棉花嫁接技术要点

在棉花科研工作中,有时需要进行嫁接保存某些稀有种质资源和远缘杂交不育材料,或通过嫁接快速扩大某一遗传分离群体.另外,棉花体细胞再生植株、转基因植株、茎尖培养植株等无菌苗直接定植成活率低.在一定程度上制约了生物技术和细胞工程在棉花遗传改良等方面的应用,嫁接能够改善这一状况.     

花生几丁质酶基因的克隆及抗病性验证

为了探讨花生几丁质酶在抵御真菌性病害中的作用,克隆了花生几丁质酶基因并通过遗传转化验证了该基因的功能。以花生品种花育23号基因组DNA和RNA为模板,通过PCR及RT-PCR扩增分别获得长度为1 779 bp的花生几丁质酶基因DNA序列及795 bp的全长cDNA序列。DNA及cDNA序列比对结果表明,该基因包含3个外显子和2个内含子,内含子剪切符合"GT……AG"规则,其cDNA序列被命名为Ah-Chi,编码265个氨基酸,Gen Bank注册号为HQ439775。利用NCBI在线Blast进行序列比对,结果表明,该蛋白产物与水稻、玉米、紫花苜蓿、大豆、拟南芥的相关蛋白的同源性分别达到83%,83%,72%,58%,49%。用Ah-Chi替换掉植物表达载体pCAMBIA1301上的Gus基因,成功构建了植物过表达载体pCAMBIA1301-Ah-Chi。利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Chi转化花生胚小叶外植体,获得再生小苗,经嫁接移栽获得再生植株。利用PCR扩增筛选获得转基因阳性植株,RT-PCR扩增结果表明,转基因植株中Ah-Chi基因表达量增加。用黑斑病菌接种转基因植株和非转基因对照植株离体叶片7 d后,发现非转基因植株叶片褐化及坏死程度较为严重,而转基因植株叶片褐化及坏死程度相对较轻,初步说明转基因植株抗病性增强。     

可可嫁接成活率研究

为促进可可无性良种繁育,以优良可可种质为接穗,可可实生苗为砧木进行嫁接试验,比较芽接、劈接、枝接、腹接4种嫁接方式对成活率的影响。结果表明,不同嫁接方式间成活率呈极显著差异,腹接法嫁接成活率最高,达95%以上;采用芽接法,在不同时期进行嫁接,4月份和10月份为可可嫁接适宜时期;砧木直径对嫁接成活率和新芽生长量没有显著影响,但嫁接成活率与砧木直径在一定程度上呈线性正相关;不同种质接穗嫁接成活率呈极显著差异,砧穗亲和性高的组合嫁接成活率达90%以上,亲和性低的组合成活率不到50%。     

PyTPS 转化花生对其后代耐盐性和品质性状的影响

为了研究条斑紫菜TPS基因（ PyTPS）对花生种子耐盐性和品质性状的影响,利用花粉管通道法,将携带条斑紫菜PyTPS基因的pCAMBIA2300-PyTPS重组载体导入花生,获得了T0转基因植株。利用PCR对T0植株进行了检测,PCR阳性率为34．7％。将部分转基因植株的T2种子进行耐盐试验,利用半定量RT-PCR分析了PyTPS基因在转基因植株中的表达情况,并用近红外技术测定了T2种子的品质性状。结果表明,部分转基因花生种子在盐溶液中的发芽率显著提高,PyTPS基因可在有些转基因植株中表达,有的转基因植株的蛋白质、油酸、亚油酸或脂肪含量发生了明显变化。总之,条斑紫菜PyTPS基因导入花生后,既可提高转基因花生种子的耐盐性,又对部分后代种子的品质性状产生影响。     

花木嫁接忌烟和油

笔者发现,嫁接成活率高低,一取决于技术是否熟练,二取决于是否接触烟和油。笔者在和洛阳一位葡萄嫩枝嫁接能手交谈中得知,自从他吸烟后葡萄嫩枝嫁接成活率不到20％,还没有跟他学习的小姑娘嫁接成活率高。在河南登封市一次柿树嫁接学习班上,实习中     

锌指蛋白基因ZAT12提高转基因高油酸花生抗寒性

低温和冻害严重影响高油酸花生的产量和品质。为了提高高油酸花生的抗寒性,本研究利用农杆菌介导的转化方式将可以激活低温响应基因的锌指蛋白基因ZAT12导入高油酸花生。同时对影响高油酸花生转化的几种因素(植物生长素ZT和6-BA的使用浓度,侵染时间,烟草提取物添加量)进行改良优化。通过PCR和实时荧光定量PCR检测证明PnZAT12已经整合到高油酸花生基因组中。对转基因植株进行低温胁迫处理,分别测定其相对电导率(relative electrolytic leakage, REL)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)活性。结果表明,转基因花生的MDA含量和REL显著低于非转基因花生,而SOD活性明显高于非转基因花生。在表型比对方面,转基因花生的叶片黄化程度和植株枯萎程度远低于非转基因花生。结果证实,转基因花生比非转基因花生有更高的抗寒性。研究结果对抗逆基因的改良研究及高油酸花生的分子育种工作都具有重要的参考价值。     

