MDV-gB重组痘苗病毒诱导的免疫保护性试验

用MDV-gB重组痘苗病毒RVV-gB，HVT冻干苗、痘苗病毒WR株分别按试验程序，对细胞免疫及体液免疫检测试验中的1日龄SPF鸡进行免疫接种，并于15日龄对各组小鸡攻GA株强毒，后经过IFA检测抗体，以及以PHA为有丝分裂原检测淋巴C转化。结果表明，重组病毒和HVT冻干苗均获得较高保护，体液免疫差异不显著；细胞免疫在攻毒前差异不显著，但攻毒后第2d开始，RVV-gB组淋巴细胞转化率明显高于HVT冻干苗。?     

表达MDVgB基因重组痘苗病毒的构建及保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡马立克氏病毒(MDV)gB基因的重组痘苗病毒(RVV-gB), 表明该病毒在CV-1(猴肾细胞)细胞系内能稳定传代,经腹腔1×106 PFU·羽 -1 将重组病毒、HVT冻干苗及痘苗病毒分别按试验程序,免疫1日龄SPF鸡,并于15日龄以3×10 2PFU·羽-1MDV强毒株GA株攻毒,重组病毒和HVT冻干苗匀获得较高的保护, 结果证明了gB是MDV的宿主保护性抗原.此研究为CTL应答检测奠定了基础.     

表达MDV gB基因的重组鸡痘病毒的免疫效果研究

将马立克氏病病毒 (MDV)gB基因插入鸡痘病毒 (FPV)中 ,构建了含有MDVgB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV)。用rFPV、HVT冻干苗、rFPV +HVT疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,于 8日龄攻毒后观察疫苗免疫效果。实验结果表明 ,HVT、rFPV、HVT +rFPV疫苗免疫组比攻毒对照组病毒血症持续时间短 ;上述 3种疫苗免疫后用京 1株MDV(vMDV)攻毒 ,脾脏T淋巴细胞增殖反应处于较高水平 ,而攻毒对照组脾脏T淋巴细胞增殖反应减弱 ,两者差异显著(P <0 0 5 ) ;用HVT +rFPV二价疫苗免疫雏鸡 ,其抵抗vMDV攻击的免疫保护力高于HVT和rFPV单价苗 ,HVT +rFPV、rFPV、HVT免疫保护指数分别为 81 7% ,6 3 4 %和 6 4 1%。以上结果表明 ,表达MDVgB基因的重组鸡痘病毒疫苗在一定程度上能保护鸡体抵抗vMDV的攻击 ,并且HVT和rFPV具有免疫协同作用。     

鸡传染性法氏囊病基因工程活疫苗(VAXXITEK HVT+IBD)免疫效果评估

为评估鸡传染性法氏囊病基因工程活疫苗(VAXXITEK HVT+IBD)的免疫效果,以最小出厂剂量(HVT:2 000 pfu/只)经皮下接种1日龄SPF鸡,28 d后以传染性法氏囊病病毒标准强毒BC6/85株攻毒。攻毒后连续观察4 d,记录临床不良反应,至第4天剖检法氏囊。结果表明:试验鸡在临床上均表现正常;法氏囊剖检显示疫苗免疫组100%正常,攻毒组100%出现典型法氏囊病变。VAXXITEK HVT+IBD疫苗免疫鸡对传染性法氏囊病强毒攻击能产生良好保护。     

鸡马立克氏病毒抗独特型抗体苗免疫效果观察

探讨MDV(Marek’s Disease Virus)抗独特型抗体(Ab2)模拟抗原诱导抗MDV感染的能力。将MDV抗独特型抗体分别与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂按1：1比例乳化制备成抗体苗．对1日龄，10日龄SPF鸡进行两次免疫，同时设火鸡疱疹病毒疫苗(HVT)和非免疫空白对照。30日龄后用马立克氏病毒(MDV)标准Ⅰ型强毒——京-1毒行腹腔攻击，在第30天，第60天，第120天采血，分别检测免疫系统一淋巴器官重量、循环血淋巴细胞数量、病理组织学变化、孵化率及免疫抑制性反应。MDV抗独特型抗体苗免疫攻毒后淋巴组织器官增重、器官未见淋巴细胞浸润．120d保护率为83．45％．未见大肠杆菌继发感染发生。HVT苗免疫攻毒后淋巴组织器官，淋巴细胞的数量下降、出现病理损伤，120d保护率为73．80％。MDV感染法氏囊、脾脏的重量及循环血中淋巴细胞的数量减少，大肠杆菌的敏感性增加。MDV抗独特型抗体能诱导机体产生抗MDV感染保护。     

