饲用纤维素酶活力的测定方法

由于测定纤维素酶系的多种酶的酶活方法之间是相互联系的和复杂,使得确定酶活力测定的标准化方法非常困难。为给不同目的纤维素酶酶活力测定方法的选择提供借鉴,本文对测定纤维素酶酶活的一般方法,包括滤纸法、内切葡聚糖酶酶活法、纤细二糖酶酶活测定、外切葡聚糖酶酶活测定等方法进行了综述。     

植酸酶包埋后酶活和热稳定性的变化规律研究

为了了解植酸酶在包埋状态下酶活及酶性的变化,分别对酶的释放情况和热稳定性进行了研究。结果表明,随着时间的延长,包埋酶释放出的酶活逐渐上升(P<0.01),60min时达到最大值;而未包埋酶释放出的酶活逐渐下降(P<0.01),60min时达到最小值。包埋酶和未包埋酶在30、40、50、60、70、80、90和100℃的条件下,随着温度的升高,残留的植酸酶活力下降(P<0.01)。对于包埋酶,当温度升高到70℃时,植酸酶相对酶活仍保持在93%(P>0.05);当温度升高到80℃时,植酸酶的相对酶活才明显下降(P<0.01),不过在100℃时,仍能保持67%的酶活(P<0.01)。对于未包埋酶,当温度升高到60℃时,植酸酶相对酶活明显下降(P<0.01);当温度升高到100℃时,植酸酶相对酶活仅有23%(P<0.01)。通过在统一温度条件下,对包埋酶和未包埋酶处理组的相对酶活的对比发现,在50℃以下时,二者差异不显著,当温度超过60℃时,包埋酶的相对酶活极显著高于未包埋酶。     

饲用α-半乳糖苷酶酶活稳定性的研究

在酶制剂生产加工和储存过程中,酶活稳定性是酶应用过程中最常遇到的实际问题。本文研究不同载体、高温高湿、金属离子、保存初始pH值、保护剂浓度和存储时间对体外α-半乳糖苷酶稳定性的影响。试验结果表明:①无机载体碳酸钙、元明粉和滑石粉对α-半乳糖苷酶活性影响很大,收率均为0%;有机载体中玉米皮粉效果最好,收率高达90.83%;其次是淀粉,收率为61.11%;稻壳粉收率最低,仅为44.72%。②湿度为17%,温度小于85℃,酶活损失率小于10%,说明该酶有较强的耐温能力,温度为90℃,酶活损失率达到16.2%,随着温度上升,酶活损失率开始增加,不利于酶活的保存。③Cu2+对该酶有抑制作用3,7℃恒温水浴4 h后酶活存留率仅为74%,Mn2+、Zn2+、Ca2+、Na+、K+和Mg2+对α-半乳糖苷酶有几近相同的保护作用,酶活存留率均大于92%。④该酶最适保存pH值为5.3;pH值为4.4时,酶活损失率达到30.1%,不利于酶的保存;pH值为5.6时,酶活损失率为3.77%,pH值在4.7~5.6之间,酶活损失率小于10%,有利于酶的保存。总之,过酸和过碱都不利于酶的保存。⑤1%NaCl、1%甘露醇、5%和7%的山梨醇都有杂菌产生,不利于酶的保存3;%~5%的NaCl酶活损失小于10%1,%和5%~7%的甘油酶活损失率小于5%,都有利于酶活保存。     

植酸酶包埋后酶活和热稳定性变化的规律研究

为了了解植酸酶在包埋状态下酶活及酶性的变化,分别对酶的释放情况和热稳定性进行了研究.结果表明,随着时间的延长,包埋酶释放出的酶活逐渐上升(P＜0.01),60min时达到最大值;而未包埋酶释放出的酶活逐渐下降(P＜0.01),60 min时达到最小值.包埋酶和未包埋酶在30、40、50、60、70、80、90和100℃的条件下,随着温度的升高,残留的植酸酶活力下降(P＜0.01).对于包埋酶,当温度升高到70℃时,植酸酶相对酶活仍保持在93%(P＞0.05);当温度升高到80℃时,植酸酶的相对酶活才明显下降(P＜0.01),不过在100℃时,仍能保持67%的酶活(P＜0.01).对于未包埋酶,当温度升高到60℃时,植酸酶相对酶活明显下降(P＜0.01);当温度升高到100℃时,植酸酶相对酶活仅有23%(P＜0.01).通过在统一温度条件下,对包埋酶和未包埋酶处理组的相对酶活的对比发现,在50℃以下时,二者差异不显著,当温度超过60℃时,包埋酶的相对酶活极显著高于未包埋酶.     

