麻痹性贝类毒素在栉孔扇贝体内的代谢轮廓

将栉孔扇贝(Chlamys farreri)直接暴露于产毒藻,通过比较各组织器官中毒素的蓄积及代谢转化特征,研究麻痹性贝类毒素(Paralytic Shellfish Toxins,PSTs)在栉孔扇贝体内危害形成的过程。结果显示,分布于中国的一株塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense,AT5-3株),其生长及产毒性状稳定,产毒能力强,主要成分为Gonyautoxins-1-4(GTX14),单细胞产毒能力为7.95 fmol/cell;栉孔扇贝对该产毒藻具有较强摄食能力及PSTs蓄积能力,总体蓄积效率达到84.4%,最高蓄积浓度为1903μg STX eq./kg,不同组织蓄积能力由高到低依次为内脏团、性腺、外套膜、闭壳肌;内脏团对PSTs的代谢能力也最强,是该毒素在栉孔扇贝体内蓄积代谢的靶器官;此外,栉孔扇贝对PSTs表现出较强的生物转化能力,主要转化途径为:N-磺酰胺甲酰基类毒素(N-Sulfocarbamoylgonyautoxin-2,C1)→膝沟藻毒素(Gonyautxins-2,GTX2)/脱氨甲酰基类毒素(Decarbamoylgonyautoxins-2,dc GTX2),N-磺酰胺甲酰基类毒素(N-Sulfocarbamoylgonyautoxin-3,C2)→膝沟藻毒素(Gonyautxins-3,GTX3)。本研究中,栉孔扇贝对PSTs总体呈现出迅速蓄积和缓慢代谢的特点,同时,GTX14和NEO等高毒成分所占比例较高,造成扇贝中PSTs毒性和风险性均显著升高。本研究有助于科学评估PSTs危害的形成机制,为系统监控我国PSTs风险性提供科学支撑。     

pH对栉孔扇贝体内几种免疫因子的影响

测定不同pH（7．0，7．3，7．6，8．5，9．0）环境胁迫下栉孔扇贝（Chlamys farreri）体内酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）及胞内活性氧含量（ROIs）等5种免疫指标的变化。结果表明，在pH高于正常组（pH8．0）时，上述5种免疫指标均随pH的增加而明显升高；在pH低于正常组时情况稍复杂，4种酶活性均呈先上升后下降的趋势。ACP在pH7．6时酶活性上升至峰值，随后酶活性降低；ALP、SOD和CAT活性均在pH7．3时达峰值，随后酶活性降低；而胞内活性氧含量则随pH降低持续增加。实验结果表明，pH对栉孔扇贝免疫活性有明显的刺激作用，且在一定范围内随刺激强度的增加呈现免疫活性的正调节；但在高强度pH刺激下，扇贝免疫活性呈现出负调节，这种负调节可能与高强度刺激引起的免疫机能疲劳或损伤有关。[中国水产科学，2006，13（4）：650—654]     

栉孔扇贝的氮、磷排泄及其与温度、壳长之间的关系

通过天然饵料条件下的室内流水法,测定并计算了栉孔扇贝氮、磷排泄物的排泄量及温度和壳长对其的影响,建立了相关的数学模型,并对栉孔扇贝排泄物中各种形态的N、P含量与组成进行了分析。结果显示:在实验条件范围内,扇贝排泄物中VDTN、VPTN的分布范围分别为14.94～248.28 μg·(h·ind) -1、1.47～84.08 μg·(h·ind) -1,VDTP、VPTP分布范围分别为0.007～42.54 μg·(h·ind) -1、0.916～17.78 μg·(h·ind) -1。DTN、PTN占总氮排泄量的百分比分别为77.2%、22.8%,其中氨氮占50.8%;DTP、PTP占总磷排泄量的百分比分别为75.6%、24.4%。各形态N、P排泄速率均随着温度的升高而增加,溶解、颗粒态N、P与温度之间的关系可以用二项式曲线描述,而与壳长的关系可以用幂函数关系描述。溶解、颗粒态N、P均随温度和壳长的增加呈加速增大的趋势,它们与温度和壳长之间的关系均可用对数曲线加以定量描述,其交互作用模型分别为：VDTN=131.13Lnt+217.95LnL-617.65,VPTN=67.41Lnt+54.07LnL-242.37,VDTP=8.67Lnt+65.82LnL-112.15和VPTP=11.73Lnt+11.14LnL-43.74,经协方差分析结果表明,其相关系数均呈非常显著水平。图2表4参22 关键词：栉孔扇贝; 氮; 磷; 排泄     

