红螯光壳螯虾细胞自噬过程中自噬体与微管相互作用

昆虫方面研究提示自噬在病毒侵染增殖中发挥了重要作用,而虾类自噬研究报道极少,了解虾类细胞自噬将为虾病害免疫研究开辟新的思路。自噬相关蛋白LC3是自噬过程的标志性蛋白,存在于自噬体膜上,前期生物信息学分析发现,红螯光壳螯虾自噬相关蛋白LC3(CqLC3)和微管蛋白α-tubulin (Cqα-tubulin)具有互作关系。为深入揭示红螯光壳螯虾细胞自噬体的运输途径,本实验通过体外重组构建了蛋白表达载体pET-HISCqLC3和pET-GST-Cqα-tubulin,并诱导表达,利用亲和层析法分别纯化获得HIS和GST融合表达蛋白HIS-CqLC3和GST-Cqα-tubulin,利用GST pull-down实验验证发现,CqLC3与Cqα-tubulin存在相互作用。微管抑制剂长春新碱解聚微管后,利用MDC染色法检测自噬体发现,红螯光壳螯虾细胞微管解聚破坏后自噬体积累增多,细胞不能正常完成自噬反应,因此可知,红螯光壳螯虾细胞自噬体可通过CqLC3与微管相互作用,微管在红螯光壳螯虾细胞自噬过程中对自噬体的运输具有重要作用。本文首次揭示了虾类细胞自噬反应中自噬体的运输途径,研究结果为虾类细胞自噬的研究奠定了基础。     

水产生物病害及防治

021436海水鱼感染新副变形虫引发的鳃病=Gill disease of marine fish eaused by infee-tion withN匆介之ramoe撇户脚口gu心ensi:[刊,英]彻unday BL,21化雌D,FindlayV//J .Fish Dis.一2001,24(9)一497一507 澳大利亚塔什玛尼亚、爱尔兰、法国、智利、北美(华盛顿州和加利福尼亚)和西班牙等地海水养殖的继缚鱼类、大菱虾(ScoPhthalmus~mus L.)、舌齿妒(Dicentrarchu:勿b~L.)和尖吻重牙纲DIPI心“sP“n乙azZD Cetti都报道患有由新副变形虫N初加ramoeba Pemaqu诚ns￡:引起的阿米巴鳃病(AGD)。在所有蛙蹲鱼中,大西洋蛙与虹蹲是最易…     

水产生物病害及防治

030781对不同适盐性种类采用控制剂量丝囊霉诱发流行性溃疡综合症=L绝vel叩mentof a methed for repr团ueing epi力ootie uleera-tive syndrome using controlled dosesofAPhanom,留5 in二dans in sPeeies with differ-ent salinityr叩irements[刊,英]Zt、t叩ES,Munday BL// Aquae.一2002,209(1/4)一35一47 用控制剂量的丝囊霉游动抱子进行肌肉内注射(剂量为65一85个抱子/尾),诱发毛足妒和嬉鱼感染产生流行性溃疡综合症(EUs)的典型病灶。在感染后0一sd这两种鱼均出现慢性的肉芽肿反应和发炎细胞,主要是巨噬细胞和淋巴细胞,渗人到肌肉…     

水产生物病害及防治

040341用白斑综合症病毒试验感染斑节对 虾仔虾和早期后仔虾未表现明显的死亡= L刁rvae and early卯st一larvae of Penaeus mon- 心。n(FabrieiuS)experimentally infeeted with whites卯t syndrome virus(WSSV) show no Signifieant mortality[刊,英]/Y6- ganandhanK,Narayanan RB,Sahul Hallleed AS// J .Fish Dis.一2003,26 (7)一385一391 用不同发育阶段的斑节对虾Penaeus mon〔don,如无节幼体、蚤状幼体、糠虾、 早期后仔虾(PLI一10)、后期后仔虾 (PLn一20)及幼虾测试了白斑综合症 (WSSV)的致病性。通过浸浴和口服方式 进…     

