荷斯坦牛TLR2基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系分析

利用PCR-RFLP方法检测TLR2基因在297头中国荷斯坦牛中的多态性,并分析其多态性与体细胞评分(SCS)的相关性.结果显示,TLR2基因exon2扩增片断的109 bp处产生C→A的突变,并导致天冬氨酸改变为谷氨酸.TLR2基因exon2被EcoRV消化后表现多态性,表现AA、AB、BB 3种基因型,其中B等位基因为优势等住基因,等位基因频率为0.784 5,而A等位基因频率则为0.215 5.经X2适合性检验,中国荷斯坦牛在该位点达到Hardy-Weinberg平衡状态.同时,群体EcoRV基因座不同基因型与SCS相关分析的结果表明,BB、AB型个体的SCS指标显著高于AA型(P<0.05),AA基因型可作为乳腺炎抗性的有利基因型,可将TLR2作为奶牛乳腺炎候选基因,应用于乳腺炎抗性分子标记辅助选择育种.     

宁夏地区荷斯坦牛Nramp1基因多态性分析

天然抗性相关巨噬蛋白(Nramp)和多种细胞内菌体的抗性感染相关联。通过对荷斯坦牛Nramp1基因第11外显子多态性进行PCR-SSCP检测结果显示,该区域存在A、B两种等位基因和AA、BB、AB三种基因型,其中等位基因A的频率为0.2692,等位基因B的频率为0.7308,基因型AA的频率为0.0833,基因型BB的频率为0.5449,B为优势等位基因,基因型BB为优势基因型。经过卡方适合性检验,荷斯坦牛Nramp1基因所测区域处于中度多态,未偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。测序结果表明,引物扩增片段在200bp处发生G→C错义突变,从而导致氨基酸由半胱氨酸(Cys)变为丝氨酸(Ser)。     

荷斯坦母牛TLR6基因多态性及其与体细胞评分关系的研究

本研究旨在阐明Toll样受体6(TLR6)基因的多态性与荷斯坦母牛乳房炎抗性之间的关系.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术检测208头荷斯坦母牛TLR6基因多态性,用最小二乘法分析该基因多态性与荷斯坦母牛钵细胞评分(somatic cell score,SCS)的关系.结果发现,TLR6基因mRNA序列中存在T853A、G855A、G1793A、C1859A、G1934A和A1980G 6个多态位点,其中T853A突变使编码氨基酸由缬氨酸变为谷氨酸,G855A突变使天冬氨酸变为天冬酰胺,A1980G突变使异亮氨酸变为缬氨酸.T853A和G855A突变位点经SSCP检测发现3种基因型AA、AB和BB,其频率分别为0.308、0.490和0.202;X~2检验表明荷斯坦母牛在该位点处于Hardy-Weinberg平衡;BB基因型SCS最小二乘均值极显著低于AB和AA基因型所对应的值(P<0.01);AB基因型SCS最小二乘均值极显著低于AA基因型所对应的值(P<0.01).G1793A突变位点经BsiY Ⅰ酶切产生2种基因型CC和CD,其频率分别为0.332和0.668;荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡,CC和CD基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05).C1859A突变位点经BstX Ⅰ酶切产生2种基因型EE和EF,其频率分别为0.178和0.822;荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;EE和EF基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05).G1934A突变位点经BsiY Ⅰ酶切产生2种基因型GG和GH,其频率分别为0.356和0.644;荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;GG和GH基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05).A1980G突变位点经Bcl Ⅰ酶切产生3种基因型II、IJ和JJ,其频率分别为0.260、0.567和0.173,荷斯坦母牛在该位点处于Hardy-Weinberg平衡;JJ基因型SCS最小二乘均值极显著低于IJ和II基因型所对应的值(P<0.01);IJ基因型SCS最小二乘均值极显著低于II基因型所对应的值(P<0.01).对于奶牛乳房炎抗性,BB和JJ是有利基因型,AA和II是不利基因型.本研究结果初步表明TLR6基因T853A和G855A突变位点的B等位基因以及A1980G突变位点的J等位基因是提高奶牛乳房炎抗性的2个潜在的DNA标记.     

