粪肠球菌和枯草芽孢杆菌的体外评价研究

测定了粪肠球菌(Enterococcus Faecalis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)对致病性大肠杆菌O54、霍乱沙门氏菌A72及正常菌嗜酸乳酸杆菌CICC6075生长的影响。结果表明,粪肠球菌和枯草芽孢杆菌均可较好的抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长;粪肠球菌对嗜酸乳酸杆菌起到较好的促生长作用;枯草芽孢杆菌与嗜酸乳酸杆菌混合培养的前35 h,对嗜酸乳酸杆菌有一定的抑制作用,但35 h以后则对其有较好的促生长作用。     

乳酸杆菌对湘黄鸡生长及肉质的影响研究

为了探讨乳酸杆菌对肉鸡肠道、生长性能及肉品质的影响,将体重相近的1日龄湘黄鸡40只随机分为4组,空白组和对照组饲喂基础日粮,不添加乳酸杆菌,试验1组和试验2组分别在基础日粮中添加0.02%和0.01%乳酸杆菌制剂,空白组不进行T-2毒素攻毒,其他组分别在试验16 d开始灌服T-2毒素(Sigma),连续15 d。试验结果表明:在攻毒后试验组湘黄鸡增重显著高于未添加乳酸杆菌的对照组,其他一些指标的测定数据也优于或显著优于对照组。乳酸杆菌对T-2毒素诱导的鸡肠道屏障功能损伤起到了一定的保护作用,并改善了湘黄鸡的增重与肉品质。     

2种乳酸杆菌肠道黏膜免疫调节作用的比较

【目的】比较嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)和植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)肠道黏膜免疫调节作用的差异。【方法】以C57BL/6小鼠为受试动物,分别灌胃嗜酸乳酸杆菌和植物乳酸杆菌7d后取材,采用流式细胞术、ELISA等方法,对脾脏和肠系膜淋巴结中T细胞亚群、结肠PP结中TLR2+和TLR4+细胞、结肠组织中IFN-γ和IL-4水平及小肠sIgA水平进行检测,明确2种乳酸杆菌对肠道黏膜的免疫调节作用。【结果】2种乳酸杆菌对小鼠体质量无显著影响。2种乳酸杆菌均可显著提高小鼠肠系膜淋巴结中CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例,且与嗜酸乳酸杆菌相比,植物乳酸杆菌更倾向于提高CD3+CD8+T细胞比例;而与对照组相比,二者对脾脏中CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例均无显著影响。2种乳酸杆菌均可极显著提高结肠PP结中TLR2+细胞比例,而对TLR4+细胞比例无显著影响。2种乳酸杆菌均可极显著提高结肠组织中IFN-γ水平,嗜酸乳酸杆菌还可极显著提高IL-4水平。2种乳酸杆菌均能显著提高肠道黏膜sIgA水平。【结论】2种乳酸杆菌均可提高结肠PP结中TLR2+细胞比例,嗜酸乳酸杆菌上调Th1和Th2型免疫反应,植物乳酸杆菌上调Th1型免疫反应。     

均匀设计法优化益生素菌种比例的研究

应用均匀设计法安排动物试验,以仔猪日增重、饲料采食量和腹泻指数作为指标优化4株乳酸杆菌在饲料添加剂中的比例.乳酸杆菌在日粮中的6个水平分别为:2.0×104,4.0×104,6.0×104,8.0×104,1.0×105,1.2×105,按6水平4因素均匀设计表安排动物试验,每个处理仔猪饲喂基础日粮加不同组合的乳酸杆菌制剂.复合乳酸杆菌制剂以0.1%的比例添加到日粮中,测定仔猪日增重、饲料采食量、饲料转化率、腹泻得分和腹泻次数.结果表明,4株乳酸杆菌对断奶仔猪的生长性能和腹泻有明显的互作效应.格氏乳酸杆菌在8.3×104CFU/g对防治腹泻的效果最好,嗜酸乳酸杆菌预防腹泻的效果随着浓度增高而逐渐增强.综合考虑不同菌种的作用以及仔猪断奶后不同阶段生长性能和断奶后腹泻的情况,4株乳酸杆菌在断奶仔猪日粮中的合理比例为每g:格氏乳酸杆菌,4.0×l04CFU;罗伊氏乳酸杆菌,6.0×104CFU;嗜酸乳酸杆菌,1.0×105CFU;发酵乳酸杆菌,4.0×104CFU.     