日本沼虾细胞自噬基因ATG13和ATG101的克隆及其低氧胁迫下表达分析

为研究自噬相关基因(autophagy-related genes, ATG) ATG13和ATG101在甲壳动物应答低氧胁迫过程中的调节作用,实验采用RACE PCR技术通过克隆测序和基因序列拼接,首次克隆了日本沼虾的细胞自噬基因ATG13和ATG101的全长cDNA序列,日本沼虾的细胞自噬基因ATG13 cDNA全长2 043 bp (NCBI登录号为MT084347),包括211 bp的5′末端非翻译区(untranslated region,UTR),449 bp的3′UTR和1 383 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),开放阅读框编码460个氨基酸;ATG101 cDNA全长1 051 bp(NCBI登录号为MT084348),包括18 bp的5′末端非翻译区,373 bp的3′UTR和660 bp的开放阅读框,开放阅读框编码219个氨基酸。通过软件和生物信息网站对其序列进行分析,氨基酸相似度比对显示,日本沼虾的细胞自噬基因ATG13富含高度保守的LC3作用结构域(LIR);系统进化树分析显示,日本沼虾的细胞自噬基因ATG13与凡纳滨对虾ATG13具有最近的亲缘关系;通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)实验分析发现,日本沼虾ATG13和ATG101在其肝胰腺和脑组织表达量较高,而在肌肉中表达量较低;利用qRT-PCR追踪其在肝胰腺组织低氧胁迫过程中出现的表达差异情况,结果显示,实验组日本沼虾在低氧胁迫6和24 h时,其细胞自噬基因ATG13和ATG101表达量显著高于对照组,而在复氧12 h后,实验组与对照组的ATG13和ATG101表达量差异不显著;Western blot分析结果显示,日本沼虾ATG13和ATG101表达丰度基本与基因表达模式相似。透射电镜分析结果显示,在低氧胁迫6和24 h后,肝胰腺组织中的溶酶体开始出现自噬空泡,表明急性低氧胁迫会诱导自噬体的形成,本研究结果可为了解日本沼虾应对低氧胁迫下的调控机制提供理论参考。     

总论

020001虾头粉会传播疾病吗?二Shrimphead meal一does it spread disease?[刊,英〕FI铭elT// Asian.相ua。.Mag.一2001,(4)一30一31· 虾饲料中使用虾头粉可能引起病毒病传播的顾虑时有所闻。文章讨论了虾头粉应用的问题。在泰国进行的研究表明,虾头粉的加工温度和干燥条件以及虾料制粒温度足以使可能存在的白斑病毒或两头病毒失去活性。图2参6(范葵红)020002。鱼类营养研究在水产养殖中的应用:·台湾试验=A即lieations of fishn、ltritionreseareh in aquaeulture:the TaiwanexPeri-e!lee[刊,英〕/S hiau SY// Aquae.Res.一2001,32(8)…     

虾肝肠胞虫感染对脊尾白虾肠道菌群的影响

为探究虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)感染对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)肠道菌群的影响,本研究基于16S rRNA基因的测序结果,对感染EHP的脊尾白虾肠道菌群进行了分析。结果显示,感染虾与健康虾肠道菌群差异较大,且其肠道菌群结构多样性显著低于健康虾。研究发现,病虾中归属于变形菌门(Proteobacteria)的脱硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)、弧菌科(Vibrionaceae)、未分类蓝细菌科(unidentified Cyanobacteria)、支原体科(Mycoplasmataceae)和未分类α变形菌科(unidentified Alphaproteobacteria)为优势菌,而归属于厚壁菌门(Firmicutes)的乳杆菌科(Lactobacillaceae)、双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)、芽孢杆菌科(Bacillaceae)及噬几丁质杆菌科(Chitinophagaceae)细菌在健康虾中占据优势地位。EHP侵蚀导致感染虾肠道内潜在致病菌显著增加(P<0.05),增加了其他疾病的易感性。此外,通过Tax4Fun功能预测,发现感染虾肠道菌群主要用于新陈代谢,从而抵抗EHP侵染,维持机体正常功能;健康虾肠道菌群则多用于个体生长与环境信息处理,进而保证生长与存活。本研究从虾肠道菌群结构方面入手,进一步探究了EHP感染对脊尾白虾肠道菌群的影响,以期为EHP的防治提供帮助。     