荷斯坦母牛TLR10基因PCR-SSCP分析

设计15对引物,采用PCR-SSCP技术检测Toll样受体10（Toll-like receptor 10,TLR10）基因在210头荷斯坦母牛中的多态性,分析该基因对荷斯坦母牛乳房炎抗性的影响。结果显示,TLR10基因在检测的荷斯坦母牛中都不存在多态性,该基因区域可能不存在影响乳房炎抗性的遗传标记。     

陕西地区荷斯坦牛Mx1基因外显子多态性分析

牛Mx1基因位于1号染色体上,含有14个外显子,编码648个氨基酸。研究以346头陕西地区荷斯坦牛为研究对象,根据GenBank所提供的牛Mx1基因序列,设计15对引物,采用混合DNA池扩增测序和PCR-RFLP的方法对牛Mx1基因的14个外显子进行多态性分析。结果表明,4个SNPs,分别位于外显子3（g.843330T〉C,g.843411A〉G）、外显子4（g.844048C〉T）和外显子7（g.851325T〉C）。其中,外显子4（g.844048C〉T）为同义突变;外显子3（g.843330T〉C,g.843411A〉G）两个位点的突变分别导致了异亮氨酸（Ile）向苏氨酸（Thr）、谷氨酸（Glu）向精氨酸（Arg）的突变;外显子7（g.851325T〉C）位点的突变导致亮氨酸（Leu）变为脯氨酸（Pro）。4个SNPs位点都存在三种基因型,但纯合子的突变频率较低。4个SNPs位点共构建了11种单倍型,其中以H6为最主要的单倍型。结果显示,陕西地区荷斯坦牛Mx1基因存在较丰富的多态性,这将为Mx1基因结构和功能的研究以及将来在育种实践中的应用提供基础资料。     

荷斯坦牛LF基因5’UTR区多态性分析

本研究采用PCR-SSCP技术对303头奶牛的乳铁蛋白基因5’UTR区进行遗传多态性检测,以确定其等位基因数以及核苷酸变异位点,探讨其遗传特性结果表明,LF基因在扩增区域的64bp处发生G→C的突变,形成AA、AB、BB三种基因型,其基因型频率分别为0.2541、0.4455和0.3004,等位基因A和B的频率分别为0.4796和0.5231。群体遗传学分析发现荷斯坦牛LF基因的有效等位基因数(Ne)、遗传杂合度(He)和多态信息含量(PIC)分别是0.4989、0.4455和0.3745。经卡方适合性检验表明该群体处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。中国荷斯坦牛LF基因5’UTR区的多态性相对较高,遗传变异相对较大,提示该位点有望作为荷斯坦牛乳腺炎抗病育种的标记位点之一。     

中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因座的PCR-RFLP多态性分析

主要组织复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)基因在动物机体免疫系统中具有重要作用,并与多种疾病的抗性或易感性存在相关性。利用限制性内切酶HaeⅢ和RsaⅠ通过FCR-RFLP技术分析了112头中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因的多态性。结果表明:所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均存在多态性,HaeⅢ酶切位点存在4种等位基因,有4种基因型;RsaⅠ酶切位点存在3种等位基因,有4种基因型。经χ~2适合性检验,所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均未达到Hardy-weinberg平衡状态。     

中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因座的PCR-RFLP多态性分析

主要组织复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)基因在动物机体免疫系统中具有重要作用,并与多种疾病的抗性或易感性存在相关性.利用限制性内切酶HaeⅢ和RsaⅠ通过PCR-RFLP技术分析了112头中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因的多态性.结果表明:所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均存在多态性,HaeⅢ酶切位点存在4种等位基因,有4种基因型;RsaⅠ酶切位点存在3种等位基因,有4种基因型.经x2适合性检验,所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均未达到Hardy-weinberg平衡状态.     

KIT基因多态性与荷斯坦牛着色性状的关联分析

牛的被毛颜色是重要的外貌性状。本研究采集北京地区401头荷斯坦母牛血样及21头公牛冻精样品．提取基因组DNA,选取牛6号染色体上KIT基因的4个SNPs位点,利用飞行时间质谱技术检测基因型。通过数码相机照相并进行图像分析计算牛的被毛黑白比例,记录乳头颜色。将基因型和表型数据进行关联分析,结果显示KIT基因的G72792875T住点对被毛比例有显著影响（P〈0．05）,推测KIT基因可能与荷斯坦牛的着色性状的形成相关。     

荷斯坦牛

1荷斯坦牛的起源荷斯坦牛起源于欧洲,这个品种的形成和培育发展主要是在现在的荷兰,更准确地说,是在位于荷兰北部ZuiderZee两边的北荷兰省和弗里斯兰省。其种源可追溯到约2000年前移居欧洲生活在莱茵河三角洲的部落民族带来的黑色巴达维亚牛和白色弗里斯兰牛。经历了好多年的精心培育和选择,荷斯坦牛已成为最适宜丰美草原地区饲养的品种,这一杂交品种已进化为优质高产的黑白花奶牛。2引入美洲随着人们在美洲新大陆定居,这里牛奶的市场需求越来越大,育种人员不得不辗转到荷兰购买荷斯坦牛种。1852年,一名叫温斯罗普的麻省农场主向一位在波士…     

