鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立

【目的】建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法。【方法】通过腹腔注射酪蛋白生理盐水,从鸡人工腹水中得到白细胞;将收集的白细胞,通过超声波反复破碎、体积分数10%乙酸浸提、低温高速离心、旋转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法,得到抗菌肽粗提物;将得到的粗提物,经CM-Sepharose Fast Flow弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,收集分离的各组分,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性和最小抑菌浓度。【结果】共获得鸡抗菌肽粗提物0.270 g,经RP-HPLC分离纯化,抗菌肽离子交换阳性组分共分离出18个峰,其中6个峰对3种细菌均表现较强的抑菌活性,对鸡大肠杆菌E.coliO78(峰13)、金黄色葡萄球菌S.au-reus1056MRSA(峰15)和白色念珠菌C.albicansATCC10231(峰15)的最小抑菌浓度分别为0.627,0.001和0.035μg/mL。【结论】该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定。     

鸡β-防御素3(Gal-3)基因的克隆、表达及抑菌活性研究

【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET-20b连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;最后,对Gal-3融合蛋白进行纯化,并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过RT-PCR扩增获得了约240bp的鸡Gal-3基因,经IPTG诱导获得约26ku的蛋白。IPTG在终浓度为0.6mmol/L,33℃诱导4h,诱导时菌体A600为0.6,蛋白表达量最高,且多数以可溶形式存在,33℃上清中的蛋白含量比37℃上清高。纯化的蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。【结论】成功克隆并表达了鸡Gal-3基因,其原核表达产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性。     

鸡β-防御素Gal-3在转基因紫花苜蓿中的表达

【目的】在紫花苜蓿中表达鸡β-防御素3(Gal-3),为利用紫花苜蓿规模化生产Gal-3奠定基础。【方法】PCR扩增鸡Gal-3基因,以潮霉素作为转基因植物的选择标记,将鸡β-防御素Gal-3基因克隆至表达载体pCAM-BIA1390R(简写为p1390R)上,构建重组表达质粒p1390R-Gal-3;采用冻融法将质粒p1390R-Gal-3转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化至紫花苜蓿;采用PCR检测、Southern blot筛选阳性转基因苜蓿植株,并对Gal-3蛋白进行抑菌活性研究。【结果】PCR扩增获得了240bp的鸡Gal-3基因,成功构建植物表达载体p1390R-Gal-3,在苜蓿中初步建立了Gal-3的遗传转化体系,共获得22株转基因苜蓿植株,其中4株为阳性植株,转化率为18.2%。PCR扩增和Southern blot检测表明,Gal-3基因已整合到转基因苜蓿基因组中。提取转基因苜蓿的Gal-3蛋白进行抑菌活性试验,结果显示转基因苜蓿对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌均有抑制作用。【结论】获得了具有抑菌活性的转鸡β-防御素Gal-3基因的苜蓿植株。     

紫色小白菜中花青素的提取工艺优化

【目的】探讨从紫色小白菜"紫罗兰"叶片中提取花青素的最佳工艺条件。【方法】以紫色小白菜叶片的冻干粉(粒径≤0.45mm)为材料,筛选花青素提取剂(乙酸、甲醇、乙醇、丙酮)、提取剂体积分数(5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%)和提取方法(浸提法、超声波法),对影响花青素提取率的提取温度(25,35,45,55,65,75℃)、料(g)液(mL)比(1∶5,1∶10,1∶20,1∶30,1∶40,1∶50)、提取时间(1,5,15,30,45,60min)、提取次数(1,2,3,4次)进行单因素试验,以确定最佳提取工艺。【结果】紫色小白菜花青素的最佳提取剂为乙酸,提取剂最佳体积分数为35%,最佳提取方法是浸提法;最佳提取工艺为:提取温度25℃,料(g)液(mL)比1∶10,提取时间1min,提取2次。在此条件下,第1次提取液中花青素的质量浓度为0.812g/mL,相对提取率为70.39%;第2次提取液中花青素的质量浓度为0.225g/mL,相对提取率为22.22%,2次相对提取率累计为92.61%。【结论】确定了紫色小白菜花青素的最佳提取工艺,此工艺能够在不引入叶绿素干扰的情况下较充分地提取花青素,且花青素的质量浓度较高。     

