犬产气荚膜梭菌的分离和PCR检测方法的建立

从12头疑似产气荚膜梭菌感染的猝死警犬中分离获得了18株病原菌，经生化试验及毒素中和试验，确定为A型和C型产气荚膜梭菌。参考GenBank中登录的基因序列，设计合成了针对产气荚膜梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2共6对分型毒素基因的引物，对以前昆明地区分离的1株产气荚膜梭菌进行了PCR扩增，结果扩增出了与预期大小相同的6个基因片段，分别为233、196、324、446、567和665 bp。建立的PCR方法能同时用于产气荚膜梭菌鉴定和毒素分型，较细菌毒素检测方法快速，与细菌分离鉴定的结果一致。     

产气荚膜梭菌所致动物猝死症

产气荚膜梭状芽胞杆菌 (Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ)简称产气荚膜梭菌 ,又称魏氏梭菌 (Ｃｌｏｓｔｒｄｉｕｍｗｅｌｃｈｉｉ) ,根据该菌产生的α、β、ε、ι 4种主要毒素 ,将其分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ 5型。1 994年笔者报道了国外由Ａ、Ｂ、Ｃ型菌感染或混合感染所致仔猪坏死性肠炎的猝死症。近年国内也时有由产气荚膜梭菌Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ五型菌所致多种家畜猝死症的报道。现将产气荚膜梭菌所致疫病、所产毒素及近年国内由产气荚膜梭菌所致家畜猝死症概述如下。1　产气荚膜梭菌所致疫病及所产毒素类型毒素中和试验对…     

羊毒素型产气荚膜梭菌临床症状及病理变化

产气荚膜梭菌可引起绵羊、山羊和其他动物的肠道疾病,不同毒素型的产气荚膜梭菌可引起羊肠毒血症、羊猝狙、羊肠毒血症等。产气荚膜梭菌对宿主通常具有破坏性影响,根据发病羊群的以往病史、临床病变和剖检病例变化是羊产气荚膜梭菌病初步诊断的基础,而该病的确诊还需实验室检测后方可确认。确定羊产气荚膜梭菌病最广泛被接受的方法是从患有典型临床症状的病羊肠内容物检测到产气荚膜梭菌毒素。此外,大脑的组织病例理学检查对于由D型产气荚膜梭菌引起的疾病诊断中十分有用。本文对各种类型产气荚膜梭菌引起疾病的临床病变和组织病变进行综述。     

多重PCR检测产气荚膜梭菌方法的建立及其临床应用

产气荚膜梭菌是牛羊猝死和肠出血症的重要病原之一。本研究根据其常见的A、B、C、D四种菌型菌株编码α、β和ε毒素的保守序列,分别设计合成了针对这3种毒素的特异性引物,建立了多重PCR检测不同血清型产气荚膜梭菌的技术方法。通过对参考菌株的分型检测表明,该方法不仅快速、客观,而且具有良好的特异性和敏感性。对羔羊猝死症中分出的菌株进行检测,确定其为产气荚膜梭菌A型和D型混合感染;对产后母牛血痢病料中分离的菌株进行检测确定其为产气荚膜梭菌A型。     

犬A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的制备及免疫学评价

产气荚膜梭菌是引起犬猝死症的主要病原菌,目前临床上还没有预防犬猝死症的疫苗。本试验以分离自犬的A型产气荚膜梭菌为制苗菌株,首先对利用甲醛进行产气荚膜梭菌培养液脱毒的浓度和时间进行了优化,然后利用脱毒后的产气荚膜梭菌培养液对小鼠和犬进行免疫,并对不同佐剂(铝佐剂和油佐剂)和不同免疫途径(皮下注射和腹腔注射)的免疫效果进行评价。结果显示,产气荚膜梭菌灭活疫苗具有良好的免疫保护效果,免疫后小鼠体内可产生高水平的血清抗体,抗体效价最高可达6.25×104。产气荚膜梭菌铝胶灭活疫苗对犬具有良好的安全性,单次免疫(4mL/只)或2次免疫(2mL/只)均可产生良好的免疫保护效果(5/5)。结果表明,本试验制备的犬A型产气荚膜梭菌灭活疫苗可用于预防犬产气荚膜梭菌感染。     

D型产气荚膜梭菌ε毒素研究进展

D型产气荚膜梭菌常引起新生羔羊痢疾和山羊、牛等家畜的肠毒血症,致死性强,对畜牧业造成很大的危害.ε毒素是D型产气荚膜梭菌的主要致死性毒力因子和保护性抗原,从分子生物学的角度对该毒素的研究具有重要实际意义.论文主要对国内外关于D型产气荚膜梭菌ε毒素分子生物学结构与性质,ε毒素引起的家畜肠毒血症以及对其作用靶器官肾脏和脑组织破坏的致病机理进行了介绍,对国内外D型产气荚膜梭菌ε毒素预防措施进行了综述,为研究D型产气荚膜梭菌ε毒素结构与功能的关系以及预防治疗动物肠毒血症提供参考.     

