铁皮石斛人工杂交育种快繁技术

通过人工授粉获得铁皮石斛蒴果,再以蒴果种子为材料进行组培快繁试验,结果表明：人工杂交育种结实率达83％。经种子萌发诱导培养、原球茎增殖培养和壮苗生根培养等试验的结果表明：种子萌发最佳培养基为1／2MS＋蛋白胨2g／L,发芽率达到95％;原球茎增殖最佳培养基为1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋15...     

翅萼石斛组织培养及快繁技术研究

以翅萼石斛蒴果为外植体,通过对其种子无菌萌发和原球茎诱导、原球茎增殖及丛生芽诱导、生根壮苗以及移栽驯化的研究,建立翅萼石斛的组培快繁技术体系。结果表明:翅萼石斛种子萌发和原球茎诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20 g/L;原球茎增殖和丛生芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20g/L+活性碳1.0g/L,接种45 d后增殖系数约5.8个、生长情况良好;生根壮苗的培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+香蕉泥100 g/L+活性碳1.0 g/L,生根率达100%,根系及幼苗长势良好。桂林地区移栽驯化宜在3~4月进行,选择水苔做基质,60 d后成活率为76.7%。     

铁皮石斛组织培养研究

为了解决铁皮石斛种苗稀缺的现状,提高种苗繁殖率,以铁皮石斛种子(成熟率80％～90％)、带芽茎段、叶片3种材料作为外植体,进行组织培养研究.结果表明:铁皮石斛最适宜外植体材料是种子,最适宜的类原球茎诱导培养基为1/2MS,最适宜的类原球茎增殖培养基为MS+KT1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+CM100 mL/L+活性炭0.3 g/L,最适宜类原球茎分化培养基为MS+KT1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+100 mL/L苹果汁,最适宜生根培养基为MS+IBA1.5 mg/L.     

白芨种子萌发及其原球茎高效增殖体系建立

[目的]筛选白芨原球茎诱导和增殖的最适培养基,建立白芨原球茎高效增殖体系,为白芨种苗工厂化组培生产提供技术支持.[方法]以白芨种子为外植体,筛选适宜其无菌萌发的灭菌方法;以MS或1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的植物生长物质和附加物,通过单因素试验,确定最佳光照和温度条件,筛选最适合其原球茎诱导的培养基;通过正交试验,筛选最适合其增殖的培养基.[结果]采用75%乙醇处理白芨蒴果10 min,无菌萌发率达90.0%,且种子萌发不受影响.在原球茎诱导过程中,30.0 μmol/m2·s光照强度和25 ℃温度环境有利于原球茎诱导;最适合原球茎诱导的培养基为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA.在原球茎增殖过程中,添加土豆泥、椰子汁、香蕉泥等附加物对原球茎增殖有益,其中添加50.0 g/L土豆泥的增殖效果最佳.正交试验结果表明,原球茎增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+50.0 g/L土豆泥,增殖倍数达5.270.[结论]建立的白芨原球茎高效增殖体系可在白芨种苗工厂化组培生产中推广应用.     

铁皮石斛组培技术研究

以野生优质铁皮石斛种源授粉获得铁皮石斛蒴果,再以蒴果种子为源材料进行组培快繁试验,结果表明:试验中种子萌发的最适培养基为MS+NAA0.5mg/L,萌发率达到95%;原球茎增殖培养基为MS+6~BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,鲜重增殖系数达到8.73;最适生根壮苗培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L。     

铁皮石斛组培技术研究

以野生优质铁皮石斛种源授粉获得铁皮石斛蒴果,再以蒴果种子为源材料进行组培快繁试验,结果表明:试验中种子萌发的最适培养基为MS+NAA0.5mg/L,萌发率达到95%;原球茎增殖培养基为MS+6~BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,鲜重增殖系数达到8.73;最适生根壮苗培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L。     

梳唇石斛快速繁殖技术

通过组织培养方法研究梳唇石斛快速育苗技术,利用不同培养基诱导种子直接萌发形成原球茎,并进一步分化获得再生植株。结果表明,种子萌发原球茎诱导的最佳培养基:1/2MS NAA 0.2 mg/L;最佳原球茎增殖培养基:1/2MS 6-BA 0.5 mg/L;最佳生根培养基:1/2MS 香蕉泥100 g/L NAA 0.5 mg/L。     

名贵畲药盘龙参种子快繁技术研究

以盘龙参蒴果为外植体,进行组织培养快繁试验,采用对比试验研究不同基本培养基、激素浓度的配比、天然添加物对盘龙参种子萌发、原球茎增殖、分化的影响,从中筛选出离体条件下适宜种子萌发、种苗快繁的培养基配方。结果表明,外植体最佳消毒方案是采用75%乙醇浸泡30 s结合0.1%Hg Cl2浸泡20 min。最适合的种子萌发诱导培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+琼脂4.0 g/L+蔗糖3%+马铃薯汁15%;原球茎在1/2MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L+琼脂4.0 g/L+蔗糖3%+马铃薯汁15%的增殖效果最好,增殖率为380%;最适合盘龙参原球茎分化的培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+琼脂4.0 g/L+蔗糖3%+马铃薯汁20%。     

