EM对鲫鱼生长和血液生理指标的影响

将健康的当年鲫鱼400尾随机分为4组,每组两个重复,每个重复50尾,各组分别饲喂添加0%EM、2%EM、4%EM、6%EM的饵料,试验结束后,测定各组鱼的增重率和血液生理指标,分析在饲料中添加不同浓度的EM后对鲫鱼生长发育和血液生理指标的影响。试验结果显示,添加6%EM试验组鲫鱼的增重和血液生理指标效果最佳。     

两种水温条件下恩诺沙星在鲫鱼体内的药动学比较

为了研究水温对鲫鱼体内恩诺沙星药动学规律的影响,试验在20℃和25℃水温条件下将恩诺沙星灌入鲫鱼的前肠,于给药后0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,4,6,8,12,24,36,48,72小时分别采集血浆、肾脏和肝脏样品,以高效液相色谱法(HPLC)测定药物浓度,用药动学软件3P97处理药时数据.结果表明:在鲫鱼血浆中,两种水温条件下恩诺沙星的达峰时间和分布半衰期基本相同;20℃药时曲线下面积、消除半衰期明显大于25℃,而清除率明显小于25℃.在肾脏和肝脏中,20℃药物的达峰时间、分布半衰期、消除半衰期、药时曲线下面积均明显大于25℃,而清除率明显小于25℃.     

鲫鱼干扰素基因的克隆与序列分析

试验应用反转录-聚合酶链（RT—PCR）技术,从100μg／mL刀豆蛋白A（Con A）刺激培养24h后的鲫鱼血液淋巴细胞总RNA中扩增出鲫鱼干扰素基因并测序,然后进行序列分析。结果克隆得到的鲫鱼干扰素基因大小为558bp,编码186个氨基酸。将克隆得到的鲫鱼干扰素基因与GenBank中发表的斑马鱼、虹鳟鱼、鸡、小家鼠干扰素基因以及人的1干扰素基因进行比较,核苷酸同源性分别为98．7％、31．9％、26．3％、26．1％、29．2％,氨基酸序列同源性分别为96．2％、12．0％、6．5％、7．1％、4．8％。     

湖北乌羊血液生理指标的测定与分析

对湖北省通山县86只成年湖北乌羊的20项血液生理指标进行了测定,并比较分析了公母羊各项生理指标之间的差异。结果表明：白细胞总数17.99×109/L,淋巴细胞数7.30×109/L,单核细胞数1.53×109/L,粒细胞数8.60×109/L,血小板总数75.73×109/L,红细胞总数10.01×1012/L,血红蛋白含量85.64 g/L。其中,平均血红蛋白含量、平均红细胞体积、红细胞分布宽度、平均血小板体积和血小板分布宽度等5项指标在性别之间均差异极显著（P〈0.01）,血小板压积在性别间差异显著（P〈0.05）,其余14项血液生理指标在性别之间均没有显著性差异（P〉0.05）。     

鲫鱼营养生理研究进展

鲫鱼是我国重要的大宗淡水鱼类之一。本文就近年来国内外学者关于鲫鱼的营养生理的研究结果进行综述,以期为鲫鱼的营养研究及饲料配制提供科学参考。     

双峰驼红细胞免疫功能测定

应用红细胞Ｃ３ｂ受体（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲ）花环和红细胞免疫复合物（ＲＢＣ－ＩＣ）花环试验，对３３峰双峰驼红细胞免疫功能检测证实，双峰驼红细胞膜上具有Ｃ３ｂ受体，ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲ花环率为２．７１±１．７２％，ＲＢＣ－ＩＣ花环率为２．３３±１．７５％。说明双峰驼红细胞具有免疫功能，同时，红细胞免疫系统（ＲＣＩＳ）概念亦适用于双峰驼。     

四种抗菌药物对鲫鱼苗的急性毒性试验

在水温22℃~25℃条件下,选取来源一致、规格齐整、健康无病,体重4 g±0.2 g鲫鱼苗,用培氟沙星、氟苯尼考、甲砜霉素、痢菌净4种抗菌药对鲫鱼苗进行急性毒性试验。确定每种药物在不同时间对鲫鱼苗的半致死浓度(LC50),并求出4种药物相应的安全浓度(SC)。结果显示,4种药物对鲫鱼苗24 h的LC50分别为1 935.981、314.141、265.031、35.46 mg/L;48 h的LC50分别为1 863.621、154.231、177.05、130.53 mg/L;96 h的LC50分别为1 840.011、129.54、1 121.59、126.57 mg/L,SC分别为538.19、304.13、328.563、7.73 mg/L。表明培氟沙星、氟苯尼考和甲砜霉素对鲫鱼可安全使用,痢菌净毒性较大,应谨慎使用。     

