90份广西桑树种质资源的染色体倍性鉴定

鉴于流式细胞术对植物染色体倍性鉴定的高效性,本次试验利用流式细胞仪对广西壮族自治区蚕业技术推广总站桑树种质资源圃的90份桑树种质资源染色体倍性进行了鉴定,以期获得准确的染色体倍性,为桑树育种提供数据。流式细胞仪检测的制样方法为刀片快速切碎法,利用MgSO_4解离液进行解离,经过2次离心漂洗,获得单细胞核悬浮液,经染色后过滤上机检测,共收集10 000个细胞核,利用Flowjo7.6软件进行分析,可以获得染色体倍性数据和混倍体所含不同染色体倍性细胞的比值。本次试验共鉴定出桑树二倍体32份、三倍体18份、四倍体30份、混倍体10份,并对多倍体和混倍体育种方面进行了简要分析,为桑树的多倍体育种和运用研究提供参考。     

应用流式细胞技术鉴定桑树倍性的样品选择

利用流式细胞仪对桑树不同叶位的叶片、同一叶位的不同部位、叶芽和种子胚根等进行倍性测定,筛选合适的桑树倍性鉴定材料。结果表明,未完全展开幼叶的检测效果优于第1叶位叶和第2叶位叶,第1叶位叶的检测效果优于第2叶位叶;同一叶位幼叶叶基部分的检测效果优于叶尾部分;叶芽的检测效果最好,而且制备样品的杂质较少,是用于流式细胞术研究的最佳材料。胚根也可以作为流式细胞仪检测的材料,这为更早检测桑树的倍性提供了候选材料。研究结果为选取不同时间段的不同材料进行桑树倍性检测提供了依据,也为其他植物倍性鉴定取材提供了参考。     

植物染色体倍性鉴定方法及其在桑树研究中的应用

植物染色体倍性鉴定是种质资源评价和多倍体育种的一项基础性工作。本文综述了植物染色体倍性鉴定的常用方法,包括染色体计数法、植株形态指标鉴定法、细胞形态学鉴定法、流式细胞术鉴定法、分子标记鉴定法、同工酶鉴定法和生理生化指标鉴定法,并概述了上述方法在桑树种质资源研究及多倍体育种中的应用,同时针对各种鉴定方法存在的优点和缺点展开讨论,以期为桑树种质资源的创新与育种材料发掘提供参考。     

利用流式细胞仪鉴定鸭茅倍性

鸭茅为世界重要禾本科牧草之一,多为四倍体或二倍体。快速鉴定其倍性可为鸭茅遗传背景研究及多倍体材料的创制提供技术支撑,加快育种进度。采用流式细胞术,筛选4种细胞核DNA解离液,对比2种流式细胞仪检测方法,最终建立鸭茅倍性鉴定高效技术体系。结果表明,不同解离液处理后的细胞核DNA含量存在一定差异。利用Otto制备鸭茅细胞核悬浮液效果较理想,峰型完整,碎片峰较少且样本峰信号清晰,其荧光变异系数为5%左右。内外标法检测各有优势,外标法检测更快速更简便,而内标法准确性更高。在以外标检测为主的基础上,共在46份鸭茅材料中鉴定出二倍体鸭茅22份,四倍体鸭茅24份,为鸭茅遗传育种提供材料。     

桑树幼叶细胞染色体简易制片技术

<正> 在桑树品种资源鉴定和桑树倍数性育种工作中,经常需要鉴定幼叶细胞的染色体数。不少学者应用常规酸解压片方法或去壁低渗法制作桑树染色体玻片标本,取得了满意结果。笔者在实践中,经过研究改进,采用低温进行前处理,并在室温条件下酸解,制作桑树染色体标本,亦收到良好效果,为简化酸解压片方法和降低鉴定成     