独占春种子非共生萌发和低温离体保存

独占春(Cymbidium eburneum Lindley)成熟种子无菌播种诱导原球茎,并以原球茎进行低温离体保存。结果表明:在培养基花宝1号3g/L LH(水解乳蛋白)1g/L BA(细胞分裂素)0.5 mg/L NAA(生长素)0.1 mg/L CM (椰子汁)100 ml/L AC 2 g/L 蔗糖25 g/L中种子萌发出原球茎;原球茎在培养基1/2 MS LH 0.5 g/L BA 0.5 mg/L NAA 0.1mg/L AC 2g/L 蔗糖20g/L中于6℃黑暗条件下连续保存了20个月,成活率达85%,并能在恢复培养基MS BA 3～5 mg/L NAA 0.2 mg/L AC 1g/L CM 100 ml/L 蔗糖25 g/L中进行恢复增殖培养。     

虾脊兰原球茎诱导及植株高效再生体系研究

以野生虾脊兰(Calanthe discolor)未成熟蒴果为材料,MS为基本培养基,探讨不同光照度、热激和不同培养基配方对虾脊兰种子萌发、原球茎发生及植株再生的影响。结果表明,未完全成熟的种子在1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+20 g/L马铃薯+1.0 g/L活性炭培养基中萌芽率最佳;在1 500 lx光照度条件下培养时种子萌发速率较快。通过黑暗条件下35℃热激5 d有利于已萌动种子脱分化形成原球茎。使用MS+3.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖培养基诱导原球茎形成胚性愈伤组织效果最好。MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+20 g/L马铃薯培养基分化形成植株分化率最高,1/2MS+0.2 mg/L IBA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+0.1 g/L活性炭培养基则为最佳生根培养基,生根率100%,植株根系发达,长势健壮。该研究建立了虾脊兰无菌快繁体系,为保护野生虾脊兰资源和种苗人工繁育提供了有效技术途径,也为其遗传转化研究奠定基础。     

野生鼓槌石斛的有性扩繁方法

[目的]采集野生鼓槌石斛的成熟蒴果,利用组培无菌快繁技术获得大量野生鼓槌石斛种苗。[方法]将野生鼓槌石斛成熟蒴果消毒灭菌,并将其种子播种于MS培养基上获得大量原球茎,然后分别转接到不同的培养基上,最后在不同阶段的培养基上筛选出适合野生鼓槌石斛分化和生长的培养基。[结果]将野生鼓槌种子在MS培养基上培养,种子萌发率达95%以上;最利于原球茎分化的培养基为3/4MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+土豆泥4%+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L,成苗率高、出苗整齐;最适幼苗生长培养基为3/4MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+香蕉汁7%+土豆泥2%+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L,小苗粗壮、叶片浓绿;最适生根壮苗培养基为3/4MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+香蕉汁7%+土豆泥2%+AC 0.5 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L,瓶苗生根多而粗壮,叶片浓绿生长整齐。[结论]该研究为野生鼓槌石斛资源的收集与保存提供了参考。     

基于朱顶红愈伤组织途径诱导形成原球茎的研究

[目的]研究通过愈伤组织途径诱导形成朱顶红原球茎.[方法]以朱顶红(Hippeastrum vittatum)鳞茎作为外植体,通过愈伤组织途径诱导形成原球茎,并建立再生植株.[结果]诱导愈伤组织最佳培养基为MS +6-BA 2.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L,诱导率达到80％;诱导原球茎增殖的培养基为MS +6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L,诱导原球茎系数达到15 ～20个;诱导原球茎生长最佳培养基为1/2MS+ 6-BA 4.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ KH2PO480 mg/L+TIBA 0.5 mg/L;诱导原球茎生根培养基为1/2MS+ IBA0.5 mg/L,生根率可达100％.[结论]建立了朱顶红再生植株,实现了朱顶红快速繁殖目标,为朱顶红的种苗生产提供技术支撑.     

灰岩金线莲种子萌发与组培快繁技术研究

【目的】利用灰岩金线莲种子无菌播种进行组培苗生产,为其工厂化组培育苗提供参考。【方法】采用灰岩金线莲种子为外植体,以MS或1/2MS为基本培养基,探讨不同激素组合对外植体进行无菌播种、原球茎增殖、丛生芽分化及生根壮苗的影响。【结果】采用0.1%升汞处理灰岩金线莲蒴果20 min,灭菌率可达100%,且种子萌发不受影响。在种子萌发培养基中添加香蕉泥有利于种子萌发,最适合种子萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥;在原球茎增殖培养中,低浓度的6-BA和NAA有利于灰岩金线莲原球茎增殖,最适合原球茎增殖的培养基为1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥;丛生芽分化的最适培养为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥+0.1%活性炭,原球茎分化丛生芽较多,生长势最佳;最适合灰岩金线莲生根壮苗的培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥+0.1%活性炭。【结论】利用灰岩金线莲种子进行无菌播种,通过原球茎增殖和分化,可获得大量优质组培苗,是实现工厂化育苗的理想途径。     