栉孔扇贝烟台养殖区海水水质及扇贝体内重金属含量评价

为了解栉孔扇贝集中上市季节扇贝养殖区海水水质状况及扇贝体内重金属蓄积情况,本研究在烟台选取长岛、开发区和牟平区3处具有代表性的栉孔扇贝养殖区,于2021年4月分别采集表层海水及栉孔扇贝样品,对海水常规指标及海水和扇贝中的重金属(Pb、Cd、Cu、Hg、Zn和Cr)含量进行测定和分析。结果表明：在栉孔扇贝集中上市时间,3个栉孔扇贝主要养殖海域海水中溶氧(DO)、化学需氧量(COD)和营养盐均符合国家一类海水水质标准,重金属含量均未超出二类海水水质标准值,其中,从Cu含量来看,长岛养殖区海水水质明显优于另外2个养殖区海水。栉孔扇贝对重金属Zn和Cu的富集有明显的选择性,富集系数超过1 000。本研究中3个养殖海域栉孔扇贝整体软体组织及闭壳肌中Pb、Cd、Hg和Cr 4种重金属含量均符合中国食品安全国家标准,Cu和Zn含量均符合《海洋生物质量》限量要求,且为一类标准。[中国渔业质量与标准,2022,12(4):36-41]     

栉孔扇贝三倍体与二倍体的呼吸代谢比较

对栉孔扇贝三倍体的基础耗氧率进行了研究，结果表明，栉孔扇贝三倍体的基础耗氧率在18－20℃范围内随温度的升高而增加，其耗氧与温度的关系可用以下公式表示：0＝0.017e^0-1945tr^2=0.943(2N-A),O=0.072e^0-0958tr^2=0.9955(2N-B),O=0.0492e^0.1185tr^2=0.9088(2N-C),O=0.049e^0.1282t,r^2=0.9882(3N-A),0=0.1265e^0.0802t,r^2=0.9512(3N-B),O=0.0927e^0.0063tr^2=0.9861(3N-C),(O为耗氧率，t为温度）三倍体栉孔扇贝的基础耗氧率存显的昼夜节律，在上午9：00－10：00达到最高，为1．301－0.823mg/(g.h)，在夜间21：00－22：00最低，为0．0002－0.243mg/(g.h)，其基础耗氧率和昼液节律均与二倍体没有明显的差异。     

栉孔扇贝对海水中Pb积累排放规律研究

研究了海水中Pb在栉孔扇贝(Chlamysfarreri)内脏、肌肉、鳃组织内吸收、积累和排放规律及海水中不同浓度Pb对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)内脏、肌肉、鳃组织蓄积量的影响。结果表明:Pb浓度为0.5mg/L时,各组织内Pb蓄积量随暴露时间增加而增大,第9天均达吸收平衡,此时Pb蓄积量(mg/kg干重)为鳃(1356)>内脏(226.6)>肌肉(52.14);蓄积速率(mg/kg·d-1)为鳃(178.3)>内脏(37.30)>肌肉(10.48)。将达到吸收平衡后的栉孔扇贝移入清洁海水中排放结果表明:随排放时间增加各组织铅蓄积量明显下降,第16天时各组织铅排出率为:鳃(96.69%)>内脏(92.09%)>肌肉(71.20)%;排出速率为(mg/kg·d-1):鳃(81.98)>内脏(10.09)>肌肉(3.001)。海水中Pb浓度对Pb蓄积量有明显影响,随着Pb浓度升高,各组织内Pb蓄积量明显上升,其中鳃的蓄积量最大,表明:双壳类软体动物的鳃具有较高的蓄积重金属的能力,并且海水中Pb浓度能提高Pb的生物有效性。     

Vc对栉孔扇贝体内水解酶和抗氧化酶活性的影响

研究了注射不同剂量Vc对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)体内5种参与免疫防御反应的水解酶和抗氧化酶活性的影响。结果表明,当Vc注射剂量为20μg/g和40μg/g时,在注射后12、24和48h,两实验组栉孔扇贝体内溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)活性都明显升高,而超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均明显降低。同时本实验发现,Vc对40μg/g实验组中各种酶的活性刺激与20μg/g实验组相比需要更长的时间。本研究表明,Vc可有效增强栉孔扇贝的免疫活性,且因剂量不同而有差异。     

栉孔扇贝生物沉积作用的研究

2001年3～9月,在自然养殖状态下对栉孔扇贝(Chlamys farreri)的生物沉积及其对物质输运的影响进行研究.结果表明,栉孔扇贝能加速海洋中颗粒物质的沉积,生物沉积率分别为小个体(壳长30～40 mm)72.31～109.85 mg·ind-1·day-1、中等个体(壳长50～60 mm)103.49～207.77 mg·ind-1·day-1和大个体(壳长60～70 mm)120.05～237.65 mg·ind-1·day-1.栉孔扇贝的生物沉积与其壳长呈正相关线性关系,与其干组织重呈正相关的指数关系,而单位重量的生物沉积则与壳长和干组织重分别为负相关的线性和幂指数关系.海水温度和环境中饵料数量是影响栉孔扇贝的生物沉积的重要因子.     