水产资源与捕捞技术

030033西岩虾的生长状态,养虾技术以及管理控制对增加亲虾产卵量的影响=Thestatus of the western rock lobster,厂hnulirus戈赐刀us,fishery and the effectiveness of man-agement controls in inereasi雌the egg predue-tion of the stoCk[刊,英]门日allN,ChubbC// Mar.Freshw.Res.一2001,52(8)一1057一1067 采用了一种控制手段来提高西岩虾亲虾产卵量到20世纪70年代末期至20世纪80年代早期的水平。结果是雌龙虾(那些长有产卵的刚毛)和无刺雌龙虾的产卵量比所需要的最大标准限量还多;经过n月份到1月份间的迁移期,最低标准壳长(CL)增…     

流式细胞术在克氏原螯虾血细胞的分类、活性和免疫功能研究中的应用

应用流式细胞术(FCM)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血细胞的分类、活性和免疫功能进行了研究。结果显示:血细胞可分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞三个亚群,组成比例分别为(26.25±5.29)%、(51.44±7.02)%和(11.20±1.82)%;螯虾血细胞的平均总凋亡率约为3.12%;血细胞对荧光大肠杆菌的吞噬活力显著(P<0.05)高于荧光微球,吞噬率分别为17.04%和14.57%;血细胞在自然生理状态下含有一定量的活性氧,其在两类颗粒细胞的含量显著(P<0.05)高于透明细胞,在大颗粒细胞中最高。结果表明,FCM能较好地应用于虾类的血细胞分类和功能研究。     

水产生物病害及防治

030091虹缚吞噬细胞的呼吸释放活动受到抗菌素药类的调控=Respiratovy burst activi-ry of rainbow帅ut(O二丛纳认us mykiss)Phagcytes 15 modulated by antimierobial drugs[刊,英]/L undenT,Lilius E-M,BylundG// Aquae.一2002,207(3拜)一203一212 从虹蹲血液和头肾分离出吞噬细胞,进行活体和离体试验,研究5种不同的抗菌药类对吞噬细胞化学荧光(cL)反应的影响。以鲁米诺和鲁西日宁作为底物,用被吞噬的酵母聚糖来模仿呼吸释放活动。试验用的药物有奥索利酸(OA),土霉素(OTC),氟苯尼考(FF),磺胺甲基啥吮加甲氧节氨嗜吮(SD21T侧[P,…     

克氏原螯虾细胞色素c基因通过调节凋亡途径抑制WSSV感染

细胞凋亡是由一系列相关基因严格调控的细胞程序性死亡,在抵御病原入侵、维持机体内环境稳态等方面有着重要意义。其中细胞色素c从线粒体释放到细胞质中是凋亡开始的关键一步。本研究利用RACE技术首次克隆获得了克氏原螯虾(Procambarus clarkii)细胞色素c基因(PcCytc),全长为897 bp,包括163 bp的5′-UTR、419 bp的3′-UTR和315 bp的开放阅读框,编码104个氨基酸。定量PCR检测结果显示,PcCytc基因在克氏原螯虾的各组织中均有表达,其中在鳃、肠道和肌肉中表达高,在胃中表达最低。WSSV感染实验显示,在病毒感染后PcCytc在肝胰腺、肠道和肌肉组织中的表达水平均出现上调,并在24 h达最高值,约是此时PBS组表达量的2.65、2.07和2.20倍,均存在极显著性差异(P<0.01)。PcCytc基因干扰后,克氏原螯虾体内WSSV病毒拷贝数显著增加(P<0.05),表明PcCytc能够抑制WSSV在克氏原螯虾体内的复制,延迟感染;同时,凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3的表达均发生显著上调或下调(P<0.05)。本研究表明,PcCytc可通过调节凋亡途径抑制WSSV感染,为克氏原螯虾对WSSV感染的免疫反应提供了新的见解。     