不同底物及NaOH的添加对木聚糖酶酶活测定的影响

本试验采用DNS法对测定木聚糖酶酶活的底物性质进行研究。结果表明：以小麦木聚糖为底物时的木聚糖酶酶活最高,其次是燕麦木聚糖,再其次是山毛榉木聚糖,以桦木木聚糖为底物时的酶活最低;在底物配制过程中一般加入NaOH时测得的酶活低于不添加NaOH时的酶活,但以小麦木聚糖为底物时加入NaOH时测得的酶活高于不添加NaOH时的酶活。     

酶法去除脐橙白皮层的产酶培养基优化研究

本研究通过对酶法脱脐橙白皮层的微生物培养基成分进行优化,测定发酵液中果胶酯酶（PE）、果胶裂解酶（PL）、聚半乳糖醛酸酶（PG）活力,探讨碳源量、氮源种类和含量对3种果胶酶活性的影响。单因素和响应面优化试验结果表明：在氮源硝酸铵:硫酸铵=3.02:1、氮源添加量为8.52 g/L、碳源添加量为9.26 g/L时,PG酶活为497.26 U/mL,PL酶活为461.05 U/mL,PE酶活为40.42 U/mL,提升PG酶活141.83%,PL酶活46.85%,PE酶活58.14%,去除白皮层效果提升显著,为发展环境友好型橙汁胞加工工艺提供参考。     

温度对鲤鱼复合酶制剂中3种酶活性的影响

试验研究了温度对鲤鱼复合酶制剂中蛋白酶、淀粉酶和β-葡聚糖酶3种酶活性的影响。结果表明,蛋白酶、淀粉酶和β-葡聚糖酶的最适pH分别为3.0、6.0和5.0;粗酶液在4℃时放置72h,3种酶出现活性峰值;在4、25和40℃时保存10、20和30d,复合酶制剂中蛋白酶和淀粉酶的活性随温度的升高和保存时间的延长而降低,酶活损失率分别为1.91%~36.91%和5.17%~19.57%,酶活受温度的影响显著,受时间的影响不显著。相反,β-葡聚糖酶的活性随温度的升高和保存时间的延长而升高,酶活损失率为10.19%~48.46%,酶活受温度及时间的影响显著。在30d内,复合酶制剂中各种酶对低温的稳定性由强至弱依次为淀粉酶>蛋白酶>β-葡聚糖酶;在60、80、100和120℃时处理5、10和15min,蛋白酶和淀粉酶的最大活性分别出现在100和80℃,最大酶活分别为原酶活的78.95%~82.99%和85.72%~91.89%;β-葡聚糖酶的活性随温度的升高和处理时间的延长而降低,最大酶活分别为原酶活的82.45%~90.73%,酶活受温度的影响显著,受时间的影响不显著。在15min内,复合酶制剂中各种酶耐干热高温的稳定性由强至弱依次为淀粉酶>β-葡聚糖酶>蛋白酶。     

饲用糖化酶分析方法的研究

饲用酶的添加量 ,是以酶活为基本指标来反映的 ,而目前对于饲料中外加酶的分析方法 ,国内外报道甚少。到目前为止 ,ＦＤＡ ,ＡＡＦＣＯ等机构十分重视对饲用酶的酶活分析工作 ,但尚未提出各种饲用酶的标准分析程序。虽然我国有关部门对现有几种工业生产酶制剂 ,如蛋白酶、糖化酶等的分析方法已规范化 ,但鉴于配合饲料组成的复杂性 ,采用酶制剂生产行业的酶活分析程序 ,来分析饲料中的外加酶制剂酶活 ,其结果是忽视了饲料组分与饲料加工过程中诸因素对酶活的影响 ,因而不能客观地反映饲料中的实际酶活。要确切了解配合饲料中外加酶制剂的酶活…     