花生AhPEPC1基因抑制表达的转基因后代转录组分析

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxylase,PEPC)是控制油料作物种子中蛋白质/油脂含量比率的一个关键酶。本研究检测了花生AhPEPC1基因抑制表达的转基因株系种子含油量,与非转基因花生相比,转基因花生种子含油量提高了5.7%～10.3%。利用转录组测序(RNA-Seq)技术分析花生中AhPEPC1基因的抑制表达是否影响其他基因的功能。结果表明,转录组分析筛选到110个基因差异表达,其中25个基因上调表达,85个基因表达下调。对110个差异表达基因进行了KEGG富集分析,其中有34个基因成功获得了KEGG注释,发现氨基酸的生物合成途径中有2个基因(Aradu.M0JX8,Aradu.FE0Z7)下调表达。利用荧光定量PCR分析了15个DEG(differential expressed gene)在非转基因对照和转基因花生种子中的表达情况,发现其趋势与转录组测序结果基本一致。研究结果可在一定程度上解析AhPEPC1基因调控花生种子含油量的分子机制。     

河南转基因棉花课题通过科技部验收

6月15日,河南省实施的国家重大科技专项“国家转基因棉花中试及产业化基地课题”通过了科技部组织的验收。科技部专家组认为,课题的实施取得了较为显著的成效。一是建立了规模化、工厂化的高效棉花转基因技术体系。采用农杆菌介导法转基因的周期由原来的12个月缩短到5-7个月,基因转化率达7．5％,嫁接成活率达90％以上,已     

果树、林木嫁接成活率的提高与嫁接方法的选择

果树、林木如采用种子繁殖,后代会产生分离,生长和结果表现不一致,要想发展优质高产的优良品种,必须采用无性繁殖方法,而嫁接是其中非常重要的一种。嫁接技术在生产上虽然很普及,但是实际应用中还存在不少问题,比如嫁接成活率低等。针对这些情况,笔者将嫁接成活率的提高和嫁接方法的选择进行了总结,现介绍给大家参考。一、影响嫁接成活率的因素笔者在工作中曾看到很多嫁接失败的例子,分析起来基本上都是     

不同砧木嫁接茄子再生效果研究初报

利用三种砧木嫁接茄子,通过平茬使其再生,研究再生后成活率、黄萎病发病率和产量.结果表明,砧木不同,再生后成活率、黄萎病发病率和产量具有显著的差异,确定托鲁巴姆是嫁接茄子再生的最佳砧木.     

适用于低钾条件下棉花苗期根冠通讯研究的三种嫁接方法

为了满足棉花叶片衰老(以缺钾诱导)过程中根冠通讯研究的需要, 在营养液培养条件下探索了棉花子叶期至一叶期幼苗的单接穗单砧木嫁接、双接穗单砧木(Y型)和单接穗双砧木(A型)嫁接技术。通过研究营养液中钾浓度、砧木和接穗的苗龄配合、嫁接部位及砧木保留子叶对嫁接成活率的影响, 综合考虑嫁接成活率和成活后用缺钾诱导嫁接苗衰老的速度, 确定接穗单砧木嫁接和Y型嫁接的砧木均在不含钾的沙床中出苗后(萌发后3 d)转移至钾浓度为0.1 mmol L^-1(中度钾胁迫)的1/2改良Hoagland营养液中培养5 d至第1片真叶出现, 接穗在不含钾的沙床中出苗后(萌发后3 d)再生长2 d, 采用砧木留子叶法在子叶节处嫁接。A型嫁接的适宜条件和方法为砧木和接穗苗龄(第1片真叶刚出现)相同, 嫁接前的培养方法同Y型砧木, 嫁接部位在砧木子叶节下2~3 cm处。单接穗单砧木、Y型和A型嫁接的平均成活率分别可达到95%、85%和90%以上。     

不同种源红榉嫁接繁育综合评价研究

旨在筛选红榉嫁接的最佳方式和适合嫁接繁殖的种源。本研究以7个不同红榉种源优株1~2年生枝条为接穗,以4年生榉树实生苗为砧木,分析插皮接、双舌接、劈接、芽接4种不同嫁接方式的成活率,结果表明：春季嫁接时,枝接方式平均成活率为88.7%,明显优于芽接方式的32.4%,3种枝接方式在0.01水平上与芽接差异显著;枝接方式中,插皮接平均成活率最高,为92.4%,但与双舌接和劈接相比,总体无差异;种源间嫁接成活情况分析表明,莒南种源(JN)优株嫁接成活情况最好,平均成活率为90.8%,隶属函数值为90.34%,上海辰山植物种源优株嫁接成活率较低,仅为62.5%,隶属函数值为0.01%。本研究筛选出插皮接这一红榉最优嫁接方式,以及最适合嫁接繁殖的种源—莒南种源。     