ELISA分析技术在华贵栉孔扇贝与墨西哥湾扇贝病毒检测的应用

运用ELISA分析技术,对湛江地区不同时期的华贵栉孔扇贝和墨西哥湾扇贝体内感染的病毒粒子的季节性变化进行了研究。结果表明1龄华贵栉孔扇贝体内病毒粒子的含量在11月份最高,其P/N值和OD值分别为0.8558和2.51,相比华贵栉孔扇贝大规模死亡提前10-20d。1龄墨西哥湾扇贝的OD值在10、11月份的检测中大于1,即表示墨西哥湾扇贝中可能存在华贵栉孔扇贝病毒粒子,其他月份的检测结果均为完全阴性,即没有检测到华贵栉孔扇贝病毒粒子。     

虾夷扇贝EST-SSR标记在栉孔扇贝中的通用性研究

为研究虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)和栉孔扇贝(Chlamys farreri)的群体遗传多样性并分析其亲缘关系,对在虾夷扇贝中开发的60个EST-SSR位点在栉孔扇贝中的通用性进行了研究。结果显示,21个位点可在栉孔扇贝中扩增出特异性条带,通用性比例达35.00%,其中,17个位点具有多态性,多态性比例达28.33%。在虾夷扇贝和栉孔扇贝群体中,平均等位基因数(N_a)分别为2.7647和2.3529;平均有效等位基因数(N_e)分别为1.9487和1.6350;平均观测杂合度(H_o)为0.6314和0.3333;平均期望杂合度(H_e)为0.4569和0.3139;平均多态信息含量(PIC)为0.3726和0.2597;Nei's(1973)基因多样性指数(I)分别为0.4493和0.3087;Shannon信息指数分别为0.7176和0.5041;固定指数(F_(is))检测发现,7个位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;遗传分化系数(F_(st))为0.2398。本研究开发的21对通用性EST-SSR标记,为进一步开展虾夷扇贝和栉孔扇贝遗传多样性分析、分子辅助育种、基因发掘和种质资源评价奠定了基础。     

栉孔扇贝亲贝室外饲养试验

在室外塑料大棚中以自然（接种）繁殖方法，使饵料生物的总密度超过６万个细胞／ｍｌ；饲养栉孔扇贝亲贝３０天，亲贝的成活率在９６％以上，性腺成熟并产卵，亲贝的各项生物指标均明显好于自然海区。     

三倍体栉孔扇贝的生殖腺观察

在栉孔扇贝（Chlamys farreri)的繁殖季节，对人工诱导的三倍体栉孔扇贝的生殖腺进行了外观，组织学及电镜观察，结果表明，三本栉孔扇贝的生殖腺外观呈透明状，分不出雌雄，组织切片观察，三倍体雌性的生殖腺滤泡细胞数量少，为一大的空腔，沿滤泡壁排列着单层不连续的卵原细胞，呈不规则形态，另外有许多三倍体的生殖腺组织内含有大量的不定性细胞，可能是尚未分化的生殖细胞，分布在稀少的滤泡内及及其周围，未发现卵原细胞和精原细胞，无法根据滤泡的组织学牧场生区分雌雄，在检查的样品中未发现雄性个体，电镜下观察到了三倍体的精母细胞，细胞结构呈梭形，核开始收缩，细胞质内线粒体较发达，但与二倍体相比细胞及线粒体数量稀少，说明三倍体栉孔扇贝存在着雄性个体，生殖细胞增殖分化出精原细胞和少数初级精母细胞后即停止了发育。     

栉孔扇贝对单细胞藻类生长间接作用的研究

采用室内实验生态学方法研究了栉孔扇贝对藻类生长的间接促进作用，结果显示，栉孔扇贝对浮游植物有明显的促长作用，并且浮游植物的增长与栉孔扇贝的密度呈正相关，符合如下模式：Y＝40．85lnX 44.87(r^2=0.979,p=0.05,n=15)。栉孔扇贝对浮游植物的促长作用随藻类种类的不同具有较大的差别，主要取决于藻类对营养盐的需求量。     

