高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅲ.多种因素对胚性愈伤组织分化的影响

研究了多种因素对高羊茅胚性愈伤组织分化的影响。结果表明，BAP在高羊茅胚性愈伤组织分化中的作用要比KT大，但两者配合使用效果更佳，其适宜组合为2．0mg／L BAP＋0．5mg／LKT。在该细胞分裂素水平下，生长素NAA宜用0.5mg／L。胚性愈伤组织先在蔗糖浓度较高的分化培养基上预分化，以及经高渗预分化后的致密愈伤组织在琼脂浓度较高的分化培养基上分化，都能较好地促进愈伤组织植株再生，蔗糖和琼脂的适宜浓度分别为60和10g／L。分化培养基中添加脯氨酸导致总的愈伤组织再生率降低，但同时有减少白化苗再生的趋势。     

应用正交试验法优化玉米幼胚诱导胚性愈伤的研究

[目的]为提高不同玉米自交系幼胚胚性愈伤组织诱导提供参考。[方法]以玉米幼胚为外植体,对其进行诱导和继代,通过正交试验设计L16（4^5）,研究不同品种、蔗糖浓度、pH值、2,4-D浓度4个因素及水平对非胚性愈伤组织转化为胚性愈伤组织的影响。[结果]各因素对诱导胚性愈伤组织的影响次序是：品种〉pH值〉2,4-D浓度〉蔗糖浓度,其中品种和pH值均达到极显著水平。各品种产生胚性愈伤由易到难的顺序依次是：H99〉D988〉7922〉D598。诱导产生胚性愈伤组织的最优组合为A1B4C4D1,即玉米自交系H99、蔗糖浓度35.0 g/L、pH值5.8、2,4-D浓度1.0 mg/L。[结论]基因型是影响胚性愈伤组织产生的最主要因素,培养基酸碱度对胚性愈伤组织的产生影响较大。     

超甜玉米自交系幼胚高效成株系统的建立

以超甜玉米自交系S1、S2、S3和粤甜 3号等为材料 ,建立了超甜玉米高效再生系统。研究结果显示 ,超甜玉米基因型、幼胚的大小是影响胚性愈伤组织生成的主要因素 ,幼胚长度在0 5～ 1 2mm之间时 ,胚性愈伤组织的诱导频率最高。培养基中蔗糖浓度和细胞分裂素浓度对胚性愈伤组织的分化和小植株再生频率有重要影响 ,低浓度的蔗糖 (2 0 g/L)和 6 -BA (2mg/L)获得的再生频率较高。继代培养中ABA处理可使愈伤组织的再生频率提高 1 6 8倍 ,IBA浓度在 3 0mg/L ,可以明显提高小植株生根     

激素和蔗糖浓度对新农1号狗牙根出愈和分化的影响

以新农1号狗牙根成熟种子为外植体，通过种子划破处理、不同激素浓度组合对种子发芽及愈伤组织诱导，不同继代培养基对愈伤组织增殖和质量影响的研究，结果表明：与未切割的新农1号狗牙根种子相比，切割后的新农1号狗牙根种子发芽率和愈伤组织诱导率均有显著提高，种子发芽率平均提高21％，愈伤组织诱导率平均提高14％，出愈时间提早5～10d；愈伤组织诱导中，添加4．00mg／L 2，4-D＋1．00mg／L 6-BA的诱导培养基所形成的愈伤组织质量较优；继代改造培养基中添加6％蔗糖＋0．50mg／L 2，4-D有利于胚性愈伤组织的生长，其分化率达50％。     

(木奈)幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油（木奈）幼胚为材料，研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2，4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响，结果表明，长轴为5—7．9mm低温处理18h的幼胚，诱导胚性愈伤组织的效果最好；使用山梨醇（浓度为3％）为碳源、含氮量低的WPM培养基，胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基；幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2，4-D浓度为2．0mg／L，培养基中附加5．0mg／LAgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

