鸡缩胆囊素卵黄抗体的制备与应用研究

[目的]制备缩胆囊素卵黄抗体,研究其对肉鸡生长的促进作用。[方法]采用缩胆囊素(CCK)融合蛋白作为免疫原制备油乳剂疫苗免疫产蛋鸡。采用ELISA检测蛋鸡血清、蛋黄液、蛋黄粉中CCK抗体效价。[结果]20日龄胡须鸡饲养试验结果表明饲料中分别添加200和500 g/t含CCK抗体卵黄粉的胡须鸡试验全期体增重较阴性蛋黄粉组分别提高4.14%和5.52%,而采食量则分别提高2.14%和2.75%,但差异均不显著(P0.05),且对料重比无显著影响。ELISA结果表明CCK融合蛋白能在鸡体内引起免疫反应,加强免疫后蛋鸡的血清和蛋黄中的CCK抗体均可维持在较高水平。[结论]缩胆囊素卵黄抗体对胡须鸡有一定的促生长作用。     

重组缩胆囊素融合蛋白制备及其免疫原性研究

成功扩增了猪缩胆囊素(CCK)基因C末端片段,并在大肠杆菌中成功表达,SDS-PAGE检测到相对分子质量约为45 000的融合蛋白,最高表达量占菌体总蛋白的40.21%,蛋白可溶性分析表明,融合蛋白主要是以可溶性形式表达. Western-blotting证实,可溶表达的融合蛋白能与CCK-8阳性血清具有良好的免疫反应性. 以纯化后的蛋白为免疫原制备油乳剂疫苗免疫蛋鸡,结果表明,CCK蛋白可在鸡体内引起免疫反应,加强免疫后蛋鸡血清和卵黄中CCK抗体可维持在较高水平. 为了研究含有CCK抗体的蛋黄粉对鸡生长性能的影响,将其作为添加剂饲喂20日龄肉鸡,试验结果表明,饲喂添加100 和300 g/t含CCK抗体蛋黄粉的肉鸡与阴性对照组相比,试验全期体增质量分别提高2.34%、3.80%,采食量分别提高0.91%、2.65%,且对饲料体增质量比无显著影响.     

缩胆囊素／脲酶双效卵黄抗体在生猪生产中的应用

缩胆囊素主动免疫家禽,产生卵黄抗体,而卵黄抗体不仅能够有效治疗猪的肠道疾病,同时还能够避免饲料中添加抗生素或某些化学合成药物所引起的药物残留和耐药性问题。它具有绿色、高效、环保特点,作为替代抗生素的新型饲料添加剂正吸引着人们的眼球,已成为可以利用的热点产品。缩胆囊素／脲酶双效卵黄抗体具有以上优势的同时,还可以改善环境。在这一期主题策划里,我们推荐《缩胆囊素／脲酶双效卵黄抗体在生猪生产中的应用》与读者分享。     

缩胆囊素主动免疫对猪生产性能的影响

[目的]利用分子生物学技术扩增猪CCK基因活性片段,检验主动免疫CCK融合蛋白对肉猪生长是否有促进作用。[方法]采用RT-PCR技术成功扩增猪缩胆囊素基因C-端活性片段,并在大肠杆菌中进行表达。[结果]主动免疫0.5和1.5mg/mlCCK疫苗处理组肉猪,试验期肉猪平均日增重较空白对照组分别提高5.81%和7.36%（P〈0.05）,采食量分别提高4.04%和2.53%。利用SDS-PAGE可获得相对分子质量45000的融合蛋白。融合蛋白主要以可溶形式表达。Wesrtern Blot证实融合蛋白与CCK-8阳性血清具有良好的免疫反应性。[结论]主动免疫CCK对肉猪生长具有一定促进作用。     

鸡法氏囊和腺病毒精制卵黄抗体制备与应用

利用当地分离的禽法氏囊和腺病毒流行株制备二联油乳剂灭活疫苗后制备高免精制卵黄抗体,通过多次加强免疫,以PEG6000沉淀提取和微滤孔滤膜过滤获得精制卵黄抗体,并对卵黄抗体的质量进行检验和临床试验,结果表明,卵黄抗体的预防和治愈效果较好。     

抗重组猪三十九肽胆囊收缩素卵黄抗体的制备

制备重组猪三十九肽胆囊收缩素(GST-CCK39),以其为抗原免疫28周龄的蛋鸡,用水稀释脱脂处理,聚乙二醇(PEG)一步法制备高效价卵黄抗体,并用免疫琼脂扩散试验、ELISA、Dot-ELISA检测其效价及特异性。结果表明,免疫琼脂扩散测得特异性抗体效价达1∶16以上,ELISA效价达1∶12 800以上;Dot-ELISA显示所获得卵黄抗体具有较强的特异性;高效价,特异性的卵黄抗体可维持50 d以上。表明用重组蛋白GST-CCK39免疫蛋鸡后能获得效价高、特异性强的卵黄抗体。     

抑制素质粒(pCISI)DNA卵黄抗体的制备

抑制素是一种性腺糖蛋白,是由α、β亚基组成的二聚体,在卵巢局部起着旁分泌、自分泌的调节作用,调节卵泡的发育和类固醇激素的发生,主要作用是抑制卵泡刺激素(FSH)[1-4]在垂体的分泌与合成.     