乳酸杆菌S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞的协同作用

设计3种黏附试验分别研究了嗜酸乳酸杆菌和S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞的影响。结果显示:在置换试验中,嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞没有影响;但在排斥试验和竞争试验中,嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白均对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞产生明显的协同作用,在排斥试验中嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白分别增加产肠毒素大肠杆菌的黏附数量95.23%±4.22%(P0.01)和352.30%±2.26%(P0.01),在竞争试验中分别增加389.06%±3.35%(P0.01)和55.57%±5.81%(P0.05);并且S-层蛋白在排斥试验中,对产肠毒素大肠杆菌的协同黏附作用大于竞争试验中的协同黏附作用。可见,乳酸杆菌对产肠毒素大肠杆菌的协同黏附作用关键在于S-层蛋白,S-层蛋白可能起到"连接桥"的作用。     

表达EPEC紧密素蛋白重组嗜酸乳酸杆菌的免疫效果检测

【目的】制备抗肠致病性大肠杆菌(EPEC)的重组嗜酸乳酸杆菌,并初步探索其免疫效果。【方法】采用DNAStar软件选取EPEC E2348/69的eae全基因中抗原性较高的984bp片段(编码328个氨基酸残基,命名为eae Int328)为目标序列,以EPEC E2348/69基因组为模板,PCR扩增eae Int328基因,构建重组表达载体pSIP409-eae Int328,电转化法获得相应的重组嗜酸乳酸杆菌,采用SppIP诱导重组菌表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白。以BALB/c雌性小鼠为受试动物,灌胃重组嗜酸乳酸杆菌15d后,再灌胃EPEC,第21天,取结肠PP结和肠内容物,15和21d称体质量,同时设PBS(对照)、EPEC和pSIP409空载体转化嗜酸乳酸杆菌处理。采用流式细胞术检测结肠PP结中的CD11c+DC、CD4+T、CD19+B细胞比例,采用ELISA检测肠内容物中的特异性sIgA水平。【结果】克隆得到了984bp的eae Int328基因,构建了重组质粒pSIP409-eae Int328,制备了相应的重组嗜酸乳酸杆菌,用SppIP诱导表达后,重组嗜酸乳酸杆菌表达了分子质量约为36ku的重组蛋白,该重组蛋白与eae单克隆抗体可发生特异性结合。与EPEC和pSIP409空载体转化嗜酸乳酸杆菌组相比,21d时,pSIP409重组嗜酸乳酸杆菌组小鼠体质量显著增加,且与PBS组小鼠无显著差异。该重组嗜酸乳酸杆菌可显著提高BALB/c小鼠结肠PP结中的CD19+B细胞比例,极显著提高结肠PP结中的CD11c+DC和CD4+T细胞比例,使肠道黏膜产生针对EPEC的特异性sIgA。【结论】pSIP409-eae Int328重组嗜酸乳酸杆菌通过CD11c+DC的介导,促进CD4+T细胞数量增加,进而诱导B细胞活化产生针对EPEC的特异性sIgA,进而对小鼠EPEC的急性感染发挥作用。     

乳酸杆菌和芽孢杆菌对育成鸡生产性能的影响

把乳酸杆菌和芽孢杆菌按一定比例混合制成混合制剂饲喂育成鸡，于7d后测定其周增重率和抗病能力。结果表明，饲喂混合制剂后效果明显，不仅提高了育成鸡的周增重率、抗病能力，还提高了饲料的转化率。     

均匀设计法优化益生素菌种比例的研究

应用均匀设计法安排动物试验,以仔猪日增重、饲料采食量和腹泻指数作为指标优化4株乳酸杆菌在饲料添加剂中的比例。乳酸杆菌在日粮中的6个水平分别为: 2. 0×104, 4. 0×104, 6. 0×104, 8. 0×104, 1. 0×105, 1. 2×105,按6水平4因素均匀设计表安排动物试验,每个处理仔猪饲喂基础日粮加不同组合的乳酸杆菌制剂。复合乳酸杆菌制剂以0. 1%的比例添加到日粮中,测定仔猪日增重、饲料采食量、饲料转化率、腹泻得分和腹泻次数。结果表明, 4株乳酸杆菌对断奶仔猪的生长性能和腹泻有明显的互作效应。格氏乳酸杆菌在8. 3×104 CFU/g对防治腹泻的效果最好,嗜酸乳酸杆菌预防腹泻的效果随着浓度增高而逐渐增强。综合考虑不同菌种的作用以及仔猪断奶后不同阶段生长性能和断奶后腹泻的情况, 4株乳酸杆菌在断奶仔猪日粮中的合理比例为每g:格氏乳酸杆菌, 4. 0×104CFU;罗伊氏乳酸杆菌, 6. 0×104 CFU;嗜酸乳酸杆菌, 1. 0×105 CFU;发酵乳酸杆菌, 4. 0×104 CFU。     