响应面法优化鸡小肠黏膜唾液酸提取工艺

【目的】优化鸡小肠黏膜唾液酸提取工艺,为肉鸡加工副产物开发再利用提供新思路。【方法】以鸡小肠黏膜为原料,以唾液酸提取量为指标,先采用单因素试验,在几种提取唾液酸常用酸中筛选最佳酸,进一步确定提取酸浓度、提取时间、液料比等3个因素影响唾液酸提取量的优化范围。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken试验设计方法,进行3因素3水平响应面优化设计,共进行17组处理,每组处理3次重复,考察柠檬酸浓度、提取时间、液料比等3个因素对唾液酸提取量的影响,从而确定鸡小肠黏膜唾液酸提取的最佳工艺参数。【结果】鸡小肠黏膜唾液酸提取最佳工艺参数为:柠檬酸浓度0.1 mol·L-1,提取时间4 h,液料比32.20∶1(mL·g-1)。考虑实际操作的简便,确定唾液酸提取的最佳工艺参数为:柠檬酸浓度0.1 mol·L-1,提取时间4 h,液料比30∶1(mL·g-1)。在此条件下,得到的唾液酸提取量为(1 010.39±21.87)μg·g-1,与预测值1 025.69μg·g-1无明显差异。【结论】通过响应面法优化了唾液酸提取工艺条件,提高了鸡小肠黏膜唾液酸提取量,为鸡小肠废弃物开发再利用提供新的思路。     

华山松松针挥发油超临界CO2萃取工艺研究

【目的】考察从华山松松针中提取挥发油的最佳工艺条件。【方法】采用超临界CO2萃取法,运用正交试验设计及响应面分析,对松针挥发油提取的工艺条件进行优化。【结果】对松针挥发油提取率的影响从大到小依次为萃取时间、萃取压力、萃取温度;超临界CO2萃取松针挥发油的最佳工艺参数:萃取压力34 MPa,萃取温度45℃,萃取时间2.2h。【结论】利用超临界CO2萃取松针中挥发油,在最佳工艺条件下的提取率为1.549%,提取率高、分离效果好,所得挥发油为淡黄色澄清透明油状物。     

白痢鸡粪培养蝇蛆抗菌肽对白痢沙门菌感染雏鸡的疗效观察

【目的】用白痢鸡粪培养蝇蛆,探究蝇蛆抗菌肽对鸡白痢沙门菌感染雏鸡的治疗效果。【方法】用鸡白痢沙门菌感染雏鸡,收集雏鸡粪便培养蝇蛆,粗提蝇蛆抗菌肽,测定其含量和抑菌活性,试验同时设健康鸡粪便培养的蝇蛆抗菌肽作为对照。分别用白痢鸡粪和健康鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽治疗白痢病鸡,测定其肠道细菌数量和治愈率,试验同时设抗生素组(恩诺沙星)和未治疗对照组。【结果】白痢鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽含量显著高于健康鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽(P0.05);2种鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽对大肠埃希菌、沙门菌和葡萄球菌均有抑制作用,但白痢鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽的抑菌活性显著高于健康鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽(P0.05);蝇蛆抗菌肽治疗白痢病鸡后,白痢鸡肠道细菌数量显著低于对照组(未治疗组)(P0.05),稍高于抗生素治疗组(P0.05),但白痢鸡肠道细菌数量均达到健康鸡的标准范围。白痢鸡粪培养蝇蛆抗菌肽组的治愈率为43.33%,与健康鸡粪培养蝇蛆抗菌肽组和抗生素组差异不明显。【结论】白痢鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽对沙门菌感染的鸡白痢病具有治疗作用。     

茜草制诃子多糖的提取工艺研究

【目的】优化茜草制诃子多糖的提取工艺,为茜草制诃子多糖的研发提供理论依据。【方法】以茜草制诃子为研究对象、茜草制诃子多糖提取率为指标,通过单因素试验和正交试验考察料液比、提取温度、提取时间和提取次数对茜草制诃子多糖提取率的影响,筛选茜草制诃子水提醇沉法的最佳工艺。【结果】茜草制诃子水提醇沉法提取多糖的最佳提取工艺为:料液比1∶20,提取温度90℃,提取时间3 h,提取次数3次。在该条件下茜草制诃子多糖的最大提取率为3.55%。【结论】获得茜草制诃子多糖提取的最佳工艺条件,水提醇沉法可较好地应用于茜草制诃子多糖的提取,优化的工艺稳定可行、提取率高。     