木薯胚性愈伤组织离体保存条件的筛选

本试验以木薯品种GR3嫩枝侧芽诱导胚性愈伤组织为试材,研究不同植物生长调节剂浓度以及不同浓度蔗糖在不同温度条件下保存对胚性愈伤组织的形态指标及细胞活力进行限制性保存条件的筛选。结果表明,在20℃条件下,将木薯胚性愈伤组织保存在添加比久（B9）浓度均为6mg/L的保存培养基（含Picloram12mg/L＋蔗糖30g/L＋脂琼6.5g/L的GD培养基,pH值5.8）中,胚性愈伤质地及生长情况表现良好,保存效果最佳,继代时间延长至100d。     

高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究Ⅰ.多种因素对愈伤组织诱导的影响

以4个草坪型高羊茅品种的成熟种子为外植体,研究多种因素对愈伤组织诱导的影响.结果表明,增加2,4-D浓度能显著提高高羊茅成熟种子愈伤组织诱导率,而同时辅之以ABA则能获得更好的诱导效果,其最佳组合为8 mg,/L 2,4-D 2 mg/L ABA;种子灭菌后纵切或切胚可使出愈率成倍提高;采用MS基本培养基和在培养基中添加水解酪蛋白与谷氨酰胺也有助于提高出愈率;诱导培养基中添加BAP在多数情况下导致出愈率降低,但对改善愈伤组织质量有利.     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

大蒜体细胞胚胎发生诱导因素研究

通过研究不同质量浓度的 2 ,4 - D、维生素 B1 (VB1 )、水解酪蛋白 (CH )、腺嘌呤 (ADE)和蔗糖等激素及有机物对大蒜体细胞胚胎发生的单一或组合效应 ,结果表明 :0 .5 m g/L的 2 ,4 - D有利于体胚的发生和发育 ,梨形胚和棒状胚数目较多 ;VB1 质量浓度提高到 0 .5～ 2 .0 m g/L可促进体胚高频发生 ,较高质量浓度的 VB1 与 2 ,4 - D有明显的互作效应 ;15～ 30 g/kg的蔗糖能较好地促进大蒜体胚的发生 ,蔗糖含量超过 6 0 g/kg则抑制体胚发生和发育。 MS+2 ,4 - D 0 .5 mg/L +CH 5 0 0 mg/L +ADE 2 0 m g/L是胚性愈伤组织适宜的继代培养基。     

小麦幼胚离体培养再生体系的建立

选择不同小麦品种的幼胚作为试验材料,对影响其愈伤组织诱导及植株再生的因素进行分析。结果表明,小麦幼胚组培最适胚龄为12~14 d;在最适胚龄下,基因型对胚性愈伤组织的发生频率影响较大,对小麦幼胚培养出愈率的影响并不显著。在加有2,4-D 1 mg/L+KT 0.5 mg/L的基本培养基中进行继代培养,晋农232、晋农318和晋农234胚性愈伤组织的诱导率最高,分别达74.6%,70.3%和60.8%。此外,培养基中添加一定量的含氮有机物,也可提高胚性愈伤组织的诱导率,即晋农232添加300 mg/L Gln,晋农318添加500 mg/L Gln+300 mg/L CH后,其胚性愈伤组织的诱导率均有显著提高。分化培养中,添加ZT 3 mg/L和NAA 1 mg/L对晋农232、晋农318和晋农234等3个品种愈伤组织诱导分化的效果最好,其再分化率分别达到72.5%,57.5%和62.5%。生根培养中添加IAA 0.8 mg/L的1/2基本培养基可以诱导芽快速生壮根。     