克氏原螯虾自噬相关基因PcAtg2的克隆及其在白斑综合征病毒胁迫下的表达分析

为了解自噬相关基因Atg2在克氏原螯虾(Procambarus clarkia)先天免疫中的作用,本研究克隆了克氏原螯虾Atg2 (PcAtg2)基因全长序列。生物信息学分析显示,PcAtg2蛋白编码序列全长为9 966 bp,推测其编码2 189个氨基酸。组织定量表达分布显示,PcAtg2在克氏原螯虾的各个组织中均有表达,其中在肝胰腺中表达最高,在眼柄中表达最低。在白斑综合征病毒(WSSV)感染实验中,PcAtg2基因表达量在不同组织中均呈现显著上调趋势。RNA干扰(RNAi)实验显示,PcAtg2基因沉默后,WSSV在克氏原螯虾体内的增殖明显被抑制,同时,自噬相关基因的表达量上调。透射电镜分析结果显示,在WSSV感染后,PcAtg2基因沉默组中克氏原螯虾肝胰腺组织中的自噬小体多于对照组。本研究结果可为了解克氏原螯虾应对WSSV胁迫下的调控机制提供理论参考。     

水产资源

020631局部加权回归在虾分布上的研究=Study of shrimp distributions by means of 10-eally weighted regression[刊,英]/Y iminYe,Adel HA// Trans.Amer.Fish.乳c.一2001,130(1/3)一68一79 通过应用建立在调查数据基础上的局部加权回归模型来研究虾的分布。多变量局部回归模型对分布在科威特水域三种虾:短吻沟虾、近缘新对虾、六突拟对虾的成功应用产生了分布水平和构造了大致的F-检验,这三者分布的差异可以通过局部回归图清楚的看出:短吻沟虾分布于整个调查水域;近缘新对虾和六突拟对虾主要集中在北纬29.10以北水域。因为科威特湾内…     

蛭弧菌及其在水产养殖动物疾病防治中的应用(连载二)

<正>三、蛭弧菌在水产养殖业的应用前景目前,蛭弧菌已在我国商品化生产,并在水产养殖业中广泛应用。其主要生产单位和产品有:宝来利来(泰安)兽药饲料公司的淡水水产动物专用噬菌26(噬菌蛭弧菌溶液),广东省新的生物工程研究所有限公司的复合噬菌蛭弧菌,南京(香港)威力克生物有限公司的鱼虾宝、蟹宝、鳝宝、蛙宝、鳗鱼宝、虾宝,南京福润德动物药业有限公司的三联噬菌皇(水产动物专用),SPSinc.燕金科技发展有限公司的百得菌、噬菌     

鳗鱼凹凸病的诊治方法

鳗鱼凹凸病是由微抱虫寄生引起的。它病程缓慢,但其难以治疗,且传播性强,表面一旦形成凹凸即失去商品价值,因此是一类危害性较大的疾病。笔者近几年接触了几例凹凸病的实例,现将该病的一些基本情况介绍如下。l病原鳗鱼凹凸病的病原为鳗匹里虫,属微抱子虫目。抱子小,构造简单。鳗匹里虫寄生于体例肌肉内,抱子散布于肌肉组织内外,同时使周围组织溶解,体表内陷,呈现凹凸不平,故称之为凹凸病。2流行与危害本病流行期无特别限制,在15-30℃的水中皆可感染,温度愈高抱子发育愈快。幼鳗、成鳗均可感染,在加温的养鳗池内,白仔鳗就有…     

罗氏沼虾常见病害及防治方法(下)