复合卵黄抗体在早期断奶仔猪中的应用研究

选用21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪160头,按窝别、性别和体重分为2组,即对照组为基础日粮,试验组为基础日粮+0.1%复合卵黄抗体粉剂。表明:21～35日龄阶段,试验组比对照组平均日增重高15g(P<0.05),采食量高2.4g·d-1(差异不显著),料重比下降,腹泻率下降9.9%(P<0.05)。35～70日龄阶段,试验组比对照组平均日增重高6.5g(差异不显著),采食量下降15g·d-1,料重比低,腹泻率下降1.5%(P<0.01)。     

卵黄抗体及其临床应用研究

卵黄抗体及其临床应用研究山东农业大学孙希琪卵黄抗体对于鸟类动物保护后代、繁衍种群起着极为重要的作用。卵黄抗体（ＩｇＹ）的生产量比血液抗体（ＩｇＧ）的生产量高得多。据报道，利用一只产卵母鸡１年内可生产纯ＩｇＹ４０ｇ左右，这个数量相当于通过３０只家兔１年...     

卵黄抗体测定与鸡新城疯免疫接种的应用研究

利用血凝（ＨＡ）和血凝抑制（ＨＩ）试验，来自同一机体和同一鸡群非同一机体的２７９６只罗曼蛋鸡血样及蛋样进行了鸡新城疫血清和卵黄抗体水平的检测。结果表明：血清和卵黄无论来自同一机体，还是来自同一鸡群，所测抗体效价基本一致，对６１０枚入孵种蛋不同时间卵黄抗体和该批种蛋孵出的６１０只雏鸡不同日龄血清抗体水平进行了检测，发现种蛋卵黄抗体效价与雏鸡血清抗体效价有一定的相关性，用卵黄监测种蛋折抗体水平可以得知     

抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备

[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。     

鸡抗鸭副黏病毒病高免卵黄抗体的研制

为了寻找有效的防治鸭副黏病毒病的途径。分离出1株鸭副黏病毒,经鉴定并命名为鸭PMV DY-1株,并以此毒株作为免疫毒株,应用非鸡新城疫免疫健康鸡群作为免疫蛋源,制备鸡抗鸭副黏病毒病高免卵黄抗体,经实验室检测和临床试验应用。结果表明,研究获得的高免卵黄抗体应用效果良好,安全、高效,是目前紧急预防治疗鸭副黏病毒病较有效、较经济的方法之一。     

抗IBD高免卵黄抗体的研制

应用ＩＢＤ二价弱毒细胞苗和二价油乳剂灭活苗对鸡进行加强免疫，待高免鸡血清ＩＢＤＡＧＰ抗体效价达１：２５６以上时，收集高免蛋，用于制备抗ＩＢＤ高免卵黄抗体，制出的高免卵黄抗体ＩＢＤＡＧＰ效价为１：６４～１：１２８，用这种高免卵黄抗体对万余只ＩＢＤ病鸡进行治疗，剂量为每只鸡肌注１ｍｌ，总有效率在９０％以上。由此可见，ＩＢＤ高免卵黄抗体具有特异性好、治愈率高、取材方便、制造简便和使用方便等优点，适用于基层推广使用。     

中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒试验

[目的]将不同配比的中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒的能力进行比较,以确定中草药与卵黄抗体的最佳配比。[方法]试验样品为不同配比的中草药"禽喘康复散"与卵黄抗体复合气雾剂,配比分别为1:1.0、1:0.8、1:0.5、1:0.2,分别记为样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。采用病毒致细胞病变抑制试验和血凝抑制试验,测定样品抑制病毒的能力。[结果]结果表明,样品I对腺病毒7型(AdV7)的最小抑制浓度为1/640g/ml,作用弱于样品II,而对其他病毒的作用都最强。样品IV除对腺病毒3型(AdV3)的最小抑制浓度为1/640g/ml,对其余病毒的抑制作用在4种样品中最弱。体外抑制病毒试验表明中草药与卵黄抗体配比为1:1.0对各病毒的抑制效果最好。[结论]选用1:1.0配比的复合气雾剂最能有效防治呼吸道疾病。     

