香菇135菌株SCAR标记的验证

香菇[Lentinula edodes(Berk.)Pegler]是世界上最主要的食用菌之一,目前的全球产量仅次于双孢蘑菇。我国是香菇栽培的起源国,目前香菇产量居世界第一。菌种是香菇生产的前提,它直接影响着香菇的产量和品质。由于我国食用菌菌株尚未建立完善的登记制度,存在菌种“多、杂、乱、散     

47个香菇主栽菌株的SCAR标记分子鉴别

利用前期研究开发的10个SCAR分子标记对47个香菇主栽菌株的基因组DNA进行扩增分析.基于SCAR标记在检测菌株中的存在与缺失差异,7个香菇菌株被首先鉴别出来,其余40个菌株被分成11个小组,其中一些形态特征极为相近的菌株,如L241与L241-4、闽丰1号与L12、Cr02与7402等被相互辨别.     

香菇交配型基因的遗传研究

本文建立了一种香菇交配型基因测定的新方法－－原生质单核体亲本交配型极性标记法，用这一方法不仅成功地分离和鉴定出不同香菇菌株的上标准交配型基因，还有效地区分出亲本型和重组型两种交配型基因类型，这一技术为深入开展异宗结合食用菌的遗传研究提供了一个重要的工具。     

以交配型基因为主要标记的香菇菌种鉴定新方法

在香菇交配型基因研究的基础上,提出了以交配型基因为主要标记的香菇菌种鉴定新方法。这一方法以香菇性亲合性理论为基础,以交配型基因的等位性和多型性为依据,以标准菌株原生质体单核体的两种亲本交配型为遗传标记,以待测菌株的原生质体单核体为材料。该方法中使用的原生质体方法和交配型测定方法都是相当成熟的技术,操作方便可靠。     

苹果柱型基因Co的一个AFLP 标记的SCAR转换

 将苹果柱型基因的一个AFLP 标记成功地转换成了简单实用的SCAR 标记。首先对AFLP 标记片段进行序列测定, 然后根据序列特点设计了两对特异引物CoA1/ CoA2 和CoA1/ CoA3 , 每条引物长20 bp。PCR 结果表明CoA1/ CoA2 可以扩增出216 bp 和148 bp 两条带, 其中216 bp 的为柱型性状的特征带; CoA1/CoA3 可以扩增出273 bp 和205 bp 的两条带, 其中273 bp 的为柱型性状的特征带。两对引物在杂交后代中扩增出的特征带与柱型性状的分离重组率都很低(CoA1/ CoA2 为6. 3 % ±2. 5 %; CoA1/ CoA3 为7. 3 % ±2. 6 %) , 所以它们都可以作为该SCAR 标记的特异引物所用。     

大葱细胞质雄性不育基因的SCAR 标记开发

 以大葱（Allium fistulosum L.）雄性不育系和保持系为试材,开发了一个能够鉴别细胞质雄性不育类型的SCAR 标记。此标记在大葱雄性不育系（S 型细胞质）中扩增出１条607 bp 片段,而在保持系（N 型细胞质）中没有扩增出此片段,将此片段命名为S607。对5 组不同遗传背景的不育系和相应保持系,以及4 份杂交组合进行验证,SCAR 标记S607 鉴定结果与实际细胞质类型完全相符。     

罗汉果性别相关的SCAR标记筛选

以罗汉果雌雄单株各30份为试材,采用随机引物筛选法,筛选与罗汉果性别相关的RAPD标记,并根据特异片段的测序结果,将RAPD标记转化为特异性和稳定性更好的SCAR标记,以期为罗汉果的性别早期鉴定和分子辅助育种研究提供参考依据。结果表明:在330条随机引物中获得了分别与罗汉果雌性和雄性相关的RAPD引物S2124和S343。根据特异序列测序结果,对雌性特异带S2124-1K和雄性特异带S343-1.4K各自设计并合成了2对SCAR引物,经验证,SCAR引物SC2124-1K-14在62℃和SC2124-1K-8在56℃均可扩增出1 019bp的雌性特异带,SC343-1.4K-12在64℃和SC343-1.4K-4在56℃均可扩增出1 373bp的雄性特异带。这些特异的SCAR标记具有较好的应用价值,可为罗汉果的性别早期鉴定提供分子依据。     

中国主要香菇栽培菌种交配型基因的遗传分析

从我国使用的19个主要香菇栽培菌种中制备了25种原生质体单核体,以此为材料,以交配型基因为标记,在交配反应和RAPD两个水平上对这19个菌株进行了较为详细的遗传相似性分析。25种原生质体单核体两两配以地共300个组合,其中不亲和性反应为110对,占配对总数的36.7％。根据交配反应结果,25个单核体可分为三大类群、7个交配型组。这些结果从交配型角度证明,这19个菌株具有十分狭窄的以交配型基因为标记的遗传背景。RAPD反应和聚类分析中,这三大类群、7个交配型组基本上都能聚为一类,从而在分子水平上验证了交配型折结果,也为交配型基因在菌种鉴定中的作用 提供了依据。     