一株致梅花鹿猝死症A型产气荚膜梭菌的分离与基因分型研究

对苏州某梅花鹿场 1头猝死梅花鹿进行了病原的分离与鉴定 ,在死亡鹿体内分离到 1株G+ 、无芽孢、有荚膜、粗大正直的杆菌。通过肠内容物毒素中和试验和多重PCR方法证明所分离到的细菌为A型产气荚膜梭菌。结合流行病学、临床症状和病理变化 ,证实A型产气荚膜梭菌为引起此例梅花鹿猝死症的病原     

山羊痘病毒贵州分离株P32基因的克隆及序列分析

山羊痘(goat pox)是由羊痘病毒属(capripox-virus)山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)引起的一种主要危害山羊的高度接触性传染病[1]。本试验应用PCR技术,从山羊痘病毒DNA中扩增P32基因,通过pMD18-T克隆载体转化到DH5α工程菌中,并进行重组质粒的鉴定,旨在探索山羊痘病毒贵州株与国     

一株C型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌,在一定条件下可引起多种严重疾病。从疑似山羊魏氏梭菌病例中分离到一株细菌,通过厌氧培养、显微镜镜检、分子生物学鉴定表明该分离菌为产气荚膜梭菌,使用药敏纸片法进行分离菌株药敏性试验研究,数据分析表明：分离菌对常见抗生素具有不同程度的耐药性,对头孢噻呋敏感性最高,对多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素等耐药,以期为山羊健康养殖提供技术参考。     

山羊梭菌类疾病的诊治体会

山羊梭菌类疾病主要包括C型产气荚膜梭菌（羊猝狙）、D型产气荚膜梭菌（羊肠毒血症）、B型产气荚膜梭菌（羔羊痢疾）和B型诺维氏梭菌（羊黑疫），对养羊业生产危害较为严重。这几种病原菌在羊舍普遍存在，如在粪便、尿液及污水中大量存在，特别是老养羊场（舍），卫生条件差、管理不到位，暴发该类疫病的机会更大，应高度重视。     

正安县山羊主要疫病血清抗体检测报告

为了解正安县山羊主要疫病的发展趋势,通过虎红平板凝集试验、正向间接血凝试验、酶联免疫吸附试验等方法对正安县引进山羊进行布鲁氏杆菌病、O型口蹄疫、AsiaI型口蹄疫、山羊传染性胸膜肺炎、山羊痘等主要疫病血清抗体的检测。结果表明,O型口蹄疫、AsiaI型口蹄疫和山羊痘免疫抗体阳性率分别为79．42％、81．18％和99．58％,未免疫的布鲁氏杆菌病、羊传染性胸膜肺炎的丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体未免疫抗体阳性率分别为0％、0％和3．81％。监测结果为山羊健康的引进、培育和扩繁提供了一些基础数据,对指导养羊生产有一定的意义。     

奶山羊羔羊山羊痘的病理学、血清学及分子生物学诊断

目的 确定内蒙古某规模化奶山羊养殖场部分引进羔羊发病死亡的原因,为该场加强重点疫病免疫防控提供科学依据。方法 对出现典型临床症状的发病羊只进行病理解剖学观察,无菌采集肺脏病变样本,制备病理组织切片;无菌采集发病羊只的血液制备血清,采用高敏荧光技术检测血清中的山羊痘病毒抗体;无菌采集发病羊只的肺组织、鼻拭子、眼拭子,利用PCR技术检测山羊痘病毒P32基因,对测序获得的序列进行BLAST比对并进行同源性分析。结果 剖检可见病羊口腔、鼻腔、喉头、气管黏膜有圆形疹痘;肺部明显水肿,表面存在红色疹痘,切开后呈不透明、灰白色胶冻样;瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃黏膜均出现疹痘。病理组织学检查可见肺泡红色深染,间质变宽,腔内存在脱落的上皮细胞,Ⅱ型肺泡上皮细胞增生,并化生为腺泡样状;支气管腔内存在大量的炎性细胞。发病山羊血清经高敏荧光技术检测,判定为山羊痘病毒抗体阳性。采集肺组织（GTPV-YP1）、鼻拭子（GTPV-YP2）、眼拭子（GTPV-YP3）样品各1份,3份样品经P32基因PCR检测均获得983 bp的扩增片段,与预期大小一致;GTPV-YP1、GTPV-YP2样品P32基因序列与山羊痘病毒中国分离株KC951854.1、Oman分离株 MN072621.1 P32基因的同源性为100%,GTPV-YP3与山羊痘病毒中国分离株EF514892.1、HM572329.1、JN596275.1、MG817382.1的同源性为99.0%。结论 经病理解剖学观察、病理组织学检查、血清学检测以及病原PCR鉴定,确定引起该场引进奶山羊羔羊发病的原因为山羊痘病毒感染。     