添加物和植物生长调节剂对铁皮石斛离体快速繁殖的影响

以铁皮石斛未成熟种子为外植体,在离体条件下进行原球茎诱导,类原球茎增殖、分化、生根试验研究。结果表明,以种子萌发直接诱导原球茎的适宜培养基为MS+1.0mg/L BA+0.5mg/L NAA+0.5g/L活性炭(AC)+1.0g/L水解酪蛋白(CH),诱导率达95%以上。在MS+1.0mg/L BA+0.5mg/L KT+0.5mg/L NAA+0.5g/L AC+0.6g/L CH条件下可获得类原球茎最大增殖系数(达18.7),该培养基也适宜于维持类原球茎的增殖保存。类原球茎的最大分化率为93.7%,所需的培养基成分为MS+0.5mg/L BA+0.5mg/L KT+0.2mg/L NAA+0.5g/L AC+0.6g/L CH。试管苗在1/2 MS+0.5mg/L NAA+0.5g/L AC培养基上生根率达100%,且根系健壮发达,移栽后全部成活,长势良好。     

玫瑰石斛叶片培养与原球茎诱导

将玫瑰石斛组培苗叶片接种于含有不同激素的MS培养基上培养,以诱导原球茎的产生,然后将诱导出的原球茎进行增殖培养。结果显示,在MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA的培养基上原球茎诱导效果较好,诱导率可以达到94%;原球茎在MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA的培养基上增殖速度较快且质地较硬、结构松散。本试验结果可为玫瑰石斛人工种子的研究提供一定的参考价值。     

环草石斛种子萌发培养的研究

研究结果表明：环草石斛成熟种子播种在培养基上．无论在光照或黑暗条件下,种胚均能萌发产生原球茎,既可直接成苗．又能继续增殖．诱导产生完整植株。种胚萌发的适宜培养基为MS NAA 0．2mg／L 6-BA 0．2mg／L;原球茎增殖适宜的培养基为MS NAA 0．5mg/L 6-BA 0．2mg/L;试管苗壮苗培养基为MS NAA 1mg／L 6-BA 0.5mg／L。     

卡特兰的无菌播种及组培快繁技术研究

以卡特兰的种子为试验材料,对3种播种培养基进行试验,结果表明,花宝1号培养基对种子出苗有利,也适宜用于种子苗的继代培养.以卡特兰交配种和平×白天母的种子苗原球茎为试验材料,对4种原球茎增殖培养基进行筛选试验,结果表明,MS+ 4.4 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA+ 3％蔗糖+6g琼脂培养基的诱导成活率最高,能够产生大量的绿色愈伤组织,培养10周后,在愈伤组织周边出现原球茎的分化,诱导成活率50％.以大新一号、将军、和平的新梢不同节位的芽点分生组织为试验材料,用配方为MS+4.4 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA +3％蔗糖的液体培养基进行茎尖克隆培养,每个新梢可切取5个外植体,培养7周后,3个品种均有外植体获得了绿色愈伤组织,中下节位分生组织的诱导成活率较高.     

纹瓣兰无菌播种快繁技术研究

以纹瓣兰[Cymbidium aloifolium (L. ) Sw]的种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株的途径进行繁殖.结果表明:种子在MS+6-BA 0. 2 mg/L+AC 1.0 g/L+蔗糖30 g/L培养基培养30 d左右,可形成原球茎;原球茎在1/2MS+6-BA 4 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L的培养基上增殖效果最好;原球茎接种于1/2MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L培养基上培养4周后,再转入1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AC 2.0 g/L+香蕉泥80 g/L的培养基上培养30 d,可诱导形成完整的植株.     

蝴蝶兰种子胚组织培养优化技术研究

以蝴蝶兰种子胚为外植体,探讨了不同采收期、不同培养基以及在培养基中添加多种附加物对原球茎形成和成苗的影响。结果表明:授粉后120~150 d的成熟种子胚适宜于组织培养,以花宝1号为基本培养基,附加椰子汁、香蕉、土豆汁能很好地诱导原球茎,诱导率达95%以上。添加有机附加物对不同花色的蝴蝶兰品种的培养效果不同,不添加植物生长调节剂也有利于种子萌发。用花多多4号3~4 g/L+Tryptone 2~2.5 g/L+1/3MS+6BA 1.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+CW 100 g/L+AC 0.5~1.0 g/L有利于原球体和幼苗的生长,成苗率达90%以上。     

三褶虾脊兰无菌播种快繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplicata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA 和 1.0 g/L AC）、附加物［椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥］及基本培养基（花宝1号、1/2花宝1号、MS和1/2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1/2花宝1号+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+200 mL/L CM+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基中培养150 d左右可形成原球茎,萌发率超过80%以上;诱导原球茎在1/2MS+100 mL/L CM+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4.5;原球茎接种于花宝1号+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上分化培养40 d后,再转入花宝1号+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+2.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上培养40 d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100.0%,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的三褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。