骆驼瘤胃内优势纤维素降解菌酶活种类及活力测定方法比较研究

利用传统纤维素酶活力测定方法———3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)和根据试验具体情况自行构建的纤维素酶活力测定方法,对健康骆驼瘤胃内自行分离的7株优势纤维素降解菌的纤维素酶酶活种类及活力进行了测定。测定结果为:DNS法中不同菌株的CX酶酶活大小为1#2#17#10#15#8#20#;C1酶酶活大小为1#2#17#20#10#15#8#;β-葡萄糖苷酶酶活大小为1#2#17#10#20#8#15#;总酶活大小为1#2#17#8#10#15#20#。自行构建方法中CX酶酶活大小为(1#、2#、15#)(10#、17#)(8#、20#);C1酶酶活大小为(1#、2#、15#、17#)(8#、10#)20#;β-葡萄糖苷酶酶活大小为(1#、2#、8#、10#、15#、17#)20#;总酶活大小为2#1#15#17#10#8#20#。根据测定结果可以看出,2种方法所测定的酶活大小趋势较为接近,但在试验过程中DNS法出现诸多问题,弊端较多,而自行构建的方法能够克服DNS法的缺点,使其结果更为简便直观,如果结合DNS法试验数据,则可以使试验结果更加精确。     

饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响分析

为找出混合过程中引起固态木聚糖酶酶活测定结果差异的原因,试验研究了主要饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响。结果表明:酶稀释溶液中加入固态植物原料、液态原料均对木聚糖酶测定值无显著影响,混入预混料会引起酶活测定值的明显下降;液态原料与固态木聚糖酶混合会影响到固态酶的稀释溶解,从而引起酶活测定值的显著下降。     

底物类型及含水量对瘤胃真菌固体发酵产酶活性的影响

试验采用二因素试验设计,研究不同底物类型及含水量对瘤胃真菌固态发酵产纤维素酶活的影响。发酵底物粗料类型分别为菌糠、花生蔓和玉米秸,含水量分别为30%、40%、50%和60%。试验进行10 d,每2 d取发酵样品测试,监测其中的羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶的酶活。试验结果表明:在菌糠、花生蔓及玉米秸3种粗料底物中,花生蔓效果最好,可显著提高羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶和β-葡萄糖苷酶酶活(P0.05)。含水量对纤维素酶活影响明显,含水量为40%时对羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶酶活均有显著影响(P0.05)。不同底物类型与含水量的互作对4种酶的酶活影响显著(P0.05)。滤纸酶发酵8 d达到峰值,羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶和β-葡萄糖苷酶均为发酵4~6 d时酶活最高。综合各试验因素,试验以花生蔓为底物粗料,含水量40%,培养发酵4~6 d,纤维素酶活最佳。     

木聚糖酶酶活测定方法的研究

本试验研究了影响木聚糖酶测定的因素.结果表明不同底物、不同底物浓度、酶的稀释度和提取时间都会影响到酶活的测定结果,但蒸馏水及缓冲液作为提取液对酶活无显著影响.测定的吸光度在0.3左右(即0.25～0.5)时酶活的变异较小.     

马铃薯渣作培养代料的两种侧耳属食用菌菌糠中两种饲用酶活性的检测研究

本研究以培养代料含马铃薯渣的凤尾菇菌糠、小白侧耳菌糠为研究对象,检测其中植酸酶及β-葡聚糖酶的酶活。凤尾菇菌糠植酸酶酶活在pH2.5下为0.0822U/g,在pH5.2下为0.0786U/g。小白侧耳菌糠植酸酶酶活在pH2.5下为0.1052U/g,在pH5.2下为0.1027U/g。凤尾菇菌糠β-葡聚糖酶酶活0.0260U/g,侧耳β-葡聚糖酶酶活为0.0354U/g。结果表明,加入马铃薯渣做培养代料的凤尾菇、小白侧耳菌糠具有一定的饲用酶活性,用其作禽畜饲料加工时,可适量减少饲用酶的加入量,以节约成本。     

芦丁对奶牛瘤胃内固相和液相降解纤维素相关酶活性的影响

本试验旨在研究芦丁对奶牛瘤胃纤维素酶活的影响。选择体重600 kg左右、体况良好、安装有永久性瘤胃瘘管的中国荷斯坦奶牛5头,采集瘤胃内容物制取固相和液相酶液,分别添加芦丁0(对照组)、0.02、0.04、0.06 mg/mL,采用DNS(3,5-二硝基水杨酸)还原法测定降解纤维素的相关酶活。结果表明:添加芦丁(0.02、0.04、0.06 mg/mL)的试验组与对照组相比较,奶牛瘤胃内容物固相和液相滤纸酶、β-葡萄糖苷酶、羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶酶活均有显著提高(P<0.05),而果胶酶与木聚糖酶同对照组相比差异不显著(P>0.05),各组固相酶活都明显高于液相酶活。     