利用流式细胞仪鉴定鸭茅倍性

鸭茅为世界重要禾本科牧草之一,多为四倍体或二倍体。快速鉴定其倍性可为鸭茅遗传背景研究及多倍体材料的创制提供技术支撑,加快育种进度。采用流式细胞术,筛选4种细胞核DNA解离液,对比2种流式细胞仪检测方法,最终建立鸭茅倍性鉴定高效技术体系。结果表明,不同解离液处理后的细胞核DNA含量存在一定差异。利用Otto制备鸭茅细胞核悬浮液效果较理想,峰型完整,碎片峰较少且样本峰信号清晰,其荧光变异系数为5%左右。内外标法检测各有优势,外标法检测更快速更简便,而内标法准确性更高。在以外标检测为主的基础上,共在46份鸭茅材料中鉴定出二倍体鸭茅22份,四倍体鸭茅24份,为鸭茅遗传育种提供材料。     

利用流式细胞仪鉴定9个居群蒙古冰草的染色体倍性

利用3种分离液制备了乌拉尔图小麦细胞核悬浮液,其中Otto缓冲液制备效果最好。选用该分离液制备了9个居群蒙古冰草的单细胞悬浮液,在显微镜下统计细胞数,并利用流式细胞仪检测其染色体倍性,用二倍体乌拉尔图小麦作为对照。结果发现,流式细胞仪检测结果与传统的染色体制片法的结果一致,均为二倍体。     

造孢细胞在雄株桑种质资源染色体倍性鉴定中的应用

染色体倍性鉴定是开展桑树进化研究及多倍体育种的基础。选择11份只开雄花的雄株桑种质资源,以其有丝分裂中期的造孢细胞为材料,利用去壁低渗法制备染色体标本,观察其染色体数目。按照桑树染色体基数为7(x=7)的理论,在11份桑种质资源中鉴定得到9个四倍体(2n=4x=28)、1个六倍体(2n=6x=42)和1个十八倍体(2n=18x=126)。试验结果表明,造孢细胞是鉴定雄株桑种质资源染色体倍性较为理想的材料。     

氟乐灵在桑树染色体加倍试验上应用的初步研究

用氟乐灵和秋水仙碱对桑树染色体进行诱导加倍试验。用不同浓度的氟乐灵和秋水仙碱诱导桑树实生苗与刚露白的桑种,采用流式细胞仪对桑树诱导的幼苗及根尖进行倍性分析鉴定。结果表明,处理桑树实生苗生长点及浸种时,0.10%的氟乐灵、0.20%的秋水仙碱具有较好的加倍效果,0.20%的秋水仙碱诱导效果稍好,但2种处理间无显著差异。氟乐灵使用的浓度低,价格低廉,效果好,且毒性小,对人和环境比较安全。     

桑树原生质体分离及高效计数方法的研究

为探索桑叶原生质体制备和精确计数的方法，以桑树新一之■多倍体系列的组培自生根苗为材料，通过优化酶解液配方，利用流式细胞仪进行叶片原生质体计数试验。结果表明，酶解液为5%纤维素酶-R10+5%果胶酶+20 mmol/L KCl+20 mmol/L MES+0.4 mol/L甘露醇+10 mmol/L CaCl₂+5 mmol/L β-巯基乙醇+0.1%BSA(pH 5.7)时，取28.26 mm²叶片组织，在5 mL酶解液中黑暗静置3 h,耗时较短，酶解较为充分。将酶解液稀释100倍后过滤上机，可以准确高效地检测细胞数；使用移液器量取剩余滤液体积，可以准确计算出上机吸取的滤液体积；由此，可以较为准确快速地分析制备滤液中的原生质体数目。研究结果优化了解离桑树多倍体得到原生质体的条件，为快速检测原生质体数目提供了技术支持。     