氨基脲在栉孔扇贝(Chlamys farreri)体内生物富集与消除规律研究

采用超高效液相色谱-串联质谱法进行了氨基脲在栉孔扇贝闭壳肌、外套膜与鳃、消化盲囊不同组织中生物富集和消除规律的研究.在所研究的3个组织中,随海水中氨基脲浓度的增加,蓄积量逐渐增加.消化盲囊富集最高值最大,富集能力最强,而且表现出最快的平均消除速度.栉孔扇贝各组织对氨基脲的富集作用:消化盲囊＞外套膜和鳃＞闭壳肌;且各组织中氨基脲含量与曝污浓度呈正相关.氨基脲主要富集在栉孔扇贝的消化盲囊及外套膜和鳃中,闭壳肌中含量较少.栉孔扇贝各组织对氨基脲的消除作用:闭壳肌＞外套膜和鳃＞消化盲囊,但在高浓度条件下,闭壳肌也要经过一段时间的净化,氨基脲含量才能降低至0.50 μg/kg以下.采用DAS 2.0药物代谢动力学参数计算程序,处理曝污后栉孔扇贝体内的氨基脲含量-时间数据,计算有关药物动力学参数.结果发现各组织药物浓度-时间曲线下面积(AUC)相差较大,说明组织不同,对药物的蓄积能力有所差别.以20.0 μg/L浓度为例,经42 d消除试验后,闭壳肌(5.94 μg/kg)、外套膜与鳃(9.87 μg/kg)及消化盲囊(15.81 μg/kg)中均有氨基脲存在,且远高于规定值,各组织氨基脲消除率逐渐降低,依次为91.3％、90.0％、89.6％.在本试验条件下,氨基脲在1.0、5.0和20.0 μg/L浓度下连续曝污8d后,消除期分别定为15、50和70 d;并且水温高时可适当缩短消除期,水温低时可适当延长消除期.     

6-DMAP诱导栉孔扇贝三倍体的细胞学观察

用Bouin氏液固定、连续石蜡切片方法,对6-二甲基氨基嘌呤(简称6-DMAP)抑制第二极体诱导栉孔扇贝三倍体在受精和早期卵裂过程中的细胞学变化进行了详细观察。结果表明,在授精后25min,以60mg/L的6-DMAP处理栉孔扇贝受精卵15min,有效地破坏了纺锤体结构的形成,抑制了第2次减数分裂进程,致使受精卵内形成两种核相:一种是1个大的二倍性雌核和1个雄核;另一种是两个单倍性的雌核和1个雄核。不论形成几个雌原核,它们都能与雄原核相互靠近,在卵轴中央核膜逐渐发生融合,形成合子核,三倍体的合子核在卵内所占体积明显较二倍体的大。继而,合子核经过DNA复制,最后凝缩成染色体,发生有丝分裂,其过程与正常二倍体相同。     

栉孔扇贝精子膜蛋白的提取分离及初步鉴定

通过SDS-PAGE电泳,从提取液的倍数、提取时间、Triton X-100的浓度、SDS的有无等4个方面对提取条件进行优化,确定栉孔扇贝精子膜蛋白的最佳提取条件是:将精液150g离心去除精原细胞,0·1mol/L PBS缓冲液清洗两次,0·1mol/L Tris-HCl缓冲液清洗两次,3000g离心10min(4℃)得精子悬液;然后向精子悬液中加入3倍体积含1%Triton X-100和0.1%SDS的膜蛋白提取液中冰浴振摇1·5h;4℃,50000g离心15min,收集上清精子膜蛋白溶液。SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测出22种膜蛋白,分子量在23~156kDa之间,PAS染色检测出糖蛋白有13种,苏丹黑B染色检测出脂蛋白有12种,其中既为糖蛋白又为脂蛋白的有8种。此研究结果可为以后进一步分离纯化栉孔扇贝的精子膜蛋白,研究其在精子发生和受精过程中的功能及作用提供基础资料。     

栉孔扇贝三倍体与二倍体的排泄研究

从温度变化、个体大小和昼夜变化等３个角度研究栉孔扇贝（Ｓｃｈｌａｍｙｓ ｆａｒｒｅｉ）三倍体与二倍体的排泄率。结果表明,栉孔扇贝三倍体与二倍体的排泄率均随温度升高而增大;不同壳宽排泄率（Ｎ）与温度（ｔ）的关系为：Ｎ＝７．２０３３ｅ＾０．１２１５ｔ,Ｒ＾２＝０．８４４１（三倍体ｓ组,壳宽约３．２ｃｍ）;Ｎ＝８．８１５３ｅ＾０．１０３１ｔ,Ｒ＾２＝０．９８６３（三倍体ｂ组,壳宽约４．３ｃｍ）;Ｎ＝６．