应用生物素-链霉亲和素的时间分辨荧光免疫分析检测玉米赤霉烯酮

采用基于生物素(Biotin)-链霉亲和素(Strepavidin)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮(ZEN)检测方法.以strepavidin包被板条,加入生物素化的ZEN-BSA,结合在板条上的ZEN-BSA与标准/样本中的游离ZEN共同竞争限量的抗ZEN单克隆抗体,用稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠IgG进行示踪,建立了间接竞争的ZEN-TRFIA.该方法的检测灵敏度为0.2 ng/ml,测量范围是0.2～200.0 ng/ml,批内、批间变异系数分别为5.7%和8.3%,平均回收率为91.1%.与玉米赤霉醇的平均交叉反应是12.3%,与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应,说明该方法的特异性较好.相关试剂在4 ℃放6个月后各检测参数基本无变化,说明该方法稳定.样品同时用ZEN-TRFIA和商品ELISA试剂盒测定样品ZEN含量,两者的相关系数为 0.966 4,说明该方法测量准确.ZEN-TRFIA具有测量准确、检测灵敏度高、检测范围宽、操作简便、标记物稳定等优点,适合于ZEN大量筛查的应用.     

动物饲料中玉米赤霉烯酮ELISA检测方法的建立

为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量,建立酯联免疫检测法(ELISA).结果显示:该方法检测回收率范围为67%～99%,其最低检出限为0.1 μg/kg;以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析,并以HPLC法对同一批样品进行检测,两种方法回收率相关系数为0.956 1.证明建立的ELISA检测方法适合动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测.     

玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定

为了降低基层检测部门检测谷物中玉米赤霉烯酮(ZEN)的成本,研制国产化检测试剂盒非常必要,而试剂盒的研制离不开完全抗原的支持.本试验的主要内容是将ZEN肟化,生成玉米赤霉烯酮肟(ZENO),再用DCC-NHS活性酯法将ZENO与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)偶联合成ZEN完全抗原,最后透析将未偶联的小分子...     

玉米赤霉烯酮与冬小麦短日春化效应（简报）

已证明高等植物体内源产生的小分子活性物质──玉米赤霉烯酮（zearalenone，简称ZEN），与植物的春化作用和光周期诱导密切相关，但对其调控机理尚不明。本文报道冬小麦品种燕大1817幼苗在短日春化过程中内源ZEN含量的变化规律，为研究短日春化现象的内部机制提供新线索。植物材料：选用冬小麦（TriticumaestivumL．）品种燕大1817。处理方法：小麦干种子用0.1％HgCl2浸泡消毒10min，无菌水冲洗并浸泡过夜。将吸涨种子均匀播在铺有以无菌水浸湿滤纸的培养皿中，25℃下暗中萌发两天，然后播种于温室花盆石中，设5个处理：①长日光周期（…     

玉米赤霉烯酮液相芯片定量检测方法的研究

建立玉米赤霉烯酮(ZEN)液相芯片定量检测方法。采用间接竞争法原理和液相芯片技术平台,选用ZEN多克隆抗体对ZEN定量检测方法进行探索。首先将ZEN-BSA与36﹟微球偶联,同时加入待检的游离的ZEN小分子和其标记有生物素的ZEN多克隆抗体,偶联抗原和目标抗原竞争结合生物素标记抗体,通过报告分子SA-PE在532nm波长的激光下,即可检测出报告分子发出的荧光强度,荧光强度与待检ZEN的量成反比。通过优化液相反应体系中ZEN多克隆抗体浓度以及抗原抗体孵育时间,建立了ZEN液相芯片定量检测方法。结果表明:本研究建立的ZEN液相芯片定量检测方法,采用的偶联抗原为ZEN-BSA,偶联量为100μg。ZEN多抗临界饱和浓度为10μg.mL-1,偶联抗原和抗体最佳孵育时间为15h。建立的标准曲线线性方程为y=0.0004x+0.0013(R2=0.9988),以国际通用的IC50作为衡量标准,其最低检出浓度为3.25ng.mL-1,线性范围为0.05~10ng.mL-1。建立的ZEN液相芯片检测方法,快速、灵敏、简便、适用于大量样本的检测。     

酶联免疫吸附法在饲料安全检测中的应用

酶联免疫吸附法(Enzyme-linkend immunsorbent assay,ELISA)是指固相吸附技术和免疫酶技术相结合的一种方法,是一项先进的免疫化学测定技术。因其具有特异性高、敏感性强、结果易于检测等特点,常用于对饲料中某些违禁药品、添加剂及有害微生物的筛检和毒素的检测,是饲料安全检测中的一项新技术。     