新麦草愈伤组织多倍体诱导与倍性鉴定

以新麦草幼胚形成的胚性愈伤组织为材料,在悬浮培养基中添加不同浓度秋水仙素和1.5%DMSO诱导愈伤组织染色体加倍,并对处理后的愈伤组织再生幼苗进行根尖染色体倍性鉴定。在25℃下用100mg/L秋水仙素和1.5%DMSO处理72h的愈伤组织再生植株,平均加倍细胞比例最大,为53.58%。比较分蘖期加倍幼苗与二倍体幼苗形态差异,结果除分蘖数无显著差异外,四倍体叶片长、宽均显著高于二倍体,与混倍体叶长差异不显著。四倍体新麦草叶片气孔保卫细胞长度比二倍体增加13.52%,差异显著。同时四倍体叶表皮气孔之间距离也显著大于二倍体,混倍体以上气孔特征介于四倍体与二倍体之间。     

桑树有丝分裂染色体观察新法探索实验——酸解去壁低渗法

取桑芽、幼叶经前处理后,用1N HCl酸解处理材料15分钟,再进行低渗滴片,制备桑有丝分裂染色本标本.经观察,用此法制备的染色体标本,同样可以达到酶解去壁低渗法的观察效果,而比酶解去壁低渗法极大的节约实验费用;与常规切片法、压片法相比,其染色体制备效果好,且操作程序更简捷.将该方法称作桑树酸解去壁低渗法.     

野生长穗桑种质资源云7的多倍体诱导和鉴定

以野生长穗桑(Morus wittiorum Hand-Mazz)多倍体(2n=7x=49)种质资源云7组培苗的不定芽为材料,用不同浓度秋水仙碱处理一定时间后进行组织培养,观察、鉴定萌发多倍体植株的染色体加倍的效果。不定芽经2 g/L秋水仙碱溶液(以二甲基亚砜作为渗透剂)浸泡2.5 d后,其死亡率为53.76%。以此接近半致死率的诱导条件诱导供试桑树不定芽的染色体加倍,并对其组培苗的腋芽持续多代分离筛选,经过染色体计数观察与流式细胞技术鉴定其倍性,最终得到2株稳定的十四倍体(2n=14x=98)长穂桑植株。诱变植株移栽至室外环境后生长状态良好,由此实现了对野生长穂桑种质资源染色体的人工加倍。     

燕麦属牧草根尖组织染色体观察方法的优化研究

针对通常采用的燕麦属牧草染色体观察的去壁低渗法,对该方法中的预处理和解离等环节进行了优化,即预处理用对二氯苯在20℃下处理4h,固定,酸解离用1mol／LHCl在60℃下处理10min,酶解离用20g／L纤维素酶溶液在25℃下处理20min,最后染色压片。通过研究发现优化后试验步骤简化,成本降低,且观察效果良好。     

桑树染色体制片的直接酸解去壁法及其实用性研究

本研究出桑树染色体制片的直接酸解击壁法：直接取桑嫩芽幼叶投入“酸醇去壁固定液”(浓盐酸：45％醋酸,纯乙醇=1：0．5：0．5容积比)中3～5min,然后将材料水洗几次浸入水中后低渗10min,再经染色即制备成染色体标本。验证了在保证染色体制片观察效果前提下,样本材料采集后可在室温和冰箱(7～12℃)保存数小时至36小时。并与其它制片方法从制片效果,工作效率、成本等方面进行比较。从而证明本方法具有操作简单、省时省力、成本低、效率高、有较大的实际应用价值。     

桑树根尖染色体的制片方法

在桑树育种工作中,往往可以看到,园叶和裂叶品种杂交的后代,出现园叶,但也有部分裂叶,由广东桑和湖桑杂交,后代表现出发芽早,发芽率高,生长势旺的特性,这些都是遗传的关系,遗传是通过基因控制的,细胞核里的染色体是基因的载体。我们想要分析遗传变异规律,鉴定桑树品种的倍数性,开展多倍体育种及品种资源的调查、整理、分类都离不开染色体的观察和研究。研究染色体,首先要制作染色体的玻片标本,以便进行砚察。下面介绍桑树根尖细胞染色体的制片方法。     