草莓花药愈伤组织继代培养和不定芽发生研究

以草莓品种“硕香”和新品系“88-1 6-5”花药初代愈伤组织为材料 ,研究外源生长调节物质和 Ag NO3对愈伤组织继代培养和不定芽发生的影响。结果表明 :草莓花药初代愈伤组织不定芽分化培养基中添加 2 mg/L BA优于添加相同浓度的 ZT、CPPU和 KT。愈伤组织继代培养基中添加 1 mg/L CPPU对防止愈伤组织褐化及保持愈伤组织胚性和不定芽发生优于添加相同浓度的 BA、ZT和 KT。随着继代次数的增加 ,愈伤组织不定芽发生频率下降。分化培养基中添加5～ 1 5mg/L Ag NO3均可提高不定芽的分化率 ,以 8mg/L Ag NO3较为适宜。“硕香”和“88-1 6-5”在各处理中无明显差异     

籼稻成熟胚遗传转化体系影响因素的优化

以5个籼稻品种为研究材料,对影响籼稻成熟胚愈伤组织培养、愈伤组织与根癌农杆菌共培养的部分因素进行了研究。结果表明:适当提高硝态氮和铵态氮比例、1.0~2.5mg/L的2,4-D浓度有利于籼稻品种成熟胚愈伤组织的诱导;愈伤组织继代12d左右共培养效果较好;愈伤组织与农杆菌液共培养3d能获得50%以上的转化率。     

玉米再生体系建立及其影响因素的研究

以玉米骨干自交系K12、137、87-1和综3的幼胚为外植体,研究基因型、胚龄、继代次数、诱导（分化）培养基中激素浓度对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导、保持和植株分化的影响。结果表明,基因型是玉米幼胚培养能力的主要影响因子。中等大小（1.0～2.0 mm）的幼胚都具有较高的愈伤组织诱导率。2,4-D浓度对玉米幼胚的胚性愈伤组织诱导率有很大的影响,而且不同基因型的最大诱导率所需的2,4-D浓度也不相同。为防止2,4-D浓度过高引起无性系的变异,本试验确定的诱导培养基的2,4-D浓度为2.0 mg/L。继代培养基中1 mg/L的2,4-D对胚性愈伤组织诱导和保持起关键作用。最佳分化培养基为N6盐＋B5有机＋2.0 mg/L甘氨酸＋1 g/L CH＋1.0 mg/L 6-BA＋30 g/L蔗糖。     

萝卜诱导愈伤组织的影响因素

以萝卜种子为试材,研究了不同外植体、不同激素、不同激素浓度及继代培养对萝卜外植体形成愈伤组织的影响。结果表明:(1)诱导萝卜愈伤组织最好的外植体为子叶。(2)不同的生长素诱导效果不同,诱导效果为NAA>2,4-D>IBA;(3)萝卜子叶和下胚轴诱导愈伤组织的最佳初代培养基均为MS 3 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。(4)继代培养能促进愈伤组织的形成,子叶和下胚轴的最佳继代培养基分别为:MS 6 mg/L6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂和MS 4 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。     

小麦成熟胚诱导愈伤组织研究

以小麦成熟胚为外植体进行离体培养,研究不同预处理温度、消毒剂、胚的放置方式、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)浓度等因素对愈伤组织的质量和诱导率的影响.结果表明:低温预处理使愈伤组织的诱导率提高,但差别不显著;0.1%HgCl(2)(氯化汞)消毒处理比20%NaClO(次氯酸钠)处理效果要好;将成熟胚盾片向上放置可明显提高愈伤组织的诱导率;培养基添加2 mg/L 2,4-D时,2个小麦品种愈伤组织诱导率均高达80%,但随着2,4-D浓度的升高或降低,2个品种的诱导率均呈现下降趋势,不同品种间诱导率差异不大;在继代培养基中添加0.5 mg/L6-BA和0.3 mg/L ABA可以显著改善愈伤组织的质量,并且能提高胚性愈伤组织的产生率.     