玉米赤霉烯酮与大麻的性别表达

大麻９Ｃｏｎｎａｂｉｓ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）发育过程中内源玉米然酮含量发生规律性变化,茎尖内源玉米赤霉烯酮在花原基出现前和花期前出现含量高峰,在达到花期前的真叶内出现ＺＥＮ含量高峰。外源玉米赤霉烯酮处理提高大麻的雄株／雌株比例,而６－ＢＡ处理高大 麻雄株／雄株比,同时ＺＥＮ处理降低性别决定关键时期的ＣＴＫ含量,首先降低２大麻真叶内的ＣＴＫ含量,而后降低茎尖内的ＣＴＫ含量。说明ＺＥＮ可能通过降低２细     

饲料中玉米赤霉烯酮检测方法概况

玉米赤霉烯酮是由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌、粉红镰刀菌等多种镰刀菌分泌的真菌毒素,可污染多种谷物和饲料.玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用,畜禽食用后可引发慢性中毒或繁殖技能障碍,严重影响畜禽机体健康.本文对饲料中玉米赤霉烯酮常用检测技术进行总结和概述,以期为建立精准、灵敏的饲料玉米赤霉烯酮检测方法提供理论参考,更好地促进饲料业...     

玉米赤霉烯酮的高效液相色谱-荧光法检测技术研究

建立了高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)定量检测饲料中镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA,又称F-2毒素)的方法.采用层析柱和免疫亲和柱结合净化提取液的方法,确定乙腈-水(体积比为9∶1)为最佳提取溶液,荧光检测的激发波长(λx)和发射波长(λm)分别为274 nm和440nm.色谱检测条件:流动相为甲醇-水-乙腈(体积比为10∶46∶44);检测波长为激发波长274 nm,发射波长440 nm;柱温25℃,流速0.6 mL·min-1.HPLC-FLD对F-2毒素进行定量分析,线性回归方程为y=1 416 362.246x+2 771.577(R2=1.0000),加标回收率高达88.74％,检测限为5.7 μg·L-1,相对标准偏差低于4.01％;F-2毒素在0.025～0.8 μ,g·mL-1条件下,线性关系良好.结论:HPLC-FLD法精确、灵敏度高,可作为定量检测F-2毒素的有效手段.     

玉米赤霉烯酮浸种对玉米幼苗抗冷性的影响

玉米赤霉烯酮浸种（２４ｈ）提高了玉米幼苗的抗寒性。在低温处理中，玉米赤霉烯酮浸种使玉米幼苗叶片的相对电导值较低，超氧化物歧化酶活性较高，游离脯氨酸含量升高，可溶蛋白含量较稳定。０．１ｍｇ／Ｌ浸种所产生的抗逆效果均优于０．０１ｍｇ／Ｌ。     

酶联免疫吸附技术在食品安全检测中的应用研究进展

介绍了酶联免疫吸附实验原理,阐述了该技术在食品安全检测中的应用研究进展.讨论了该技术的发展趋势及其应用前景.     

环境中毒死蜱的酶联免疫分析方法研究

【目的】毒死蜱广泛使用及具有较好的稳定性,在很多地区的环境介质中均已检测到其残留。为实现土壤、水等环境基质中毒死蜱残留的现场监测,保障环境质量安全,研究采用酶联免疫法快速检测环境中的毒死蜱。【方法】 以抗原抗体的特异性结合为原理,建立间接竞争 ELISA 酶联免疫检测环境中的毒死蜱。对试验条件进行优化,研究方法的灵敏度、交叉反应及有机溶剂对抗体的影响等。【结果】在最优条件下,毒死蜱质量浓度对数与吸光度值呈线性关系,回归方程为 B/B0= -24.87 logC + 97.55,相关系数 R2>0.99,毒死蜱的IC50=81.65 μg/L,检出限 IC20 为 5.1 μg/L。根据不同的基质选择合适的前处理方法并进行验证,毒死蜱回收率在70%~115% 之间,相对偏差在 11% 以内;方法的精密度相对偏差均小于 10%,与气相色谱法比对证明方法的准确性。在 180 d 内试剂盒储存于 4℃或 -20℃下均不影响检测效果。【结论】 建立的间接竞争 ELISA 酶联免疫法具有一定的特异性、稳定性和精确性,可应用于检测不同类型的土壤及水样中的毒死蜱,能够实现快速、灵敏的毒死蜱农药残留检测。     