黄芩苷对热应激条件下LLC-PK1细胞HSP70表达的影响

为了探讨不同浓度黄芩苷对热应激条件下猪肾小管上皮(LLC-PK1)细胞HSP70表达的影响,筛选出黄芩苷诱导热应激条件下细胞HSP70表达的最佳浓度。将培养的LLC-PK1细胞随机分为7个组,Ⅰ组为37℃常温对照组,Ⅱ组为42℃单纯热应激组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组和Ⅶ组分别为42℃热应激并用不同浓度黄芩苷(0.01~100μg/m L)处理组,运用实时荧光定量PCR和Western Blot检测HSP70 m RNA及蛋白的表达。结果显示,42℃单纯热应激能显著诱导LLCPK1细胞HSP70的表达;一定浓度范围内的黄芩苷(0.1~10μg/m L)处理的LLC-PK1细胞HSP70表达显著高于42℃单纯热应激;黄芩苷(0.01~100μg/m L)能显著上调热应激条件下LLC-PK1细胞HSP70的表达,且1μg/m L的黄芩苷上调效果最显著。     

桑树多倍体育种及鉴定方法的研究进展

从桑树多倍体育种的意义为出发点,主要概述了物理、化学等常见的桑树多倍体诱导及鉴定的方法。桑树多倍体鉴定主要从桑树多倍体基本表型特点、气孔和花粉粒等形态特征和桑树的组织结构和细胞结构等方面进行判断;细胞结构的判断主要从直接的染色体计数法和间接利用流式细胞术进行测定。文章还对多倍体的一些生理生化变化、营养物质、活性成分等进行了简要的整理,并对我国多倍体育成的成就进行归纳总结;并提出从注重观赏、食用、药用等为主要的研究方向进行桑树多倍体育种,为桑树多倍体鉴定、育种效率提高和应用研究提供理论参考。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导CTLL-2细胞凋亡的信号途径研究

为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对动物免疫功能的影响及其机理,以细胞毒性T淋巴细胞株CTLL-2为材料,用不同浓度的DON(0、0.5、1、2μg/m L)处理CTLL-2细胞48h,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印记法检测细胞凋亡相关通路蛋白CleavedCaspase 9、Cleaved-Caspase 3、Fas L、Fas、Cleaved-Caspase8等表达情况;并用流式细胞术检测了DON(1μg/m L)与Fas L中和抗体(10μg/m L)共处理后细胞的凋亡率。结果表明,随着DON浓度的升高,CTLL-2细胞的凋亡率呈上升趋势,染毒组均较对照组有极显著差异(P0.01);Bax/Bcl-2的比值升高,呈剂量-效应关系;DON促进细胞色素c(Cyt-c)从线粒体中释放到胞浆中,能够上调Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3的表达,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P0.05或P0.01);Fas L、Fas、Cleaved-Caspase 8蛋白表达量随着DON浓度的升高逐渐增加,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P0.05或P0.01);随着DON浓度的升高,p38 MAPK、JNK、Erk的磷酸化水平也升高,呈剂量-效应关系;与DON处理组相比,Fas L中和抗体与DON共同处理组细胞凋亡率明显下降(P0.01)。结果表明,DON可以诱导CTLL-2细胞发生凋亡,激活CTLL-2细胞线粒体通路、MAPKs通路,DON通过死亡受体途径诱导CTLL-2细胞凋亡,影响动物的免疫机能。     

广西及广东省部分桑树种质资源染色体倍数性的鉴定

鉴定了广西和广东两省的桑树种质资源共446份的染色体倍数性,其分属于广东桑、鸡桑和华桑,其中二倍体桑414份,三倍体桑20份,六倍体桑12份,344份桑树种质资源中的染色体数属于首次鉴定。