Ca、Mg的含量均较对照升高;不同浓度镉处理的地上部P、K、S含量均较对照降低。     

Na2SO4胁迫对沙枣幼苗生长和光合生理的影响

采用盆栽控制试验,研究了不同浓度(0、60、120和180 mmol·L-1)Na2SO4胁迫对沙枣幼苗生长和光合特性的影响。结果表明:(1)盐胁迫对沙枣幼苗生长具有显著的抑制效应。不同浓度Na2SO4胁迫沙枣的株高、侧枝数、总叶面积、单株叶片数、比叶面积以及各组织(除根)生物量均显著低于对照,且均随盐胁迫浓度的升高呈下降趋势,而根冠比值则由对照的0.153 1显著增加到180 mmol·L-1Na2SO4胁迫幼苗的0.348 7。(2)盐胁迫显著降低了沙枣幼苗的光合能力。随着Na2SO4胁迫的加剧,净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、胞间CO2浓度(Ci)和蒸腾速率(Tr)均呈下降的趋势,而气孔限制值(Ls)和水分利用效率(WUE)则依次增加,且Pn下降主要受气孔限制;180 mmol·L-1Na2SO4胁迫沙枣幼苗的Pn、Gs、Ci和Tr分别为对照的71.57%、30.85%、67.15%和51.65%,而Ls和WUE则分别为对照的1.91、1.38倍。(3)盐胁迫强度与幼苗株高、总叶面积、单株叶片数、比叶面积、茎生物量、叶生物量、总生物量等生长指标以及Pn、Gs、Ci、Tr等光合参数呈极显著负相关,叶片的光合参数与总叶面积、单株叶片数呈显著或极显著正相关,而叶片的生长指标、光合参数与幼苗的株高生长和生物量累积也呈显著或极显著正相关。     

卷荚相思组培快繁技术研究

[目的]建立16年生卷荚相思优树组培快繁技术体系。[方法]以16年生卷荚相思优树的当年新生枝条带腋芽茎段为材料,对卷荚相思外植体进行消毒、初代培养、增殖培养、生根培养和移植等。[结果]表明:通过对16年生卷荚相思成年优树采条进行扦插,以扦插苗建立采穗圃,选取采穗圃中当年生健康无病虫害枝条的中段为外植体,最佳消毒方式为75%的酒精处理0.5 min和0.1%的升汞处理18 min,其存活率达69.33%,芽诱导率达86.67%;最佳初代培养基为改良MS+蔗糖40 g·L-1,出芽率为91.33%。最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1,35 d增殖倍数可达3.50倍;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.25 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1,15 d生根率为96.11%;将生根苗移植至以沙为基质的营养杯中,存活率为71.11%。[结论]研究解决了16年生卷荚相思成年优树外植体污染率高和芽诱导率低等问题,建立的组培快繁技术体系对今后加快卷荚相思良种选育及优质苗木大量扩繁具有重要作用。