苦豆子组织培养研究进展

阐述了苦豆子组织培养过程中不同外植体诱导愈伤组织的效果差别、培养基选取和优化、植物生长调节剂浓度和配比等因素的作用影响,总结了苦豆子组织培养的研究现状,对苦豆子组织培养中存在的主要问题进行了探讨。     

苦豆子组织培养初步研究

采用苦豆子 (Sophara alopecuroides L.)无菌苗下胚轴和茎段进行组织培养 ,以获得再生植株。结果表明 ,通过苦豆子带胚芽茎段组培→丛生芽→继代培养→生根成苗这一途径 ,腋芽分化苗率达 83% ,形成的丛生芽生长健壮 ,对继代培养的芽进行生根培养最高生根率达 6 9.8% ,而通过苦豆子下胚轴诱导愈伤组织→分化出芽→生根成苗这一途径则很难形成植株 ,还需要进一步实验探索     

苦豆子RAPD反应体系的优化

以苦豆子基因组DNA为模板,采用单因素递进筛选和全面正交设计相结合的方法,获得苦豆子RAPD扩增反应的优化体系.结果表明:在20μL反应体系中,DNA模板20 ng,引物浓度为30μmol/L,Mg2+浓度为50μmol/L,Taq DNA聚合酶2.5 U/μL,dNTP浓度为5 mmol/L,10×PCR Buffer 2.0μL.优化后的体系扩增产物稳定,条带清晰.利用随机引物09M27412对5份苦豆子DNA进行扩增,证实该体系重复性好,结果稳定,可作为苦豆子遗传多样性分析的1个稳定体系.     

苦豆子及其利用

苦豆子是广泛分布在我国西北干旱、荒漠化地区的一种植物,具有改良土壤、防风固沙等多种用途,在干旱沙化严重的地区能有效地起到节水和增加农民收入的作用;其提取的苦参碱可以加工成多种生物产品,所剩余的残渣是很好的饲料;具有很高的开发利用价值。     

非洲菊再生体系的建立

以非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）大红花品种花托为外植体,选用MS为基本培养基,附加激素6-BA、NAA和IBA,研究了不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响。结果表明,诱导愈伤时。MS＋6．BA 10mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1 ＋琼脂5．5g·L^-1的效果最佳,培养30d后转接到MS＋6-BA2．0mg·L^-1＋NAA1mg·L^-1＋AD（硫酸腺嘌呤）5mg·L^-1＋蔗糖 30g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1的培养基上诱导芽的分化。增殖培养以MS＋6-BA2．0mg/L＋NAA0．5mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1为佳。生根培养是以1／2MS＋IBA0．2mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1的培养基最好。     

苦豆子生物碱的毒性研究

用体积分数为90%的乙醇结合超声波对苦豆子植物进行提取,分别用氯仿、正丁醇进行萃取提取苦豆子生物碱,以小鼠为试验动物,研究苦豆子生物碱氯仿、正丁醇萃取组分的毒性.通过试验测得苦豆子生物碱氯仿萃取组分的半数致死量为178.89mg/kg,正丁醇萃取组分的半数致死量为209.06mg/kg.小鼠内脏器官出血是苦豆子生物碱中毒的主要病理变化,靶器官是肝脏、肾脏和肺脏.     

龟背竹组培再生体系建立

以茎段为外植体,进行龟背竹组培再生技术研究.结果表明,诱导芽分化最佳培养基为1/2MS+BA 2.0 mg.L-1+NAA 0.7 mg.L-1,适宜龟背竹芽增殖的培养基为:1/2MS+BA 1.2mg.L-1+NAA 1.1 mg.L-1+KT 0.3 mg.L-1,增殖系数达4.6;试管苗的生根培养基以1/2MS+NAA 1.0 nag.L-1+0.1 96AC组合生根效果最高,生根率达96%.     

生菜组织培养再生体系的建立

以“四季耐热抗抽薹”生菜为试材,10d苗龄的真叶为外植体,MS培养基为基本培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA激素配比,经愈伤组织诱导、芽分化、生根3个步骤的离体培养,建立生菜快速、高频再生体系,以期为进一步研究生菜遗传转化奠定基础.研究表明:该品种最佳诱导外植体分化培养基为MS+0.15 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,出愈率达到100％,出芽率达到87％.     