桃花粉可育基因连锁的RAPD 标记与SCAR标记的转化

 桃品种以重阳红(花粉不育) ×大久保(花粉可育) 的52株F₁代群体为试材, 应用RAPD技术, 结合集群分组分析法(Bulked Segregate Analysis, BSA) 构建花粉可育/不育基因池, 利用180个随机引物, 筛选在花粉可育基因池中稳定扩增的一个RAPD标记OPW03-900。经过重复性验证和群体单株验证, 该标记仅在花粉可育个体(重组型除去) 中出现, 与桃花粉可育/不育位点的连锁距离为5.80cM。将该特异性片段回收、克隆、测序, 并设计一对特异SCAR引物, 再对F1代个体进行PCR扩增, 发现该特异带的位点及重组型个体的数目与RAPD扩增结果一致, 片段大小为906 bp, 命名为SCW03-906,表明RAPD标记已成功转化为与桃花粉可育基因连锁的SCAR标记。该序列已被GenBank收录, 登录号为DQ659676。     

Inheritance Patterns of a Strain-specific Sequence Characterized Amplified Region (SCAR) Marker for Lentinula edodes Strain 135

PCR amplification employing a SCAR (Sequence Characterized Amplified Region) primer pair, 135F/R,(amplifying a band of 601 bp) for identifying '135' strains of Lentinula dodes was used to establish the distribution of the specific SCAR marker among 58 protoplast monokaryons and 97 spore monokaryons isolated from a L.edodes 135 strain.Protoplast monok.aryons segregated into either A1B1 or A2B2 mating type,and the SCAR marker was detected only in the latter.The marker was also detected in four delineated m...     

Optimization of a Sequence-Related Amplified Polymorphism (SRAP) Amplification System for Lentinula edodes

Lentinula edodesis a large,edible wood-decaying fungus that is attractive to consumersdue to its delicious taste and medicinalproperties.One of the major cultivatedmushrooms,it is ranked second(marginallybehindAgaricus bisporus)in terms of worldproduction.L.edodeswas originally cultivatedinChina,whichis nowthelargest producer of themushroom and rich in germplas m resources.These resources form the basis ofL.edodesbreeding programs and product exploitation.However,research on the genetic rela…     

Optimization of a Sequence-Related Amplified Polymorphism (SRAP) Reaction System for Lentinula edodes

Although China is now the largestproducer and exporter ofLentinula edodes,there is still considerable confusion in theChineseL.edodesindustry with regard to thedesignation of cultivatedstrains.Asingle strainis often named differently in differentcultivation areas,and different strains areoccasionally allotted the same strain desig-nation.However,various molecular markershave been developed in recent years and couldbe used to remove much of this confusion.Todate,the most widely used molecular…     

香菇SRAP扩增体系的建立与优化

香菇(Lentinula edodes)作为1种可食用的大型木腐担子菌,因其味美、药用价值高而倍受国内外消费者的喜爱,产量仅次于双孢蘑菇。中国是香菇人工栽培的发源地,产量居世界第一位,有着丰富的香菇种质资源。这些种质资源是进一步培育优良菌种、深入开发利用香菇产品的基础。但有关这     

香菇SRAP反应体系的优化

我国是香菇(Lentinula edodes)生产和出口大国,但生产上菌种混乱,同种异名、同名异种现象普遍存在。分子标记技术可用于菌种鉴别,在清理这种现象中发挥重要作用。目前常用的分子标记技术有RFLP(Restriction FragmentLength Polymorphism,限制性片段长度多态性)、RAPD(Randomly     

香菇EST-SSR标记的开发及应用

从NCBI中下载了12 184条香菇(Lentinula edodes)表达序列标签(expressed sequence tag,EST)序列,处理后得到全长3 681 177 bp的4 684个Unigene.在其中共发掘出142个简单重复序列(simple sequence repeat, SSR),分布于120条EST中,分布频率为2.99% (平均分布距离:25.924 kb).其中,单、二、三核苷酸重复是主要的重复类型,A/T,AG/CT,ACG/CTG是单、二、三核苷酸的主要重复基序,分别占所有EST-SSR的23.23%、21.83%和10.56%.利用引物设计软件PrimerPremier5.0设计了40对引物,并利用6%变性聚丙烯酰胺凝胶在18个香菇品种中进行检测.其中,22对引物为多态性引物,多态率为55%.应用NTSYS软件的聚类方法分析表明,18份材料遗传相似系数范围为0.375～0.984,与前人研究结果相符.     

香菇原生质体工程菌株的构建研究——I.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇(Lentinula edodes)菌丝细胞壁组成.并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养.研究发现:酶解过程中,菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来.合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证;原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程,再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起-哑铃状-分枝状等不同形态类型的再生阶段;再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合,栽培后未能结实,初步判断为单核菌株.     

香菇L808菌株自交子代在变温培养中菌丝生长速度的分化

以香菇(Lentinula edodes)L808菌株为亲本,用多孢自交方法取得164个自交子代菌株,连同亲本分别于填充木屑培养料的大试管中进行6个梯度的变温培养[25、30、32、34、25(恢复)、25℃(生长),每个温度培养5d],考察变温处理下菌丝生长速度的变化和分化。结果表明,菌丝生长速度明显受到变温的影响,30~34℃的高温对所有菌株造成了不同程度的刺激,返回25℃后菌株的恢复和恢复后的生长等均呈现明显分化,供试群体中没有表现完全相同的个体,反应了菌丝生长速度这一性状背后复杂的基因调控体系;而且变温培养的菌丝生长速度应该和恒温培养的菌丝生长速度一样成为菌株特性评价的重要指标。