不同蛋白水平日粮对狼山鸡卵黄中激素沉积及子代生长的影响

选取狼山鸡种母鸡160羽,随机分成三个组,分别饲喂粗蛋白水平为10%(低)、15%(对照)和20%(高)的日粮,21d后收集种蛋。每组随机选择10枚种蛋用于放免测定卵黄中母源性甲状腺激素和胰高血糖素,其余孵化后在相同条件饲养至28d,并测定生长性能.。分别与1日龄和28日龄每组各选10羽雏鸡进行屠宰测定。结果:(1)试验前后母鸡体重各组间均没有变化,低蛋白组产蛋率和蛋重显著下降(p<0.05),高蛋白组蛋重显著高于对照组;(2)三组种蛋的卵黄中T3、胰高血糖素水平均没有显著性差异,而高蛋白组卵黄中T4水平显著高于对照组和低蛋白组(p<0.05),低蛋白组1d后代血清中T3水平显著高于对照组,而高蛋白组血清T4水平显著高于对照组(p<0.05);(3)出雏重与蛋重呈正相关(R2=0.9275,p<0.01),出雏后高、低蛋白组子代均表现出较高的生长速度,28d低蛋白组子代鸡体重和相对胸肌重显著高于对照组(p<0.05),高蛋白组体重与对照组相比有增加趋势,但差异不显著(p=0.08)。结论:母鸡饲喂不同蛋白水平日粮可以改变卵黄中母源性激素的沉积并能显著影响子代的生长。     

琼扩试验检测鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的研究

采用琼脂扩散(AGP)试验检测免疫鸡血清和3种不同稀释液(氯仿、8％柠檬酸钠、16％氯化钠)处理的卵黄样品，结果表明，免疫后的卵黄样品与血清样品的A(；P抗体效价一致，为1：16。氯仿样品的检出率最高，为85％，血清样品的检出率为67％，8％柠檬酸钠和16％氯化钠样品的检出率分别为47％和25％。同时，对AGP检测结果分别在点样后24h、48h和72h进行观察，结果表明，AGP结果的最佳观察时间在24～48h。检测氯仿处理卵黄抗体的AGP可以代替检测血清抗体的AGP，以避免采血造成应激，具有重要的经济意义，     

磺胺嘧啶多克隆抗体的制备

为制备磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)多克隆抗体(pAb),用重氮化方法将SD偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SD和包被抗原OVA-SD。用紫外扫描、SDS-PAGE凝胶电泳试验检测,结果表明偶联成功。用BSA-SD免疫新西兰大白兔,间接ELISA测定多克隆抗体效价。阻断ELISA结果显示:SD单克隆抗体(pAb)的IC50达19.19ng/mL,和其他磺胺类药物交叉反应小于等于2.7%。结果表明,获得了高效价和特异的pAb。     

固始鸡与丝毛乌骨鸡孵化期间蛋黄胆固醇含量分析

对单冠乌骨鸡、复冠乌骨鸡、快羽固始鸡、慢羽固始鸡4个品种(系)种蛋孵化期间蛋黄内胆固醇含量的测定分析表明:鸡不同品种(或品系)蛋黄干样胆固醇含量孵化期间呈“升-降-升-降”的变动趋势;0~6胚龄卵黄大量富集胆固醇,富集量与入孵前蛋黄胆固醇含量呈较强负相关,6~9胚龄和15~21胚龄则被大量利用。另外,蛋黄干样胆固醇入孵时含量与出雏时含量呈强正相关。     

抗沙丁胺醇单克隆抗体制备与鉴定

[目的]制备特异性抗沙丁胺醇单克隆抗体,为其免疫学检测方法的建立奠定基础。[方法]用SAL-BSA抗原免疫BALB/c小鼠;使用细胞融合技术建立抗SAL的单克隆抗体（SAL mAb）杂交瘤细胞株;体内诱生腹水法制备SAL mAb,并鉴定其免疫学特性。[结果]筛选出2D9和1C4两株杂交瘤细胞,其细胞培养上清效价达1∶104,腹水效价达1∶106;免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1;抗体对SAL的半数抑制浓度（IC50）为1.14 ng/ml;与沙丁胺醇和盐酸克伦特罗的交叉反应率（CR）分别为100.00%和26.09%,与其他化合物无交叉反应。[结论]获得了高效价、敏感且异性的抗SAL抗体,为沙丁胺醇残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

丙烯酰胺单克隆抗体的制备

丙烯酰胺分子量小,结构简单,因此制备其特异性抗体比较困难.试验将丙烯酰胺与间巯基苯甲酸反应合成丙烯酰胺半抗原,半抗原偶联KLH载体蛋白合成抗原,通过免疫制备单克隆抗体,并对其进行了抗血清的效价、半抑制率、交叉反应测定.结果表明:免疫原为AM-KLH,包被原为AM-OVA测定的抗血清效价最高为1:32000倍,其半抑制率(IC50)为120.323 ng·mL-1,该抗体与丙烯酰胺近似物的交叉反应率均<1.48.探索了丙烯酰胺单克隆抗体的制备方法,为丙烯酰胺快速检测方法的建立提供了新的思路.