均匀设计法优化益生素菌种比例的研究

本试验应用均匀设计法安排动物试验,以仔猪日增重、饲料采食量和腹泻指数作为指标优化4株乳酸杆菌在饲料添加剂中的比例。乳酸杆菌在日粮中的6个水平分别为: 2. 0×104、4. 0×104、6. 0×104、8. 0×104、1. 0×105、1. 2×105,按六水平四因素均匀设计表安排动物试验,每个处理仔猪饲喂基础日粮加不同组合的乳酸杆菌制剂。复合乳酸杆菌制剂以0. 1%的比例添加到日粮中,测定仔猪日增重、饲料采食量、饲料转化率、腹泻得分和腹泻次数。结果表明,四株乳酸杆菌对断奶仔猪的生长性能和腹泻有明显的互作效应。格氏乳酸杆菌在8. 3×104 CFU/g对防治腹泻的效果最好,嗜酸乳酸杆菌预防腹泻的效果随着浓度增高而逐渐增强。综合考虑不同菌种的作用以及仔猪断奶后不同阶段生长性能和断奶后腹泻的情况, 4株乳酸杆菌在断奶仔猪日粮中的合理比例为每克:格氏乳酸杆菌4. 0×104CFU;罗伊氏乳酸杆菌6. 0×104 CFU;嗜酸乳酸杆菌1. 0×105CFU;发酵乳酸杆菌4. 0×104 CFU。     

纳米载铜蒙脱石体外对三种水产病原菌及两种肠道有益菌杀菌作用

采用抗菌材料纳米载铜蒙脱石于不同浓度、不同温度、不同作用时间,分别对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌(水产病原菌)及嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌(肠道有益菌)进行杀菌作用比较.结果表明:随浓度增加,纳米载铜蒙脱石对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和副溶血弧菌的杀菌效果不断增强;而对于枯草芽孢杆菌和嗜酸乳酸杆菌,杀菌作用虽有增加,但增加幅度较小.此外,不同温度,杀菌率不同,并随着时间的延长而增加.在30 ℃下,Cu2+-MMT对细菌的杀菌性能优于4 ℃.在30 ℃下培养嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌、嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌12 h,杀菌率分别为100%、100%、100%、24.9%和25.6%.而在4 ℃培养24 h后,其杀菌率分别为83.9%、84.8%、84.6%、20.9%和21.4%.     

早期限饲开始日龄对肉仔鸡生产性能和胴体品质的影响

研究了早期限饲开始日龄对肉仔鸡生产性能和胴体品质的影响.采用单因子试验设计,选用1日龄健康AA肉仔鸡240只,随机分为4个处理,每处理设3个重复,每重复20只鸡,其中1个处理为对照组,其余为限饲组.限饲组在非限饲期及对照组肉仔鸡均为自由采食和饮水.3个限饲组的限饲开始日龄依次为6、9和12日,限饲强度为对照组前一天采食量的80%,限饲时间为7 d.研究结果表明:早期限饲可显著降低肉仔鸡21日龄体重(P＜0.05),但对42日龄体重无显著影响(P＞0.05);早期限饲对肉仔鸡全期的平均日采食量、日增重及饲料转化率无显著影响(P＞0.05),但早期限饲有降低肉仔鸡全期平均日采食量、日增重及饲料转化率的趋势;早期限饲町极显著降低肉仔鸡1～21日龄的平均日采食量(P＜0.01)及屁著降低日增重(P＜0.05),而6日龄开始限饲则显著降低了肉仔鸡1～21日龄的饲料转化率(P＜0.05);早期限饲对肉仔鸡22～42日龄的平均日采食量、日增重及饲料转化率无显著影响(P＞0.05).早期限饲开始日龄对肉仔鸡胴体性能指标无显著影响(P＞0.05),但6、9日龄开始限饲的试验组42日龄体重已经超过对照组,表明6、9日龄开始限饲的肉仔鸡在42日龄时达到完全补偿生长.以上结果表明,以9日龄开始限饲效果较好.     