黄瓜胚性愈伤组织的诱导保存和再生

【目的】对黄瓜胚性愈伤组织的诱导保存和再生进行研究,为黄瓜高频率遗传转化奠定基础。【方法】以欧洲温室型黄瓜自交系14-1子叶节为外植体,在MS培养基上附加1.5 mg/L 2,4-D,进行25 d的胚性愈伤组织诱导培养后,取胚性愈伤组织在添加30,60,90,100,110,120,130,140和150 g/L蔗糖及1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基进行继代培养,每30 d继代1次,观察胚性愈伤组织的褐变情况及胚性分化能力,并用电子天平在超净工作台中记录胚性愈伤组织质量的变化。继代培养60 d后,将保存的胚性愈伤组织和体细胞胚移至含1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上,待出现体细胞胚后移至MS培养基进行萌发,观察再生小植株的生长情况。【结果】将欧洲温室型黄瓜自交系14-1的子叶节,接种到附加1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上进行诱导培养后,子叶节一端的愈伤组织集中聚集于下胚轴处,之后有黄色胚性愈伤组织产生。在继代培养过程中,当培养基中添加的蔗糖为60～150 g/L时,胚性愈伤组织能保持胚性愈伤状态达60 d。之后将继代培养60 d后的胚性愈伤组织转接至附加1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上,在蔗糖质量浓度为60 g/L条件下保存的胚性愈伤组织可诱导出正常胚状体,且能形成健康小植株。【结论】由黄瓜子叶节诱导出的胚性愈伤组织可在MS+60 g/L蔗糖的培养基上保存达60 d,之后能正常萌发形成胚状体,进而形成正常小植株。     

长期继代对棉花胚性愈伤组织体胚发生能力及再生植株变异的影响

植物细胞在离体培养时，再生频率和再生植株的质量与培养时间密切相关。为探讨棉花胚性愈伤组织长期继代的可行性和适宜的继代策略，以川棉239胚性愈伤组织为材料，观察其在继代过程中颜色、质地、生长速度和体胚发生能力的变化，体胚及再生植株畸形变异的发生频率。结果表明，通过在MSB＋ET0．1mg/L＋KNO31．9g/L和MSB＋KT0．1mg/L IAA0.1mg/L两种培养基上交替培养并结合选择性继代，川棉239体细胞胚胎发生能力虽然可保持较长时间，但随着继代时间的延长，再生能力却逐渐下降，畸形胚发生频率和再生植株不育率逐渐升高。棉花胚性愈伤组织的继代时间不宜超过1．5年。     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

影响"扬稻6号"成熟胚愈伤组织再生植株的因子

以水稻中籼品种“扬稻6号”的成熟胚为外植体材料诱导愈伤组织发生,在愈伤组织继代培养阶段,研究山梨醇、甘露醇、脱落酸、蔗糖和麦芽糖对愈伤组织分化植株能力的影响作用,并探讨在愈伤组织诱导阶段添加6－苄基氨基嘌呤对后期愈伤组织分化植株能力的影响程度。试验结果表明,在愈伤组织继代培养基中添加30g/L山梨醇,3－5mg/L脱落酸和在愈伤组织诱导培养基中附加0.2mg/L 6-苄基氨基嘌呤有利于建立起较高频率的植株再生体系,愈伤组织经过继代培养后其植株再生的频率保持在50％左右。     

4种玉米自交系幼胚遗传再生体系的建立

选取4种玉米自交系H99、A188、7922和1322的幼胚作为外植体,接种于10种不同诱导培养基上,诱导愈伤组织并建立遗传再生体系,同时探讨了不同基因型、培养基种类、幼胚大小、蔗糖浓度、激素浓度和配比对愈伤组织诱导率的影响。结果表明:基因型对愈伤组织诱导率高低影响显著,4种基因型玉米幼胚在诱导培养基中均产生了愈伤组织,但继代培养后只有H99能诱导出胚性愈伤组织,诱导率为46.2%;对于不同基因型培养基诱导效果依次为N6MBMS;选择幼胚长度为1.5~2.0 mm、添加蔗糖浓度为30 g/L、2,4-D浓度为2.0 mg/L及Ag NO3浓度为10 mg/L时玉米愈伤组织诱导率最高且质量较好。