鲫鱼鳃中沙门氏菌的分离与鉴定

应用常规细菌分离对西宁市某市场60份鲫鱼鳃样品进行了沙门氏菌的分离与鉴定。结果显示,在60份鲫鱼鳃样品中共检出沙门氏菌阳性菌株13份,阳性率21．7％（13／60）。表明：此批鲫鱼鳃样品污染沙门氏菌的情况比较严重,应该引起有关部门和消费者的重视。     

CODEHOP克隆鲫鱼HSP90基因及其同源性分析

本研究旨在分析热休克蛋白90(HSP90)基因的保守性,并为寻找新的HSP基因,探索HSP90的应用提供理论数据。利用CODEHOP设计简并引物,采用PCR方法克隆鲫鱼的HSP90序列,并将扩增的序列克隆到pMD18-T载体中构建克隆载体后进行测序,再将测序结果通过BLAST进行同源性比对并构建系统进化树。结果显示,鲫鱼与鲤鱼的同源性为99%;与斑马鱼的同源性为92%。本试验设计出的引物简并度较低,Tm值的修改较为灵活,产物特异性强,为研究鲫鱼的功能基因提供基础保障,并为热休克蛋白在进化上的保守性研究奠定理论基础。     

复方中草药添加剂饲喂鲫鱼试验

根据中草药药理设计制成添加剂, 并以两个剂量添加于饲料中, 与空白对照组及添加4 ×10 - 6 黄霉素组进行对比实验。结果显示, 各组鲫鱼种在摄食、活力、生长均表现出明显的差异。高剂量中药组的增重率比对照组提高了21-77% , 也高于黄霉素组。     

氯霉素在草鱼和复合四倍体异育银鲫体内的比较药代动力学

研究并比较了给草鱼和复合四倍体异育银鲫（简称高倍体鲫鱼）单次腹腔注射氯霉素１００ｍｇ／ｋｇ后的药代动力学特征。采用ＨＰＬＣ测定血液中氯霉素的浓度。试验期间水温为（２０±２）℃。结果表明,氯霉素在这２种鱼体内的处置过程相似,均可用带一级吸收的二室开放模型进行描述;药物从腹腔吸收迅速,给药后分别在０．９２ｈ和０．６３ｈ血中浓度达到高峰,无吸收时滞;在草鱼和高倍体鲫鱼体内药物的ｔ１２β相近,分别为１１．９ｈ和１１．１ｈ,但体清除率（ＣｌＢ）相差较大;氯霉素在高倍体鲫鱼体内比在草鱼体内有更强的亲组织性,总表观分布容积（Ｖｄ）分别为２．０７和１．２０Ｌ／ｋｇ。     

全鱼基因在鲫鱼体内的整合与转录

以鲤鱼金属硫蛋白启动子与大麻哈鱼生长激素基因重组的融合全鱼基因（ｃｏｍｍｏｎｃａｒｐｍｅｔａｌｏｔｈ－ｉｏｎｅｉｎｐｒｏｍｏｔｅｒａｎｄｔｒｏｕｔｓａｌｍｏｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅｇｅｎｅ，ｃＭＴｓＧＨ）为外源基因，通过显微注射法将其线性片段导入鲫鱼受精卵内，研究了其整合与转录效率。结果表明，全鱼基因在鲫鱼基因组中的整合率为３６．４％（１６／４４），对转基因鱼阳性的ＲＮＡ样本进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交检测，转录率为２５％（１／４）。由此认为，该全鱼基因可以作为转基因鱼研究和应用的外源基因。     

益力素及其它抗生素与酶制剂配伍对异育银鲫生产性能的影响

试验选300尾异育银鲫夏花(均重5g左右),随机分为5组,分别饲喂相同的基础日粮、并分别添加益力素、黄霉素、维吉尼亚霉素及益力素+复合酶、益力素+植酸酶日粮,饲养56d,结果表明:3种不同抗生素中以益力素添加组试验鱼增重率较好;在配伍添加组中以益力素与复合酶配伍组增重率最好,且差异显著(P<0.05),比添加益力素组提高了9%,其饲料系数下降了10%,但各组间饲料利用率差异不显著(P>0.05)。     

鲫腹水症病原菌分离鉴定及药敏试验

从河南新乡某养殖场患腹水症的鲫鱼体内分离纯化获得1株细菌,编号为CA1618,通过细菌形态学观察、Biolog微生物鉴定系统,进一步采用PCR方法扩增其16SrDNA序列分析。结果表明CA1618菌株为革兰阴性杆菌,利用葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、海藻糖等多种碳源,与Aeromonas sobria特征同源性为0.575、遗传距离为6.226;测序获得16SrDNA序列片段为1 363bp,与Aeromonas sobria序列同源性为99%~100%,构建系统发育树表明与模式菌株Aeromonas sobria ATCC43979T(GenBank登录号:X74683)亲缘关系最近,最终鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。CA1618菌株人工感染鲫鱼半数致死量(LD50)为1.55×10~7 CFU/mL,药敏试验显示对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢克肟、萘啶酸、诺氟沙星、复方新诺明、四环素、氯霉素等抗生素敏感。     