异戊烯基腺嘌呤核苷（iPA）的间接酶联免疫吸附测定法

以ｉＰＡ－ＢＳＡ为免疫抗原制备了兔抗血清,与其它ｉＰＡ类似物的交叉反应率均低于５％,抗体－抗原亲和常数为６．２６＊１０＾６Ｌ．ｍｏｌ＾－１。利用此抗体与生物素－亲和素标记系统建立了ｉＰＡ的间接酶联免疫吸附测定法,检测线性范围为０．８－１０００ｎｇ．ｍＬ＾－１。     

用于测定多环芳烃的酶联免疫吸附分析法的研究

将芘丁酸(1-pyrenebutyricacid,PBA)通过活性酯法与牛血清白蛋白(BSA)共价结合,以PBA-BSA结合物为免疫原制备抗血清,利用该抗血清建立了测定多环芳烃类物质的间接竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA),并研究了10种多环芳烃与该抗血清的交叉反应。结果表明,该方法用于测定芘和芘丁酸的IC50值分别为0.132mg·L-1和0.253mg·L-1,检出限分别为0.1mg·L-1和0.01mg·L-1,该方法不受溶剂甲醇的影响,因此可以用于经过预富集的环境样品中多环芳烃类物质的测定。     

甲基对硫磷残留酶联免疫检测试剂盒的研制

合成了甲基对硫磷的半抗原,并与载体蛋白偶联合成了人工抗原,然后通过免疫的方法制备了其单克隆抗体.在筛选甲基对硫磷单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测苹果、玉米、蔬菜中甲基对硫磷残留的试剂盒.该试剂盒的灵敏度为0.5μg/L,对苹果、玉米、蔬菜样品的最低检测限分别可达到10、20、50μg/kg;加标回收率为70.3％～102.4％,变异系数为7.4％～13.0％;对实际样品的检测结果与气相色谱法基本一致.该方法快速、灵敏、可靠,为水果、蔬菜、谷物中甲基对硫磷的残留检测提供了便捷、准确的分析手段.     

酶联免疫吸附分析技术在农药残留分析中的应用

简述酶联免疫吸附分析技术的原理、方法类型以及关键的技术要点,并对该技术在农药残留分析检测中的应用前景进行了展望。     

草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立

通过碳化二亚胺法将草甘膦(Glyphosate,GLY)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原和包被原。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测表明,草甘膦与牛血清白蛋白和卵清蛋白的偶联比分别为11∶1和9∶1。合成的免疫原作用新西兰大白兔制备出草甘膦多克隆抗体,ELISA检测抗体溶液效价为1∶1×107,该抗体不与草甘膦的结构类似物增甘膦和双甘膦起交叉反应。以此抗体建立了草甘膦间接竞争ELISA检测方法(ciELISA),其线性范围为0.78～100μg/mL,线性回归方程为y=15.851 0 lnx+7.780 5,R2=0.993 8。草甘膦的检测限为IC10=1.15μg/mL,IC50=14.35μg/mL。在添加回收试验中,草甘膦添加值5和10μg/g时,玉米粉中的草甘膦回收率为104.12%和81.37%,小麦粉中的回收率则分别为118.94%和为109.39%。结果表明,采用所制备的多克隆抗体而建立的草甘膦ciELISA方法可有效地应用于玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留检测。     

农药残留检测中酶联免疫吸附技术的研究进展

随着农药种类和用量的不断增加,农药的残留对人体的危害以及食品进出口的影响日益严重,因此进行农药残留检测工作非常重要,其中最重要的是建立高效的检测方法。而EIA技术中的酶联免疫吸附(ELISA)技术特异性高、灵敏性强,在农药残留检测中的研究和应用也越来越多。笔者主要综述了农药残留的现状、酶联免疫吸附技术原理和分类及其在农药残留检测方面的应用,并根据当前研究现状及存在问题进行了研究展望并提出了发展建议。     

应用酶联免疫法快速检测水产品孔雀石绿残留

[目的]探讨酶联免疫检测法在快速检测水产品孔雀石绿残留中的应用。[方法]应用一种酶联免疫试剂盒对市场抽取的43份水产品中残留的孔雀石绿和隐性孔雀石绿进行快速检测。[结果]水产品中孔雀石绿和隐形孔雀石绿检出率为6.98%。[结论]该快速检测法可用于大批量水产品的孔雀石绿和隐性孔雀石绿快速筛查。