山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达与细胞凋亡的相关性

以贵州本地分离纯化的山羊痘病毒为试验材料,感染Vero细胞,通过台盼蓝、吖啶橙/溴乙锭荧光染色分析细胞的死亡及凋亡比例;经特异性PCR从山羊痘病毒基因组中分离出山羊痘病毒抗凋亡蛋白样基因,基因长531bp,含有完整的编码框,与绵羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的相似性为97%,因此确定为山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因。进一步研究山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因在Vero细胞中的表达,结果显示,病毒感染Vero细胞24h时没有检测到凋亡现象,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的mRNA水平最高;感染48h时,Vero细胞的凋亡率上升到13%,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量随之下降。结果表明,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量与Vero细胞的凋亡呈负相关,有助于病毒在细胞内的生存和侵染等过程。     

基于SNP芯片的云上黑山羊遗传结构分析

为从分子水平对云上黑山羊遗传结构做出评价,本研究以云上黑山羊核心群母羊108只(来自7个育种核心场、10个群体)、育种素材云岭黑山羊和努比山羊各11和14只、对照组波尔山羊10只为试验动物,用Illumina公司Iselect Goat60k芯片技术在全基因组范围内进行单核苷酸多态性(SNP)分析,并运用GenAlEx 6.5、Cervus 3.0、SNPRelate、Plink 1.07、Mega 4.0进行遗传多样性参数统计计算、主成分分析和系统进化树构建。试验获得143个样本在48 116个SNPs位点上的分型结果,其中波尔山羊10个样本单独聚集,与云上黑山羊、努比山羊、云岭黑山羊存在较大的遗传距离,较小的遗传一致度和较小的基因流,在聚类进化树中显示为一个独立分支,这些结果与波尔山羊实际遗传背景完全一致,显示出它在本研究中的对照组作用,同时证明本研究方法可行、结果可靠;云上黑山羊108个样本具有高度一致性,在聚类系统树中这些样本聚为一个大簇,而努比山羊(14个)和云岭黑山羊(11个)的样本各自聚为一簇;UPGMA进化树显示,云上黑山羊与努比山羊关系较近,与云岭黑山羊关系稍远,这与云上黑山羊育种导血方案结果相一致。云上黑山羊新品种在基因组水平上可与其育种素材明显区分,在基因组层面已具备独立品种特点。     

Development of a SYBR Green-based real-time quantitative polymerase chain reaction assay to detect enzootic nasal tumor virus in goats

Enzootic nasal adenocarcinoma is a contagious respiratory disease in goats that is caused by the enzootic nasal tumor virus 2 (ENTV-2). In order to increase the number of available detection methods for ENTV-2, we developed a SYBR Green real-time polymerase chain reaction (SGrPCR) assay that targets the gag gene of ENTV-2. The low limit of detection of the assay was 3.68 × 10¹ copies/μL, a hundredfold more sensitive than conventional PCR. The melt curve showed a single sharp melt peak at 83°C, which indicated that there was no non-specific amplification or primer dimer formation. The intra-assay and inter-assay coefficients of variation were 1.58% and 1.82%, respectively. There was no cross-reactivity with closely related goat viruses (i.e., orf virus, peste des petits ruminants virus, goatpox virus, foot-and-mouth disease virus) and endogenous retroviruses. In conclusion, the SGrPCR assay is specific for the gag gene of ENTV-2 and provides a rapid and sensitive approach for detecting ENTV-2 in clinical samples.     

四川5个山(绵)羊品种随机扩增多态DNA分析

本研究参阅文献挑选 80个随机引物 ,从中筛选出 3 0个重复性好的引物 ,对四川黑山羊、南江黄羊、北川白山羊、成都麻羊 4个山羊品种和藏绵羊进行RAPD分析 ,并进一步对 1 3只南江黄羊个体 ,1 8只黑山羊个体的基因组DNA进行PCR扩增。用Nei氏公式计算品种间的遗传距离 ,用UPGMA法构建树状聚类图。结果表明 :黑山羊与南江黄羊的遗传距离最小 ,亲缘关系较近 ;藏绵羊与各品种间的遗传距离都很大 ,亲缘关系远 ;RAPD技术可作为一种有效的分子标记用于山羊品种之间遗传亲缘关系的分析     