Detection and Analysis of Carp Edema Virus (CEV) in Farmed Carp and Koi

The carp edema virus (CEV) disease were caused by CEV, which may result in high losses in carp culture. In 2014, it had spread into China according to the report of the first CEV case confirmed in Beijing region. To investigate the epidemic status of CEV in farmed carps, select suitable method for CEV survey, and explore its pathogenic mechanism, from May to September in 2016, 13 samples were collected and detected CEV using Nest-PCR methods developed by Japanese researchers, and Nest-PCR methods and Real-time PCR method developed by UK researchers. The results showed that 3 koi samples and 2 common carp samples of CEV positive were found. Real-time PCR and Nest-PCR could be well used to detect CEV in koi samples, but Nest-PCR could not detect CEV well in common carp. In positive samples, there were no clinical signs and death in case 3 and case 10 of farmed fish, and case 3 harboured higher copy numbers of CEV-specific DNA than that of case 7, case 8 and case 13 with signs of disease. Based on the above information, surveillance programs need to carry out urgently to avoid further spread of CEV according to the epidemic status of CEV. And Real-time PCR method was more suitable for CEV survey than Nest-PCR method. In addition, the farmed carps did not always occurred CEV disease in optimum temperature when the farmed fish carried CEV or the CEV mass reproduction in fish body. Therefore, the environmental stress was the crucial factor leading to the occurrence of the CEV disease, avoiding environmental stress was an effective measure to reduce the occurrence of the CEV disease.     

养殖鲤和锦鲤中的鲤浮肿病毒检测与分析

鲤浮肿病毒（carp edema virus,CEV）是一种严重危害养殖鲤和锦鲤的病毒。2014年在北京地区确诊的首例鲤浮肿病意味着该病已进入中国。为调查CEV在养殖鲤、锦鲤中的流行现状,同时筛选适宜的CEV普查方法,探索其发病条件,试验于2016年5月至2016年9月共采集13个样品,采用日本学者建立的Nest-PCR法及英国学者研究的Nest-PCR法、Real-time PCR法进行CEV检测。结果发现,13个样品中共检测到5个CEV阳性,3个为锦鲤样品,2个为普通鲤或杂交鲤样品。Real-time PCR法检出所有阳性,日本的Nest-PCR法检出3个锦鲤阳性和1个普通鲤阳性,英国的Nest-PCR法仅检出3个锦鲤阳性。在阳性样品中,3号和10号样品的养殖鱼并未发病死亡,且3号样品鱼体内的病毒拷贝数高于有临床症状并出现死亡的7号、8号和13号样品。说明目前养殖鲤、锦鲤的CEV阳性率较高,亟需加强该病毒的监测、防控。英国学者建立的Real-time PCR法不会漏检,更适合用于中国CEV的监测普查。没有外界环境条件刺激,养殖鱼即使感染CEV或CEV在其体内增殖,也不一定发生鲤浮肿病。结合鲤浮肿病发病温度范围较宽,提示环境条件刺激才是导致该病发生的关键因素,避免环境刺激是降低该病发生的一个有效措施。     

鲤鱼鳍条细胞的原代培养

通过对鲤鱼鳍条细胞进行原代培养,摸索出最佳的培养条件。采用组织块培养法,取一小块鳍条组织在不同培养基、温度、pH、CO₂等培养条件下进行培养,对其生长状况进行观察。培养48 h可见组织块周围有细胞迁出,并形成生长晕,培养1周可形成单层细胞,主要由上皮样细胞和少量成纤维样细胞组成。本研究初步确立了鲤鱼的鳍条细胞培养条件为:培养基为M199,培养温度为25~27 ℃,pH为7.2~7.6,CO₂浓度为5%,原代培养血清浓度为15%~20%,连续培养12 d后可得到纯化的鳍条细胞。     

鲤鱼外周血白细胞TLR5M全长cDNA克隆及序列分析

本试验以鲤鱼TLR5M的EST序列为基础进行5'-RACE试验,获得了其cDNA的全长序列。结果表明,该序列共3182 bp,包含38 bp的5'端非编码区,486 bp的3'端非编码区,1个2658 bp的开放阅读框(ORF),共编码885个氨基酸。序列同源性比对结果表明,该序列与麦瑞加拉鲮鱼TLR5基因同源性高达84.46%。     

日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞和NK细胞活性研究

应用红细胞促淋巴细胞转化和促NK细胞活性试验,对不同生理发育时期日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞和NK细胞活性进行研究。结果表明：青年组日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞能力明显高于幼年兔和老年兔（P〈0．01）;老年组红细胞调控NK活性能力明显高于青年组和幼年组（P〈0．01）,青年组高于幼年组（P〈0．01）。日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞能力在青年时期达到了高峰．随后逐渐降低：而红细胞调控NK活性随年龄增长而显著增强,这提示老年兔的免疫活性细胞较多地处于预激活状态,并对刺激显示良好的免疫应答能力。