中国荷斯坦牛GlyCAM1基因遗传多态性的研究

以273头中国荷斯坦牛为研究对象,利用CRS—PCR、PCR—SSCP及DNA测序技术检测了GlyCAM1基因外显子3、内含子3的遗传多态性。结果表明：GlyCAM1基因分别在外显子3和内含子3的第2081（A／C）、2417（C／T）位存在突变,2个位点的等位基因频率A／B分别为0．7525,0．2475和0．9046,0．0954;经菇。适合性检验,中国荷斯坦牛内含子3的突变达到Hardy—Weinberg平衡状态（P〉0．05）,但其外显子3的突变未达到Hardy—Weinberg平衡状态（P〈0．05）。     

荷斯坦母牛TLR10基因PCR-SSCP分析

设计15对引物,采用PCR-SSCP技术检测Toll样受体10(Toll-like receptor 10,TLR10)基因在210头荷斯坦母牛中的多态性,分析该基因对荷斯坦母牛乳房炎抗性的影响。结果显示,TLR10基因在检测的荷斯坦母牛中都不存在多态性,该基因区域可能不存在影响乳房炎抗性的遗传标记。     

荷斯坦牛BoLA-DRA基因外显子1生物信息学分析

本研究通过DNA混合池扩增测序方法对荷斯坦牛BoLA-DRA基因外显子1突变位点进行分析,并对其结构功能进行生物信息学预测。结果发现在荷斯坦牛BoLA-DRA基因外显子1在第1位和第2位之间有碱基T的插入,生物信息学预测结果表明DRA外显子1的mRNA二级结构突变前后自由能没有发生变化,蛋白质二级结构中β-折叠占比例最高,蛋白质功能预测结果显示该基因荷尔蒙和免疫应答的几率较高,表明DRA外显子1在荷斯坦牛性激素和免疫应答过程可能发挥重要作用,本研究结果为进一步研究BoLA-DRA基因抗病选育提供理论基础。     

中国荷斯坦牛κ-酪蛋白基因多态性与产奶量的相关分析

本文利用ＰＣＲ ＲＦＬＰＳ方法对２６头中国荷斯坦牛κ 酪蛋白基因进行分析,用ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ酶切发现了多态性。分析κ 酪蛋白基因型与奶产量间的关系,第１胎ＢＢ基因型高于ＡＡ基因型,第２胎及总胎次ＡＡ基因型高于ＢＢ基因型。     

徐州荷斯坦牛NRAMP1基因多态性与乳房炎通径分析

奶牛的NRAMP1基因编码的蛋白是与天然抗病性相关的巨噬磷酸糖蛋白,在网状内皮细胞器官的巨噬细胞中表达。NRAMP1蛋白抗菌专一性强,主要在巨噬细胞活化通路中发挥重要免疫功能,可以抵抗多种胞内病原微生物,在遗传免疫研究中具有重要意义。NRAMP1基因可以编码具有完整膜的蛋白,具     

荷斯坦牛BoLA-DRB3基因多态性及其与乳房炎抗性关系分析

以PCR-RFLP方法检测了BoLA-DRB3基因在荷斯坦奶牛中的多态性，并统计分析了产犊年季和BoLA-DRB3基因分别被RsaⅠ和HaeⅢ酶切后的不同基因型对SCS及其它产乳性状的影响。结果表明：RsaⅠAD型的SCS显著高于RsaⅠEG型（P〈0．05）。另外，年季和BoLA-DRB3被RsaⅠ酶切后的不同基因型对蛋白率和乳脂率的影响均达到了显著水平（P〈0．05）。HaeⅢAB型个体的蛋白率显著高于HaeⅢAA型（P〈0．05）。     

中国荷斯坦牛k—酪蛋白基因多态性与产奶量的相关分析

本文利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ方法对２６头中国荷斯坦牛ｋ－酪蛋白基因进行分析,用ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ酶切发现了多态性。     

中国荷斯坦牛SCD1基因多态性与泌乳性状的关联分析

本研究旨在探索中国荷斯坦牛SCD1基因多态性与产奶性状的相关性.以上海某奶牛场610头中国荷斯坦牛为试验材料,采用PCR-SSCP法对SCD1基因A293V位点遗传多态性进行分析,利用一般线性模型分析SCD1基因A293V位点突变对测定日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、305天校正产奶量、乳脂量、乳蛋白量及体细胞评分7个泌乳性状的影响.共检测到AA、AV和VV 3种基因型,频率分别为0.634、0.323和0.043,等位基因A和V的频率分别为0.796和0.204.该位点突变对乳脂率、乳蛋白率的影响达到显著水平(P＜0.05),对测定日产奶量、305天校正产奶量、305天乳蛋白量和305天乳脂量以及体细胞评分影响不显著(P＞0.05).多重比较表明,VV基因型个体的乳蛋白率、乳脂率极显著高于AA、AV型个体(P＜0.01).SCD1基因A293V位点突变对中国荷斯坦牛泌乳性状的遗传效应有一定程度的影响,但影响机理需要进一步的研究.