‘苦水玫瑰’花色苷的提纯及其抑菌活性

【目的】探讨‘苦水玫瑰’花色苷最佳提纯工艺参数及对几种常见致病菌的抑菌效果.【方法】采用有机溶剂浸提法,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken响应面分析优化‘苦水玫瑰’花色苷最佳提取工艺条件,经D-101型大孔树脂的动态纯化工艺后,确定最佳纯化工艺参数,测定其纯度,并进一步运用滤纸片法探究其抑菌效果.【结果】‘苦水玫瑰’花色苷最优提取工艺条件:提取液pH=1.05、乙醇浓度81.5%、提取时间45min、料液比1∶90(g/mL),提取2次,提取率4.27 mg/g.最佳动态吸附条件:上样液pH=2,吸附流速1 mL/min,上样液浓度0.15mg/mL,吸附率76.25%,95%酸性乙醇将花色苷全部洗脱.纯化后的花色苷对大肠杆菌和沙门氏菌抑菌效果不明显,对金黄色葡萄球菌抑菌明显,其抑菌圈直径为(6.35～10.12)±0.05 mm,最低抑菌浓度为1 mg/mL.【结论】利用响应面法确定最佳提取工艺条件合理,可用于‘苦水玫瑰’花色苷的提取.苦水玫瑰花色苷纯度由原来的5.862%提高到了23.97%,纯化效果显著,对金黄色葡萄球菌有明显抑菌效果.     

超声波提取珠子参根茎多糖的工艺优化

【目的】优化超声波提取珠子参根茎多糖的工艺条件,为珠子参的开发利用提供参考依据。【方法】以珠子参根茎为原料,通过单因素试验和正交试验考察料液比、提取时间、提取温度、超声波功率对多糖提取率的影响。【结果】影响超声波提取珠子参根茎多糖的因素顺序为：料液比〉提取温度〉提取时间〉超声波功率,其最佳提取条件为：在料液比1∶10、提取温度60℃、提取功率90 W的条件下提取20 min,珠子参根茎多糖提取率为11.71%。【结论】超声波提取法具有提取时间短、提取率较高、操作简便、稳定性好等优点,是提取珠子参根茎多糖的有效方法。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

高校贫困生认定工作面面观

国家贫困生资助政策实施以来,对贫困生帮助很大,同时在实际运行中还存在着一些问题。本文提出贫困生认定工作仍需要进一步采取各种相关配套措施,以推动和保障贫困生资助工作更好地开展。     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传．     

探究板栗的科学贮藏方法

板栗属壳斗科栗属(Castanea mollisima Blume),其种子属于顽拗型种子,不耐贮藏。基于近年来板栗贮藏保鲜技术研究成果,从合理采收、贮前处理、贮藏方法等方面进行论述。     

动物疫苗接种异常反应的处理

动物疫病是畜牧业生产的大敌,要发展畜牧业生产就要防治动物疫病。但在疫苗接种时,经常出现正常反应外的其他不利于机体的反应,如废食、皮疹、休克、死亡等,正确处理或避开这些问题,对推行动物疫病的计划免疫,实施强制免疫,保护人畜安全具有十分重要的现实意义和作用。     

厚胶合板弹性模量预测模型

为了预测厚胶合板弹性模量,通过简化层合板理论,该文建立了胶合板弹性模量预测模型,并以单板条、经过涂胶热压处理的单板条和相同工艺条件下的单板层积材的弹性模量,采用4种不同铺层方式的19层桉树胶合板对模型进行了验证。结果表明:3种预测值与实测值的趋势一致,相关系数R2顺纹在0.86以上,横纹在0.88以上,但是精度不同。采用单板条弹性模量预测的胶合板弹性模量比实测值偏低;采用经过涂胶热压处理后的单板条弹性模量预测的胶合板弹性模量比实测值偏高;采用相同工艺条件下的单板层积材弹性模量预测的胶合板弹性模量与实测值偏差较小,顺纹平均误差为4.64%,横纹平均误差10.94%。因此,采用相同工艺条件下的单板层积材的弹性模量来预测胶合板的弹性模量是可行的。      

增强我国水果业出口竞争力的思考

分析了入世4年来,我国水果出口在量上实现了突破,但并没有实现质变的主要原因,指出我国水果业存在的问题。论述了引进外资对发展我国水果业的意义,并提出了具体可行的对策与建议。     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

甘肃省日光温室生产发展对策的探讨

甘肃省设施农业发展历史悠久,古代创造了麦草覆盖生产韭 黄及泥碗护苗等传统设施农业技术,至今仍然受到农民欢迎,在 甘肃省中部应用面积约5万多hm2。建国后,甘肃设施农业获得 了新生,大致经历了三个阶段;第一阶段为引进应用北京改良式 温室阶段,时间在20世纪50-60年代;第二个阶段为塑料拱棚 与地膜覆盖栽培阶段,时间在20世纪70-80年代:第三阶段为