苦豆子cDNA文库的构建

以产于新疆豆科碟形花亚科槐属植物苦豆子(Sophoraalopecuroides.L)幼苗为材料,用改进的一步抽提法提取了总RNA,再以生物素标记的Oligo(dT)为引物,经过磁性球珠法,分离出mRNA,反转录酶催化合成cD NA。与EcoRIAdaptor连接,再经SeptacrylS 400分级,磷酸化后将双链cDNA克隆于λgt11载体中,经体外包装和感染Y1090菌株,成功构建了效价为0.9×106pfu·ml-1苦豆子幼苗cDNA文库。随机挑选5个重组噬斑,PCR法检查出重组克隆的插入片段平均大于1000bp,说明cDNA文库质量较高。     

苦豆子种子营养成分及其急性毒性

为了评价苦豆子种子的营养价值和急性毒性,按照国家标准法对苦豆子种子的营养成分进行检测分析,并采用改良寇氏法测定苦豆子种子提取物对小鼠灌胃的急性毒性,以期为苦豆子种子的资源化利用和安全性提供理论依据。营养成分检测显示,苦豆子种子粗蛋白为25.19%、粗脂肪为4.46%、粗纤维为20.22%,同时还含有Ca、P、Mg、K、Cu、Fe、Mn、Ze、Cr和Se等多种矿物质元素以及丰富的氨基酸,营养价值极高。急性毒性试验显示,用苦豆子种子醇浸膏和生物碱分别染毒后,高剂量组小鼠均出现明显的呼吸系统和神经系统症状,而低剂量组小鼠部分出现神经症状,但停止染毒后存活小鼠愈后良好。采用改良寇氏法计算出苦豆子种子醇浸膏的LD_(50)为1 406.05 mg/kg, 95%可信限为1 221.80～1 621.81 mg/kg;苦豆子种子生物碱的LD_(50)为416.87 mg/kg, 95%可信限为346.74～501.19 mg/kg。以上结果表明苦豆子种子营养价值高,且具有低等毒性,但经脱毒处理后可作为饲料资源开发利用。     

笃斯越橘再生体系的建立

以笃斯越橘休眠期的茎段和单芽为外植体,采用改良WPM为基本培养基,研究不同激素、外植体类型对植株再生和生根情况的影响.结果表明,枝条经过室内水培及10℃预处理,以单芽为外植体比以茎段为外植体可更有效快速地获得无菌苗.茎段及单芽的离体增殖生长的最适宜培养基为:WPM+1.5 mg·L-1 ZT+0.3 mg·L-1 NAA;生根最适宜培养基为:1/2WPM+1.5 mg·L-1 IAA+0.1 mg·L-1 IBA,生根成活率达82.3%.     

丰花月季再生体系的建立

分别以丰花月季叶片、叶柄和茎段为外植体,进行了愈伤组织的诱导及植株再生的研究。结果表明,丰花月季诱导愈伤组织最佳激素浓度配比是1/2MS+2,4D 5 mg.L-1+BA 1 mg.L-1;所得到的愈伤组织在MS+6-BA1 mg.L-1+2,4D 2.5 mg.L-1+GA3 1 mg.L-1的培养基上继代保存两个月后于MS+NAA 0.02 mg.L-1+TDZ 1.8 mg.L-1+KT1 mg.L-1上分化出不定芽;不定芽在1/2MS+IBA 0.5 mg.L-1上的生根率为91.25%。     

‘Siberia’百合再生体系的建立

以东方百合‘Siberia’离体鳞片为外植体,研究不同激素质量浓度对芽的诱导、增殖、小鳞茎形成、叶片和叶柄再生及生根的影响。结果显示:最适不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L,分化率85%;最适增殖培养基为MS+6-BA 0.7mg/L+NAA 0.2mg/L,芽增值系数为3.83;不定芽形成鳞茎的适宜培养基为:MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+7%蔗糖,增值系数2.47。鳞片叶片的最适再生培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 1.0mg/L,分化率为92.5%;叶柄的最佳再生培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L,分化率为83.3%;暗培养对鳞片叶片及叶柄的再生无显著性的差异,分化率均在80%以上;最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.2mg/L,生根率100%。     