世界及我国奶山羊产业发展现状及趋势分析

近年来,世界山羊养殖数量持续增长,据联合国粮农组织(FAO)统计显示,2018年全球山羊养殖数量已超10.4亿只,其中奶山羊养殖数量超2.16亿只,约有90%以上的奶山羊和山羊奶产自亚洲和非洲。欧洲的奶山羊存栏和产奶量均在亚洲和非洲之后,但其单产水平远高于其他各大洲,在世界奶山羊每只平均年产奶量100 kg以上的国家中,前十位均为欧洲国家。我国奶山羊产业发展迅速,2018年我国奶山羊实际存栏约518万只,年产羊奶量约100万t,约占全国鲜奶产量的3.3%。本文对全球及我国奶山羊产业进行了纵向和横向比较,客观分析我国奶山羊产业的地位、发展现状以及未来发展趋势,旨在为我国奶山羊产业的发展提供参考。     

Persistent infections after natural transmission of bovine viral diarrhoea virus from cattle to goats and among goats

Bovine viral diarrhoea virus (BVDV) is an economically important pathogen of cattle worldwide. Infection of a pregnant animal may lead to persistent infection of the foetus and birth of a persistently infected (PI) calf that sheds the virus throughout its life. However, BVD viruses are not strictly species specific. BVDV has been isolated from many domesticated and wild ruminants. This is of practical importance as virus reservoirs in non-bovine hosts may hamper BVDV control in cattle. A goat given as a social companion to a BVDV PI calf gave birth to a PI goat kid. In order to test if goat to goat infections were possible, seronegative pregnant goats were exposed to the PI goat. In parallel, seronegative pregnant goats were kept together with the PI calf. Only the goat to goat transmission resulted in the birth of a next generation of BVDV PI kids whereas all goats kept together with the PI calf aborted. To our knowledge, this is the first report which shows that a PI goat cannot only transmit BVD virus to other goats but that such transmission may indeed lead to the birth of a second generation of PI goats. Genetic analyses indicated that establishment in the new host species may be associated with step-wise adaptations in the viral genome. Thus, goats have the potential to be a reservoir for BVDV. However, the PI goats showed growth retardation and anaemia and their survival under natural conditions remains questionable.     

利用mtDNA细胞色素b分析贵州山羊的系统发育

试验选取贵州山羊4个群体(共55只),设计引物对其mtDNA细胞色素b基因片段进行测序,测序结果与GenBank报道的8个山羊品种mtDNA细胞色素b基因进行比对分析。结果发现,在55只贵州山羊中有11个变异位点,其中转换10次,T/G颠换1次;10种单倍型中有7种单倍型为1个群体独享,3种单倍型为多个群体共享。4个山羊类群间存在较近的亲缘关系,既是独立的类群,其间也存在基因交流,其中贵州黑山羊和贵州麻羊的亲缘关系最近,与贵州白山羊的亲缘关系次之,与贵州小香羊的亲缘关系最远。从山羊品种间遗传距离构建的邻接树可见,贵州4个山羊类群均起源于镰刀状角羊骨羊。     

贵州省山羊源流产细菌调查及致病机理初探

为调查贵州省细菌性山羊流产疫病的主要原因,分析山羊源流产细菌对正常怀孕动物免疫平衡的影响,本试验采集贵州省6个地区(州、市)12个规模养羊场临床健康和发病流产山羊的胎儿、子宫和母羊的阴道棉拭子样本共计107份进行细菌分离和鉴定,采用药敏纸片琼脂扩散法对3种主要羊源分离菌进行20种抗生素的耐药性调查,并用羊源流产细菌建立BALB/c小鼠流产模型,通过ELISA方法对妊娠相关细胞因子和激素进行测定。结果显示,从采集的107份样本中共分离到13个属细菌共302株,其中发病流产山羊生殖器官中分离的细菌种类多于临床健康山羊;流产山羊生殖器官中分离的羊源细菌耐药率高于临床健康山羊细菌耐药率;3种主要羊源流产细菌埃希氏菌、葡萄球菌和链球菌均可引起怀孕BALB/c小鼠发生不同程度的流产,流产率为埃希氏菌>葡萄球菌>链球菌;胚胎吸收率为埃希氏菌>葡萄球菌>链球菌;与空白对照组相比,各试验组BALB/c小鼠血清中的IFN-γ、IL-2含量上升,而IL-4、IL-10和孕酮含量降低。结果表明,贵州省细菌性山羊流产的发生与山羊生殖器官细菌种类多少、耐药性高低有一定相关性,推测山羊源流产细菌可能通过影响怀孕山羊的主要妊娠相关细胞因子和激素的含量导致山羊流产。