几种市售耐高温植酸酶制粒后酶活保留率的研究

六种市售商品耐高温植酸酶，各取5个不同生产批次的重复样，添加到肉鸡中大期饲料，生产制粒后进行酶活保留率的测定，结果显示各样品内不同重复之间的酶活保留率差异均不显著，样品6的制粒后酶活保留率最高、酶活损失最少且变异系数低，优于其他样品。     

不同条件下木聚糖酶稳定性的研究

本试验研究了木聚糖酶在不同温度、pH值和保存条件下酶活变化情况.结果表明:木聚糖酶整体耐高温性能较好,85℃下相对酶活仍然能保持在70%以上,同时随着处理时间的延长在不同温度下酶活损失也呈增加趋势;偏酸性条件木聚糖酶能保持较高的酶活,碱性条件不利于木聚糖酶的存活;在常温和37℃恒温保存条件下木聚糖酶都具有良好的稳定性.     

蔗渣纤维素预处理及纤维素酶混合发酵研究

试验旨在研究蔗渣纤维素预处理方法,优化纤维素酶系组成,提高产酶量。试验使用甘蔗渣为原料,经过微波、磷酸和蒸汽爆破预处理蔗渣纤维素。结果显示：厚垣镰孢霉HML278产纤维素酶及半纤维素酶酶活均有提高,滤纸酶酶活比未处理材料提高了1.02倍,处理后酶解葡萄糖比未处理蔗渣提高100%。米曲霉HML366可以产高转苷活性的β-葡萄糖苷酶,合成龙胆二糖,龙胆二糖可以诱导厚垣镰孢霉HML278产纤维素酶。厚垣镰孢霉HML278和米曲霉HML366菌种兼容性较好,混合发酵优化纤维素酶系组成,比厚垣镰孢霉HML278单独发酵滤纸酶活酶活提高了83.62%,β-葡萄糖苷酶比米曲霉HML366单一培养酶活提高93.09%。研究表明,米曲霉HML366和厚垣镰孢霉HML278混合培养产酶效果优于单一菌种培养产酶。     

不同运输条件下液态木聚糖酶的稳定牲研究

实验室中模拟温度(-20～55℃)、时长(24～72 h)的运输条件,以4℃冷藏酶液为对照,通过比较处理前后的酶活变化来评价运输对液态木聚糖酶稳定性的影响,结果表明:-20～15℃环境下,时长72 h内的运输对液态木聚糖酶的酶活测定值无明显影响,也不会造成明显的酶活损失;25～55℃环境下.时长24～72 h的运输对液态木聚糖酶的稳定性有明显影响,温度升高(或时长增加)除导致酶活损失加快外,还会引起酶活测定值与4℃存储后测定值的明显差异.     

白酒酒糟制备多酶益生菌饲料发酵工艺研究

选择产甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌L-1、产植酸酶枯草芽孢杆菌L-2、产木聚糖酶YB-5、乳酸片球菌Rp作为制备多酶益生菌饲料的生产菌种。通过单因素和正交试验最终确定最佳底物干基组分为36%白酒酒糟、26%玉米粉、28%麸皮、8%豆粕,料水比10.8,装填量20 g/250 ml。结果表明:多酶益生菌饲料中益生菌活菌数为(1.97±0.09)×10~(11)cfu/g,甘露聚糖酶酶活(11.62±0.26)U/g、木聚糖酶酶活(15.30±0.36)U/g、植酸酶酶活(16.37±0.16)U/g、蛋白酶酶活(15.27±0.16)U/g以及淀粉酶酶活(19.37±0.33)U/g。     

理性认识饲用酶的酶活

正酶制剂是一种催化剂,也是一种活性蛋白质。饲料酶制剂发展20多年,逐渐广泛应用在各种饲料中。然而,在实际的应用中存在一些对酶制剂的误解,从而导致酶制剂应用效果的发挥产生偏差,如高酶活不一定有高的酶解效果。1饲用酶作用的环境影响酶活性的发挥酶活是比较酶水解能力大小的一个重要指标,大家通常认为高酶活意味着更好的水解能力,从而偏向于选择高酶活的产品。酶活是酶活力的度量单位。1个酶活力单位是指在特定条件(如37℃,