猪PRRSV云南分离株主要蛋白基因克隆及序列分析

采用RT-PCR技术,分别对PRRSV云南分离株-YN株编码GP3、GP5、M蛋白的基因进行扩增,获得764、602、524 bp特异性目的片段,经纯化后,克隆至pMD18-T载体中,分别进行序列测定与分析。结果表明,云南PRRSV与已知代表毒株核苷酸序列同源性分别为89.72%～98.80%;遗传进化分析表明,云南分离株与HB-2(sh)/2002、CH-1a等毒株关系最近,与VR-2332、respPRRS mlv等同属一个大分支,而与JXA1、GD、NM1等毒株处于不同的分支。     

PRRSV广西分离株GXYL-1403全基因克隆与序列分析

对本实验室所分离的1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株GXYL-1403进行全基因组克隆和序列分析。参考已发表的扩增全长PRRSV序列的13对特异性引物,用RT-PCR方法对病毒基因组进行分段扩增。将扩增得到的PCR片段克隆到pMD18-T载体上,获得的重组质粒经PCR鉴定后进行序列测定。通过软件对所扩增序列进行拼接,获得GXYL-1403的全长序列,并对GXYL-1403进行比较和遗传进化分析。结果表明GXYL1403株基因序列全长为15 018bp,与国内外多株PRRSV毒株进行同源性比较发现,与VR-2332的相似性为89.1%,与TJ、JXA1、HEB1、HUB1、HUB2、TP株同源性达到了97.9%~98.1%。另外,GXYL-1403分离株nsp2蛋白含有高致病性PRRSV特异的1+29个氨基酸的缺失。特别重要的是,在缺失29个氨基酸区域的上游,含有连续20个氨基酸缺失,在下游出现了连续74个氨基酸的缺失。遗传进化分析发现美洲型PRRSV主要分为3个亚群,GXYL-1403跟高致病性PRRSV毒株属于同一分支,证实了GXYL-1403株为美洲型PRRSV毒株。     

PRRSV分离株GP3蛋白ORF3基因克隆及序列分析

为研究宁夏地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行规律,应用RT-PCR的方法从PRRSV分离株GP3蛋白中扩增出ORF3基因cDNA片段。结果显示,ORF3基因全长765 bp,编码254个氨基酸,与北美型毒株VR-2332的同源性达到85%以上,与欧洲型毒株LV的同源性低于60%,与国内近3年主要流行毒株JXA1、HEB1、HUB2亲缘性较近。对PRRSV分离株的亲水性分析表明,GP3蛋白的前57位氨基酸为疏水性信号肽序列;对PRRSV分离株GP3蛋白抗原表位分析表明,与国内外其他毒株抗原表位预测的结果基本一致,说明PRRSV分离株GP3蛋白具有与其他毒株相近的抗原特性。     

广西高致病性 PRRSV Nsp2基因的克隆、序列分析和抗原表位预测

根据猪繁殖与吸吸综合征病毒(PRRSV)VR2332 Nsp2基因序列合成特异性引物,对广西分离的高致病性PRRSV进行RT-PCR扩增,将扩增出的796 bp片段插入pMD18-T载体中进行序列测定和分析,并用DNA Star软件对Nsp2基因推导的氨基酸序列进行了表位分析。结果显示,广西3个县、市的PRRSV分离株Nsp2基因第483位和第532位~第560位氨基酸发生缺失,核苷酸序列之间的同源性为97.0%~97.4%,推导编码的氨基酸序列之间的同源性为93.6%~94.7%;与PRRSV VR2332株、MLV株和CH-1a株核苷酸之间的同源性分别为79.0%~79.2%、78.8%~78.9%和88.2%~89.3%;氨基酸之间的同源性分别为59.4%~60.2%、59.4%~60.2%和70.9%~81.6%,表明广西3个县、市的PRRSV分离株Nsp2基因与VR2332株、MLV株和CH-1a株比较变异较大。表位分析表明,由于博白株的Nsp2基因的第532位~560位氨基酸的缺失,与VR2332株比较,其亲水性、抗原指数均发生了大的变化。     

PRRSV浙江分离株Nsp2基因序列分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)临床上主要表现为流产、早产、死胎、仔猪成活率下降和育成猪呼吸系统病变等.本研究用RT-PCR对2008年-2009年采集于浙江省部分发病猪场的41株疑似猪繁殖与呼吸综合征病猪的脾、肺、淋巴结混合组织样本进行PRRSV病毒检测和Nsp2基因序列分析.结果显示,41株PRRSV流行毒株中20份...     

PRRSV河北地方分离株ORF5基因序列分析

为了分析河北秦皇岛和唐山部分地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因变异情况,对采集自秦唐部分地区在2009年的临床发病猪肺组织,提取其RNA,通过RT-PCR扩增样本中PRRSV的ORF5全序列,并对其进行生物信息学分析.应用DNA Star软件分析序列,系统进化分析表明,它们与国内2006年-20...     