间歇光照对肉仔鸡免疫器官和部分免疫指标的影响

[目的]探讨间歇光照对肉鸡免疫机能的影响。[方法]选取1日龄健康的240羽AA＋肉仔鸡,随机分为对照组（C）、光照1组（L1）和光照2组（L2）,于7～30 d期间对3个试验组分别采取24L∶0D、22L∶2D和20L∶4D的间歇光照措施,30 d后均恢复为连续光照,并于14、21、28、35、42 d观测各试验组肉仔鸡血液中免疫参数的变化,于14、28、35、42 d测定各组的免疫器官指数。[结果]在14～42 d观测期间,间歇光照L1和L2组可提高肉仔鸡的总蛋白和白蛋白水平及脾脏和法氏囊指数,但仅L2组的白蛋白于21和35 d极显著高于C组（P〈0.01）,其余各指标值与C组间均无显著差异（P〉0.05）。L1和L2组的球蛋白值和ND效价与C组间均无显著差异（P〉0.05）。[结论]采用22L∶2D和20L∶4D的间歇光照措施对肉仔鸡的免疫功能具有一定的促进作用。     

一定体重时略阳鸡与肉鸡体脂形成的比较

在一定生理学年龄下测定并比较了白羽略阳鸡 (WL)与现代肉鸡 Arbor Acres(AA)的产肉性能和体脂沉积能力。结果表明 ,达 1.8kg体重时 ,WL 的胸肉量较低 ,腿肉量较高 ,腹脂量较低 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;上市屠宰日龄平均为 132 d,约是 AA(43d)的 3倍多 ;WL 腹脂垫中脂肪细胞数量较多 ,但体积显著较小 ;杂交在显著提高肉鸡早期生长速度的同时 ,也使肉鸡肥度明显提高 ;高蛋白日粮能显著地降低腹脂量及肌肉中脂质含量 ,并存在明显的遗传与日粮互作效应     

不同水平甜菜碱和蛋氨酸对肉鸡生产性能的影响

研究了肉鸡日粮中含不同水平甜菜碱和蛋氨酸组合对肉鸡采食量、增重和胴体性状的影响。试验选用AA肉仔鸡504只,采用单因子试验设计,随机分为7组,每组72只,试验4次重复。分别饲喂对照日粮、不同蛋氨酸和甜菜碱水平组合处理日粮。试验结果未发现甜菜碱对蛋氨酸有替代作用,但不加蛋氨酸或仅加0．05％的甜菜碱导致单位增重的耗料量增高。甜菜碱对蛋氨酸的替代作用可能会受到饲养条件、日粮背景和动物对象等因素影响。     

添加乳精和嗜酸性乳酸杆菌对鸡肠炎沙门氏菌感染的防治效果

单独使用乳糖以及联合使用乳糖和嗜酸性乳酸杆菌均能显著地减少雏鸡盲肠中的肠炎沙门氏菌数（P<0．05）。联合使用乳糖和乳酸杆菌的效果比单独使用乳糖的效果好（P<0.05）。单独使用嗜酸性乳酸杆菌并不能显著地减少盲肠中的沙门氏菌数。乳糖和乳酸杆菌单独或同时使用对雏鸡肝、脾中肠炎沙门氏菌的分离率无显著影响。     

寡糖·柠檬酸及中药联合应用对肉鸡生产性能和免疫机能的影响

[目的]为了避免使用抗生素而使机体内正常菌群区系遭到破坏、免疫机能降低、药物残留、使细菌产生耐药性等副作用,研发替代抗生素的饲料添加剂。[方法]研究将寡糖、柠檬酸及中药联合应用对肉鸡生产性能和免疫机能的影响,测定初、中、后期平均增重、饲料转化率,检测了免疫功能。[结果]结果表明:在日粮中添加0.2%寡果糖、0.1%柠檬酸、0.2%中药对提高肉鸡的生产性能,促进免疫器官的生长发育,提高机体的细胞免疫机能的作用最明显。[结论]该研究为替代抗生素的无公害饲料添加剂的研发提供了参考。     

The Change of Plasma very Low Density Lipoprotein Concentration Pre-orPost-Feeding and in Conrrelation with Body Fatness Traits in Broiler Chickens

Blood samples were taken from birds,from a commercial line of broiler chicken,being in a fully fed state and in fasting state for 2,4,6 hours respectively at 49d of age and plasma very low density lipoprotein (VLDL) concentration was measured with turbidimetric assay.The experiment results showed that the variation coefficients of plasma VLDL concentration mersured at four different times were 58.11%,74.39%,69.70%,47.83%,respectively for male broilers,and 41.82%,60.87%,59.26%,50.0% for female broilers respectively.Plasma VLDL concentration decreased with the fasting time.There was a significant positive phenotypic correlation between abdominal fat weight,percentage of abdominal fat and plasma VLDL concentration for the birds being in fully feeding state,and the correlation decreased or no longer existed for the bired being in fasting state.The conclusion was that for practically application of plasma VLDL content selected in broiler chicken breeding,blood samples should be collected from birds being in feeding state.     