山豆根毛状根培养体系的建立与优化

为探索定向培养山豆根植物细胞及器官获取有效药用成分的新途径,为山豆根有效药用成分的大规模生产奠定基础,采用共培养法研究发根农杆菌R1601感染诱导山豆根无菌苗子叶产生毛状根,并在此基础上从不同培养液、不同蔗糖浓度和外源激素对毛状根生长的影响方面筛选山豆根毛状根生长的最佳培养液。结果表明:利用发根农杆菌R1601感染山豆根无菌苗子叶16min,在MS+AS 100μmol/L的固体培养基上培养可诱导产生毛状根,且诱导率最高,达66.67%;1/2 MS+IAA 0.5mg/L+5%蔗糖的培养液最有利于山豆根毛状根的生长。     

�����γؿඹ�Ӻ�ܸܸ�ݵ�Ⱥ����ɼ�����

为给宁夏盐池沙边子地区荒漠草原的生态维护提供依据,选择苦豆子(Sophora alopecuroides)和芨芨草(Achnatherum splendens)2种典型植物群落,采用之字形样线法,在每种植物群落样地设置5条样线,每条样线上取6个1 m×1 m样方,调查植被的高度、盖度、多度和频度等.计算每种植物的重要值,分析该地区2种典型植物群落的植被组成和群落特征,采用Shannon-Wiener指数、Simpson多样性指数、均匀度指数和物种丰富度指数分析植物的多样性.结果表明:苦豆子群落中有15种植物,隶属于9个科15个属,芨芨草群落中有14种植物,隶属于7个科11个属.2种植物群落的植物组成以多年生草本为主,一年生植物种类虽少但其多度和频度较高.2种植物群落多样性虽不是很高,但相对于荒漠草原其稳定性较强,2种群落属于轻度相似,但优势种又差异明显.     

茄子组织培养再生体系研究初报

以茄子的子叶和下胚轴为外植体,研究了不同激素组合对外植体分化的影响,建立茄子下胚轴高效再生体系,并初步探讨了温度对植株再分化的影响.结果表明:下胚轴不定芽诱导的最适培养基为MS NAA 0.2 mg/L 6-BA 2.5 mg/L,芽诱导率为46%;子叶不定芽诱导的最适培养基为MS NAA 0.2 mg/L KT 2.0 mg/L,芽诱导率为37%.     

大籽猕猴桃(Actinidia macrosperma)离体再生系统的建立

大籽猕猴桃,其根茎是著名抗癌中药,中药名称猫人参,其野生资源已近枯竭.本文选用大籽猕猴桃的茎段(至少带一个节)和叶片作为外植体,筛选出了从启动、快繁直至生根等各个阶段的最适培养基,在实验室建立了程序简单、重复性好的离体快繁体系,实现了大籽猕猴桃组培苗的快速繁殖.实验发现以茎段作为外植体效果较好,既容易消毒,又能很快诱导腋芽萌发;以叶片作为外植体,能成功诱导出愈伤组织,但此愈伤组织的分化能力极低.以茎段作为外植体获得的无菌培养物在不同发育阶段适宜的培养基组成:外植体启动培养基为MS+BA 5 μmol/L+NAA 1 μmol/L;最适增殖培养基为MS+BA 2 μmol/L+GA 1.5 μmol/L+ZT 4 μmol/L,35 d繁殖系数为9～10;最适生根培养基为1/4MS+IBA 2 μmol/L,生根率可达100%,培养35 d,平均苗高6.28 cm,平均移栽成活率为91%.     

苦豆子内生真菌的分离和拮抗生防菌的筛选

采用常规分离方法对健康苦豆子植株体内的内生真菌进行了分离和筛选,结果表明:苦豆子的不同部位内生真菌的数量有所不同,同一植株根部比茎部种类多。经初步鉴定均为半知菌。拮抗结果表明:分离获得了内生菌菌株对病原菌均有不同程度的抑制作用,其中无孢菌KG20对小麦赤霉有较强的抑制作用,抑制率达82.5%,并产生明显抑菌带。无孢菌KG20菌株培养滤液活性测定结果表明:其培养滤液对6种病菌均有不同程度的拮抗作用,尤其对小麦赤霉病菌抑制作用强,抑制率达79.23%。