PRRSV辽宁株N蛋白基因的克隆及序列分析

以辽宁地区某猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪病料为材料,采用RT-PCR方法特异性扩增编码猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因全长cDNA,结果表明,该分离株N基因cDNA编码区长372bp,可编码123个氨基酸残基,与美洲型代表株VR-2332、欧洲型代表株LV进行同源性比较,核苷酸同源性分别为92.2%和27.2%,推测该辽宁分离株属于美洲型。     

2022年浙江省PRRSV流行毒株ORF5基因序列遗传进化分析

为了解2022年浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）流行毒株的基因型及变异情况,采用RT-PCR方法,对浙江省不同地区收集的37份PRRSV阳性病料组织进行ORF5基因扩增,应用DNAstar和Mega 7软件进行同源性和遗传变异分析。结果显示：37份阳性样品的ORF5基因核苷酸和编码氨基酸之间的同源性分别为82.1%～100%和81.1%～100%;阳性样品的ORF5基因与高致病性PRRSV毒株JXA1、经典PRRSV毒株VR2332、国内早期PRRSV毒株CH1-a、NADC30类毒株、NADC34类毒株和新型PRRSV毒株QYYZ的核苷酸同源性分别为84.1%～98.7%、83.9%～99.7%、85.2%～95.0%、85.3%～94.0%、86.4%～96.2%和82.8%～85.1%,编码氨基酸同源性分别为83.6%～99.5%、82.6%～99.0%、84.1%～93.5%、83.1%～94.5%、85.6%～95.5%和81.1%～86.6%。37份阳性样品的感...     

PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW株的分离鉴定及序列分析

分离并鉴定了1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经病毒生物学特性测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒,将其命名为JL/07/SW株.根据猪繁殖与呼吸综合征病毒VR-2332株及变异毒株的核苷酸序列,设计合成了针对NSP2变异序列、N基因以及GP5基因的引物,扩增出正确的序列,经测定的序列比对后,发现该毒株为美洲型变异毒株,NSP2上缺失了30个氨基酸,而GP5和M基因相对保守.     

shRNA抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1-R株在Marc-145细胞中复制及抗PRRSV细胞株的建立

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）JXA1-R株ORF1a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的保守区域为靶序列,利用pSilencer2.1-U6 neo构建shRNA表达载体并转染Marc-145细胞。经实时荧光定量PCR、细胞病变及病毒滴度分析,结果显示,ORF1a-4-shRNA、ORF3-1-shRNA、ORF6-2-shRNA干扰质粒能明显抑制病毒基因的转录,并有效抑制PRRSV在Marc-145上的增殖,显著降低病毒滴度。最后筛选ORF6-2-shRNA表达质粒转染猪胎儿成纤维细胞,构建稳定转染细胞株,为抗PRRSV转基因猪的生产奠定了基础。     

贵州省种猪场5种传染病的血清学调查分析

近年来,贵州省一些种猪场出现了一种以母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道症状及生长发育不良为主要临床表现的疫病,严重影响了养猪业的健康发展.研究资料表明,引起上述症状的病毒性传染病主要有猪瘟(hog cholera,HC)、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、猪伪狂犬病(pseudorabies, PR)、猪细小病毒病(porcine parvovirus infection,PP)和猪圆环病毒病(porcine circovirus infection,PC)等.     

广东地区小型猪场PRRSV血清抗体水平调查和分析

在广东省8个地区的40个猪场采集血样,进行了PRRSV血清抗体水平调查,结果表明,受检的714份血清中,523份为PRRSV抗体阳性,总体阳性率为73.25%,其中佛山、河源、清远、江门、茂名送检的样本PRRSV抗体阳性率均在70%以上,合格率高于农业部规定的70%;但湛江、肇庆、惠州送检的样本PRRSV抗体阳性率在70%以下,在这些地区猪场群体免疫不合格。     

南方地区奶牛场蚊蝇危害及综合防控措施

本文阐述了奶牛场内蚊蝇的危害、蚊蝇的生物学特征及其生活习性,并对南方地区奶牛场蚊蝇综合防控给出了建议,旨在提醒广大奶牛养殖户重视蚊蝇危害,并采取若干蚊蝇防控措施,希望对我国南方地区奶牛场降低蚊蝇危害、提高奶牛养殖水平有一定借鉴意义。     

川黔渝地区中小规模猪场伪狂犬病的血清学调查

为了解四川、贵州、重庆3个省(市)中小规模猪场伪狂犬病病毒的感染情况,2020年1月至2021年3月采用ELISA方法对41个猪场的1 016份血清进行伪狂犬病血清学调查。结果：11个猪场的伪狂犬病病毒gE抗体检测呈阳性,场阳性率为26.8%;共检测出阳性样品105份,个体阳性率为10.3%;川、黔、渝地区猪场的个体阳性率分别为13.5%、3.0%、11.8%。结论：四川、贵州、重庆3个省(市)的中小规模猪场均存在伪狂犬病病毒感染,部分猪场感染较为严重,应持续加强对该病的检疫和监测,以净化猪群。     