<正>2.固着类纤毛虫病(1)主要症状:纤毛虫主要通过附着在罗氏沼虾的鳃丝、附肢等表面进行感染,造成罗氏沼虾行动迟缓、活动减弱、抗应激能力下降。(2)病因:聚缩虫、单缩虫、累枝虫和钟形虫等感染引起。(3)诊断:取患病虾鳃丝、附肢等做成水浸片镜检。(4)流行及危害:该疾病的发生与水体有机质含量过高有关,严重时导致罗氏沼虾摄食能力下降以及蜕壳困难,最终造成罗氏沼虾死亡。(5)防控措施:放苗前清除底部淤泥并晒塘,     

白斑综合征病毒(WSSV)对不同规格克氏原螯虾(Procambarus clarkii)致病力及ATPase活性的影响

以投喂患白斑综合征病毒病(WSSV)的南美白对虾组织的方法人工感染健康的克氏原螯虾,利用PCR检测实验克氏原螯虾的感染情况;同时比较健康的克氏原螯虾和感染病毒的克氏原螯虾体内ATPase活性.结果显示:白斑综合征病毒可以感染克氏原螯虾,受感染的克氏原螯虾体内病毒含量与其死亡呈正相关;健康的克氏原螯虾和感染病毒的克氏原螯虾体内的ATPase活性分别为7.337 U/mgprot和4.212 U/mgprot,有极其显著的差异.     

对虾养殖、环境、病害(二)

附表一:目前从患病的对虾体内分离到的一些病毒 BP(Baculovirus Penaei)桃红对虾杆状病毒 长270nm,直径74nm,感染肝胰腺和前中肠上皮组织。在细胞核里有嗜伊红包涵体(三角形)。引起幼虾和未成年虾(氵蚤)状幼体和糠虾期急性死亡。 宿主:桃红对虾、边缘对虾、白脚对虾、兰对虾、白对虾、褐对虾。 BMNV(Virus of Baculoviral Midgut GlandNecrosis)中肠腺坏死杆状病毒。长310nm,直径72nm,     

水产生物病害及防治

030928用RFTM法在蛤仔组织中检测得两种不同原生动物,大西洋派金斯虫和一种类派金斯虫的休眠抱子=HyPnosPoresde-teeted by RFrM in elam(Rudita加5 decussa-zu、)tissues belonges to two different proto-zoan organisms,于愁沃insus atlanricus andaPe,一insus一like organism[刊,英]/NovoaB,ord应5 Me,FiguerasA// Aquae.一2002,209(1/4)一11一18 将双壳类组织置于雷氏液体疏基乙酸盐培养基(RFTM)中培育后,检测是否有休眠抱子发育,休眠抱子被鲁哥氏液染成暗绿色。将蛤仔置于RFTM中获得休眠卵,用保存的富集抱子制备液DNA上的…     

虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)对铅和镉的生物富集与释放规律

利用双箱模型模拟了虾夷扇贝在混合暴露条件下富集、释放铅和镉的动力学特征,通过测定不同规格虾夷扇贝、不同组织富集、释放过程中铅和镉的含量并进行非线性拟合,获得不同生长阶段虾夷扇贝对铅和镉的生物富集系数BCF、吸收速率常数k1、释放速率常数k2、生物学半衰期B1/2以及不同组织中铅和镉的富集参数。结果显示,大、小两种规格虾夷扇贝对铅的BCF分别为1671、896,对镉的BCF分别为7433、1123;不同规格虾夷扇贝对铅、镉的BCF顺序为:大规格>小规格;相同规格虾夷扇贝BCF:镉>铅,表明虾夷扇贝对镉的富集能力强于铅;铅、镉的B1/2为:大规格>小规格,说明大规格的虾夷扇贝对铅、镉的代谢排出能力更强;铅在虾夷扇贝各组织中的富集顺序依次为:鳃>内脏团>闭壳肌,镉的富集顺序依次为:内脏团>鳃>闭壳肌。