感染IBDV雏鸡血液ANAE^＋——淋巴细胞比例和IL—2水平的动态变化研究

研究了经IBD弱毒苗免疫和未免疫的30～50日龄AA鸡在感染传染性法氏囊病病毒（IBDV）后血液ANAE^ -淋巴细胞比例和白细胞介素-2（IL-2）水平动态变化。结果表明,血液ANAE^ -淋巴细胞（%）在攻毒后的头5d内未免疫攻毒鸡（A组）和免疫攻毒鸡（B组）明显下降,且A组比B组下降的更快,第5天A组明显低于未免疫未攻毒鸡（C组）,B组也较C组低,C组没有明显的变化,以后A和B组均回升,但B组比A组回升的快,至28d时A和B组均达到或接近攻毒前水平,并接近或高于C组。血浆IL-2水平A和B组在IBDV攻毒后的头7d内呈逐渐下降趋势,但A组下降的更剧烈,C组无明显差异性变化,三组相比,B和C组均高于或明显高于A组,以后A组和B组逐渐回升。     

基于马立克病毒的传染性喉气管炎病毒载体疫苗研制

以表达EGFP报告基因的重组I型马立克病毒疫苗株(CVI988/Rispens)rMDV-EGFP为母本病毒,通过同源重组的方法用表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB和gD基因的表达盒替换病毒rMDV-EGFP中的EGFP报告基因表达盒,分别获得了表达gB和gD基因的重组马立克病毒rMDV-ILTgB和rMDV-ILTgD。经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,证明重组病毒中插入的目的基因大小正确,且能够表达gB和gD目的蛋白。免疫效力试验结果表明:与弱毒疫苗相比,重组病毒rMDV-ILTgB和rMDV-ILTgD均可对ILTV强毒攻击提供更好的免疫保护。重组病毒免疫组试验鸡不仅在发病率、致死率和攻毒后体重增长等指标方面与攻毒对照组均存在显著差异,而且与常规弱毒疫苗免疫组在致死率和攻毒后体重增长指标方面也存在显著差异。     

马立克氏病毒京-1株对不同日龄SPF鸡的致病力试验

将60羽SPF鸡随机分为3组,选取马立克氏病毒标准毒株京-1株分别对10日龄组和21日龄组鸡进行人工感染试验,对照组注射同等剂量的稀释液。结果显示：两组攻毒组试验鸡均于接种病毒后18d开始发病,并于20～25d出现死亡高峰,26d开始逐渐缓解。两组鸡的死亡率分别为80%和60%,肿瘤发生率分别为80%和65%,肿瘤主要出现在心脏、肝脏、脾脏、肾脏和坐骨神经等组织,其中10日龄攻毒组2～3个器官发生肿瘤的个体占65%,4个及以上器官发生肿瘤的个体仅占5%,21日龄攻毒组2～3个器官发生肿瘤的个体仅占35%,4个及以上器官发生肿瘤的个体达到20%。由此说明,10日龄SPF鸡对京-1株MDV敏感,而21日龄该品系鸡对之敏感性略低。     