新疆地区蚊类携带西尼罗病毒情况调查研究

为查明新疆地区蚊体内携带西尼罗病毒的情况,从2005年-2007年每年的7月~10月采集新疆不同地区的蚊子共计16000余只,并提取总RNA,通过RT-nest PCR的方法检测样品中西尼罗病毒。结果表明,调查样品中没有检测到西尼罗病毒,但不能就此推测新疆是否存在西尼罗病毒,至少对新疆地区和全国制定针对不同动物和人的积极防御政策有重要的公共卫生学意义。     

一种牦牛蚊蝇驱避剂作用效果观察

[目的]为了观察蚊蝇驱避剂对牦牛体表蚊蝇的趋避效果。[方法]选择10头成年牦牛,分为实验组和对照区,实验组使用驱避剂之后,观察比较牦牛体表蚊蝇数目,实验结束时采集牦牛血清检测谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平。[结果]表明,实验组牦牛明显不良反应,体表蚊蝇明显少于对照组,蚊蝇趋避效果作用明显,两组牦牛血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平无显著差异。[结论]说明牦牛蚊蝇驱避剂能效趋避蚊蝇,可以推广使用。     

工厂化猪场伪狂犬病流行报告

通过对伪狂犬病在部分工厂化猪场流行情况的调查,表明本次流行的特点是以危害仔猪为主,对怀孕母猪危害也较为严重。剖检病变以扁桃体化脓灶、肝脾灶状坏死、肾脏点状出血为特征。应用生物学方法试验和猪伪狂犬病乳胶凝集试验(LAT)诊断试剂盒(华中农大提供)对发病猪只进行诊断试验,均呈阳性反应。     

宜阳县猪场疥螨感染情况调查

疥螨是引起猪螨病(俗称疥癣或癞病)的主要寄生虫,呈世界性分布,对猪的生长危害很大,具有高度接触传染性。猪感染疥螨后,皮肤剧痒,出现红色疹状凸起,因搔痒摩擦导致脱毛,皮肤皱裂、结痂,严重影响生长发育。现将2018年宜阳地区养殖场(户)猪疥螨的感染情况报道如下,为该病的防治提供参考。     

集约化养猪场嗜流产衣原体病流行状况的初步调查

本试验对北京郊区5个规模化猪场断奶仔猪、育成猪、育肥猪和怀孕母猪采集血清共507份,同时采集密切接触饲养人员、仔猪、育肥猪的喉头拭子、母猪阴道拭子及公猪的精液共183份。分别使用间接血凝诊断试剂盒、法国ELISA试剂盒检测抗体;利用直接荧光染色法检测抗原,包括166份猪喉头拭子、阴道拭子和精液以及17份饲养人员喉头拭子。结果发现间接血凝诊断试剂盒、ELISA试剂盒抗体阳性率分别为4.14%和2.17%;抗原平均阳性率为14.8%,其中精液阳性率达到37.5%,母猪阴道拭子阳性率为27.5%,饲养人员阳性率为23.5%。本试验证实北京郊区猪嗜流产衣原体在种公猪、母猪群和饲养员呈高流行趋势。同时研究结果显示,5个被调查的规模化猪场嗜流产衣原体抗体阳性率显著低于有报道的其他省市,这与间接血凝诊断试剂盒检测结果高于ELISA试剂有关。针对发现的问题,必须采取有效措施控制种公猪精液污染衣原体现象,阻断向母猪和饲养人员传播,以降低人兽共患病发生的风险。     

新疆昌吉地区部分规模化猪场PRRSV抗体监测和免疫效果分析

为了查明昌吉地区地区部分规模化猪场猪PRRSV的抗体阳性率及免疫合格率,分别采集了昌吉地区4个免疫了弱毒苗的规模化猪场,和3个免疫了灭活苗的规模化猪场血清共1 036份,采用间接ELISA方法检测其抗体.经检测,4个免疫PRRS弱毒苗规模化猪场总阳性率为79.05％（468/592）,平均KQ为49.63,标准差为39.41.3个免疫PRRS灭活苗规模化猪场总阳性率为62.61％ （278/444）,平均KQ为45.88,标准差为31.22.结果表明,在规模化养猪场使用灭活苗免疫预防PRRS感染作用不如弱毒苗,因此,建议临床应用中应选择弱毒苗为宜,结合检测结果、临床生产数据及猪场已采用猪PRRS免疫程序,建议商品猪在仔猪断奶后初免.在高致病性猪蓝耳病流行地区,可根据实际情况在初免后1个月加强免疫一次,种母猪70日龄前免疫程序同商品猪,以后每次配种前加强免疫一次,种公猪70日龄前免疫程序同商品猪,以后每隔4～6个月加强免疫一次.