不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响

 【目的】研究不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响。【方法】选用健康情况良好1日龄AA肉公鸡180只,随机分为4组,每组5个重复,每重复9只。设定不同免疫应激模型,为无免疫组即对照组（no vaccine,NV）,常规免疫组（conventional vaccine,CV）,以及在常规免疫基础上注射细菌脂多糖的免疫亢进组（LPS）和环磷酰胺的免疫抑制组（CYP）。采用 CD3/CD4/CD8 三色流式细胞术、MTT法检测肉鸡免疫状态和非免疫状态下外周血中 T 淋巴细胞及其亚群的变化。【结果】与NV组相比,肉仔鸡的体增重和采食量均显著降低LPS组和CYP组（P＜0.05）,各处理料重比无显著差异（P＞0.05）,NV组与CV 组生产性能指标无显著差异（P＞0.05）,各日龄处理间血清TP、GLU和CHLO含量均无显著差异（P＞0.05）。第21和35天,LPS组和CYP组血清ALB含量显著低于CV组和NV组（P＜0.05）;第21 天,LPS组血清α-AGP和 BUN含量显著低于NV组（P＜0.05）,CPY和LPS均抑制T、B淋巴细胞增殖,LPS组CD4+/CD8+T细胞百分比显著低于NV组（P＜0.05）。【结论】未进行免疫肉鸡可维持机体正常的生长性能和细胞免疫稳态,LPS和CYP的刺激可降低肉鸡采食量和体增重;随日龄增加肉鸡对CYP刺激的耐受性有所上升,LPS刺激可增强肉鸡细胞免疫应答反应。     

In Vitro Assessment of Probiotic Potential of Lactobacillus acidophilus and Antagonistic Activity Against Escherichia coli O157:H7

The antagonistic activity of Lactobacillus acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.0902, KLDS1.1003 and NCFM against Escherichia coli O157: H7 were investigated in this study. The culture supernatants of all the L. acidophilus stains showed high bacteriostatic activities against E. coli O157: H7 and the bacteriostatic substances of their Cell-Free Supernatants (CFS) were preliminarily determined from organic acids. The bacteriostatic activity from CFS or viable L. acidophilus against E. coli O157: H7 was also assessed by using co-incubation methods, CFS had high bactericidal activity against E. coli O157: H7, no viable E. coli O157: H7 was detected when 5×107 cfu of E. coli O157: H7 was added to 5 mL of CFS and incubated at 37℃ for 2 h. However, L. acidophilus themselves had no bacteriostatic activity after directly contacted with E. coli O157: H7. The inhibition E. coli O157: H7 adhesion and colonization of L. acidophilus were also investigated based on competition, exclusion and displacement assays. L. acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.1003 and NCFM strains were effective to displace E. coli O157: H7 from a Caco-2 cell layer in competition and exclusion assays. However, in displacement assay, all of the strains showed no significant antagonistic activities. Meanwhile, the probiotic potential of L. acidophilus strains was investigated based on adhesion assay to Caco-2 cells and anti-inflammatory effects by IL-8 produced in Caco-2 cells. The adhesion ability and anti-inflammatory effects of L. acidophilus strains showed a strain-dependent manner. In general,L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM showed better probiotic potential than KLDS1.0902 and KLDS1.1003. Thus, the use of L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM to prevent or treat of diseases associated induced E. coli O157: H7 in vivo was suggested.     

Effect of Different Oligosaccharides on Immunity, and Cecal Microflora in Broilers

One hundred and forty-four Avin broilers (1 d old) were randomly divided into six treatments, with three replicates of eight birds each to investigate the effect of different oligosaccharides on index of immune organ, cecal weight and microflora in broilers. The control group (Group Ⅰ) was fed with corn-soybean meal as basal diet, and the trial groups (group Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ and Ⅵ ) were fed with basal diet plus 0.1% manoligosaccharides (MOS), 0.3% soybean-oligosaccharides (SBOS), 0.3% fructooligosaccharides (FOS), 0.3% α -glucooligosaccharides(α -GOS) and 0.03% chlortetracycline (CTC), respectively. The results showed that oligosaccharides supplementation significantly (P＜0.05) increased bifidobacteria concentration ofyoung broilers and did not affect on bifidobacteria or escherichia coli concentration of the birds ( P ＞0.05). Cecal weights of 21 d old broilers fed with FOS and α -GOS were significantly (P ＜0.05) increased, higher than those with MOS and SBOS, but addition of oligosaccharides had no effect on the birds. The effect of oligosaccharides on the cecal length was the same as on the cecal weights. Oligosaccharides supplement did not affect on indexes of immune organs.