南酸枣嫁接育苗试验初报

从嫁接方法、砧木高度、接穗来源、接穗贮藏时间、嫁接时期等方面探讨南酸枣嫁接的最佳方案。在三月上旬,砧木高度15-25cm,以切接或腹接方法,选择生长旺盛的一年生枝条为穗条,穗条随采随接,减少其暴露在空气中的时间,使砧木和接穗削面平滑,形成层密接,可使南酸枣嫁接成活率达85%以上。切接遇雨天在嫁接苗上套一小塑料袋防雨水。     

不同接穗长度和栽种时间对杨梅嫁接成活率及生长量影响的研究

为提高杨梅嫁接成活率和接穗利用率,2014年开展了不同接穗长度、不同栽种时间对杨梅嫁接成活率和生长量影响的研究。结果表明,杨梅嫁接后6d、12d栽种的,5--6㎝短穗嫁接的成活率达87%和88%,略低于8-12㎝长穗嫁接的89%和90%,二者差异不极显著;嫁接后6d、12d栽种的成活达87%-90%,极显著高于嫁接后1d栽种的20.2%-21%。研究认为,在嫁接后遇下雨天气,根据天气情况,在接后6d-12d内选择晴天栽种,可显著提高成活率;在接穗紧缺时采用短穗嫁接,可大大提高接穗利用率。     

黄瓜不同嫁接技术的适应性研究

采用靠接法嫁接,以自根苗为对照,比较单砧木嫁接（断根、不断根）和双根嫁接（不同砧木,均断根）对黄瓜产量的影响。结果表明：嫁接处理的黄瓜植株成活率和植株生长势均高于不嫁接处理,单砧木断根处理的产量高于其不断根处理;2个双根嫁接处理中黄瓜产量高于其他处理且2个处理间有差异。该试验认为双断根嫁接是一种可获得高产的嫁接方式,但应先进行不同砧穗配组试验。     

Genetic transformation of pigeonpea (<Emphasis Type="Italic">Cajanus cajan</Emphasis> L.) and screening transgenic progenies based on lateral root inhibition

Production of transgenic pigeonpea is becoming increasingly important, but the methods currently employed in production and subsequent screening still requires improvement. Here, we describe Agrobacterium-mediated genetic transformation of pigeonpea with reporter uidA (gus) gene and selectable marker, neomycin phospho-transferase (nptII) gene. Histochemical assay demonstrate localization of gus activity in cells and transformed plants. Overall, a transformation frequency of 0.33% was achieved using the protocol. Grafting of in vitro-regenerated healthy shoots indicates higher survival percent (72.6%), when stock and scion are of the same variety. Seeds harvested from primary transgenic plants can be screened based on lateral root inhibition strategy. Approximately 87% of the screened T₁ plants were found to be PCR positive. In conclusion, in vitro grafting of transgenic pigeonpea shoots leads to better plant establishment and screening based on lateral root inhibition leads to quick identification of positive segregants.     

长毛红山茶物种在天柱自然分布特征及人工繁殖技术研究

对长毛红山茶在天柱的自然分布、物种的生长形质指标及多种人工繁殖技术进行了探讨和研究。长毛红山茶在天然状态下零星、散生或小块于针阔混交林中。在其分布的林分里,处于被压林层中,在森林群落中物种呈现出负向演替趋势。长毛红山茶花期长达120d左右,盛花期持续80d左右,观赏价值高。其种子不易保存,实生繁育宜随采随播可提高种子发芽率。长毛红山茶芽苗砧嫁接成活率达80%左右,是当前迁地保护与资源扩繁的一项可行技术方法。通过大树换冠嫁接,第3年即具有一定数量的花朵供观赏。长毛红山茶在经典描述中其花瓣为6片,本研究在同株及株间其花瓣均发现有5、6、7片共存现象,有待进一步研究和商榷。     

薄麻壳泡核桃芽接处理方式对成活率和生长的影响

为扩充薄麻壳泡核桃优株无形性繁殖材料,采用其优株穗条进行芽接,设置不同部位芽、不同嫁接高度和不同嫁接时间处理对其萌动、生长和嫁接成活率的影响,筛选出最佳芽接处理方式,提高芽接成活率.结果表明,优株对新梢长度的主效应影响显著,对芽萌动平均天数、新梢粗度和嫁接成活率的主效应影响不显著.嫁接时间对芽萌动天数、新梢长度、新梢粗...     

油茶穗条储存方式和储存时间对嫁接苗生长的影响

为揭示油茶穗条储存方式和储存时间对嫁接苗成活率和生长的影响,以普通油茶当年生春梢为材料,研究湿沙储存、水培储存、常温储存、低温储存和不同储存时间的油茶嫁接成活率和生长指标。结果表明,穗条随采随接的嫁接成活率和苗木生长指标均高于4种储存处理。从嫁接成活率来看,湿沙储存前2天,水培储存前3天,常温储存前5天,低温储存前2天,嫁接成活率均超过50%。从平均苗高、平均地径、平均叶片数来看,4种储存方式均以第1天最高,但最低值出现时间不一。综合来看,穗条最好为随采随接,储存时间不超过5天。     

报春PF sHSP21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定

根据灰岩皱叶报春PF sHSP 21.4热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因,并构建pCAMBIA 130 1-PF sHSP21.4植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野生型对照进行高温胁迫,分析其耐热性差异.结果显示:...