毒害艾美耳球虫早熟株对鸡免疫效果的评价

[目的]探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据.[方法]取4日龄健康、体质量50～70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡地面饲养,试验期81 d.对照组、免疫组(免疫组包括一免组和二免组)鸡饲喂基础日粮,盐酸氨丙啉添加组鸡按照药物说明全程基础日粮加盐酸氨丙啉拌服.一免组鸡4日龄一免,剂量1 000个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊;二免组鸡53日龄二免,剂量200个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊.鸡25日龄、53日龄、74日龄时从地面饲养的各组随机抽取6只鸡移到笼上饲养,同时设置红对照组(鸡不免疫不喂药仅攻毒).笼养鸡除对照组外,其他组鸡均攻毒,攻毒方法为逐只鸡经口接种毒害艾美耳球虫亲本株(10X104个孢子化卵囊/只).肉眼观察鸡临床症状,测定鸡平均相对体增质量、小肠病变记分、小肠病变记分减少率、存活率、卵囊减少率与抗球虫指数等指标.[结果]免疫鸡攻毒后,临床观察对照组鸡精神状态良好,未出现任何异常症状;免疫组与红对照组相比精神状态良好、血便减少.不同日龄鸡(25日龄、53日龄和74日龄)攻毒后第7天,盐酸氨丙啉添加组和免疫组鸡相对体增质量均明显低于对照组但极显著高于红对照组且二免组高于一免组.免疫组鸡小肠平均病变记分均低于红对照组,小肠病变记分减少率高于红对照组,其中二免组不同日龄攻毒后鸡小肠平均病变记分均低于一免组,且74日龄鸡攻毒后小肠病变记分减少率最高.红对照组不同日龄鸡卵囊数极显著高于盐酸氨丙啉添加组和免疫组,其中免疫组53日龄鸡和74日龄鸡攻毒后卵囊数均显著高于盐酸氨丙啉添加组,卵囊减少率低于盐酸氨丙啉添加组,且二免组74日 龄鸡攻毒后卵囊减少率高达90％.免疫组不同日龄鸡抗球虫指数极显著高于红对照组,二免组不同日龄鸡抗球虫指数均高于145且高于一免组,即二免组鸡抗球虫效果达到中效水平.[结论]毒害艾美耳球虫早熟株2次免疫对鸡具有良好的保护效果,且对鸡生长发育的影响较小.     

H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护试验

应用表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原(SPF)鸡群,于免疫后采血测定HI抗体效价,并于免疫后第21天攻毒,攻毒后2～13d进行泄殖腔棉拭子采样,接种鸡胚测排毒情况。各免疫组在免疫后7～20d的HI抗体效价逐渐上升,但不同剂量组间、不同传代代次间有差异;攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少,且不同攻毒毒株组间无差异。重组苗组在攻毒后第2天仅有8%排毒,第5天则无排毒;灭活油苗组在攻毒后第2、5、7天分别有52%、12%、4%排毒,直到第9天才不排毒;空白攻毒组在攻毒后2～13d排毒率由92%缓慢降至8%。结果表明:研制的表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒载体疫苗具有较高的免疫保护效力,不低于灭活油苗,且在抑制早期排毒、防止群内传播方面优于灭活油苗。     

实验性鸡马立克氏病免疫病理学研究 Ⅴ:免疫器官中T淋巴细胞的动态变化

本研究对健康和免疫后接种京毒—1号MD强毒鸡中枢免疫器官中ANAE~+T淋巴细胞和淋巴细胞总数的动态变化进行了观察。结果表明:健康攻毒组免疫器官中的淋巴细胞总数在攻毒后明显减少。T淋巴细胞在攻毒后15天以前保持在较高的水平,之后明显下降;免疫攻毒组免疫器官中淋巴细胞总数减少发生的晚而轻微,而ANAE~+T淋巴细胞在攻毒后则持续性高于健康对照组。     

人工感染MDV雏鸡免疫器官中PMG~ 浆细胞动态观察

本研究对健康和免疫后接种京毒—1号MD强毒鸡中枢免疫器官中PMG~ 浆细胞的动态变化进行了观察。结果表明:健康攻毒组免疫器官中的PMG~ 浆细胞数在攻毒后3天开始下降,15～20天后迅速回升,30天左右达到峰值,以后又迅速下降;而在免疫攻毒组,免疫器官中的PMG~ 浆细胞数在20天以前一直处于较高的水平,之后和对照组差异不明显。     

雏鸡HVT疫苗免疫后淋巴细胞化学发光的变化

分别于７，１４，２８，４２和５６日龄分离火鸡疱疹病毒疫苗组（Ｈ）和健康对照组（Ｃ）雏鸡的淋巴细胞并测定其化学发光（ＣＬ）值。结果，Ｈ组雏鸡不同时期胸腺、脾脏和法氏囊各免疫器官淋巴细胞ＣＬ值均不同程度高于ｃ组雏鸡（Ｐ＞０．０５，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。提示火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗促使淋巴细胞产生高水平的活性氧自由基，从而发挥ＨＶＴ的免疫保护作用     

CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

 将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射 ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明 ＣｐＧ ＤＮＡ佐剂增强了 ＩＬＴＶ ＤＮＡ疫苗的免疫效果。     

传染性喉气管炎病毒河南株gB基因的克隆与序列分析

根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的核苷酸序列,设计、合成1对引物,应用PCR扩增鸡ILTV河南株(ILTV-CG)gB基因.将扩增片段克隆入pGEM-T Easy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序.结果表明克隆到ILTV-CG株gB基因,全长为2 629 bp,包含一个完整的开放阅读框,共编码873个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有8个潜在的N-糖基化位点,有12个与二硫键形成有关的半胱氨酸.序列分析表明,ILTV-CG株gB基因与GenBank中读取的澳大利亚SA2疫苗株、辽宁疫苗株、烟台株、美国632强毒株、英国Throne强毒株gB基因核苷酸序列同源性为99%以上,与ILTV-SA2株gB基因比较发现,ILTV-CG株gB基因核苷酸序列在第89位均缺失1个碱基G,而在第102位又插入1个碱基A,从而引起该毒株gB基因推导的氨基酸序列中第28～32位5个氨基酸的移码突变.     

新鱼腥草素钠纳米乳佐剂对肉仔鸡免疫功能的影响

以新鱼腥草素钠纳米乳为免疫佐剂,将其混入传染性支气管炎灭活疫苗,探讨其对肉仔鸡免疫功能的影响。选150只1日龄黄羽肉鸡,随机分成3组,第1组用新鱼腥草素钠纳米乳佐剂疫苗,铝胶佐剂疫苗为阳性对照组作为第2组,第3组为空白对照组(PBS)。免疫后21d(35日龄)采用IBV M41株病毒液进行点眼、滴鼻攻毒。通过测定每组鸡淋巴细胞(PBMC)增殖情况、鸡血清抗体效价、IBV强毒株攻毒保护及组织病理学变化。结果表明:新鱼腥草素钠纳米乳佐剂组PBMC增殖指数、鸡血清抗体效价水平显著提高(P0.05),在IBV M41株攻毒试验中,新鱼腥草素钠纳米乳佐剂组可显著减轻病毒感染肉仔鸡临床症状,肺和肾无明显组织病理学变化,免疫保护率达到96.7%。这表明以新鱼腥草素钠纳米乳佐剂能提高肉仔鸡对传染性支气管炎的免疫力。     

Antiviral Activity of Allokin-Alpha against Herpesvirus in Birds

The article reports the efficacy assessment for the Allokin-alpha (Allokin) preparation by modeling the experimental viral infection in vivo in poultry (day-old chickens). The experimental infection included the following steps: vaccination using the vaccine HVT strain, the intramuscular injection of Allokin, and the preparation of feather follicle extracts. The specific antigen was detected in the feather follicle epithelium using the method of gel diffusion precipitation reaction (DPR). A decrease in the number of positive DPR test results for HVT antigen was observed in the case of Allokin-alpha treatment. It has been demonstrated that the optimal time for the Allokin-alpha administration was on the tenth day after the vaccination with HVT as soon as the number of positive DPR results was 33%, while the number of positive results was 50% when the tested preparation was administered 5 and 15 days after the vaccination (samples were collected on day 28 after the vaccination). Since Allokin-alpha has been successfully used to treat human papillomavirus for 15 years, it may also work well as an antiviral agent in the experimental viral infection simulation by the inoculation of vaccine HVT strain; the preparation is not species specific.     

鸡马立克氏病疫苗不同接种途径对免疫效果的影响

用 CVI988+HVT二价细胞结合苗分别以气雾、点眼、滴鼻、皮下注射 4种不同途径免疫 1日龄雏鸡 ,另设一组鸡作为非免疫对照组 .免疫后第 8d,每组鸡均用 MDVBJ- 1强毒攻击 ,气雾、点眼、滴鼻和皮下注射免疫保护指数分别为 7.89%、7.30 %、9.19%和 6 7.0 2 % .皮下注射免疫组与其他免疫组之间差异极显著 (P<0 .0 1) ;气雾、点眼、滴鼻以及非免疫对照组之间差异不显著 (P>0 .0 5) .结果表明皮下注射免疫组的免疫效果最好 .     

胸腺制剂对鸡马立克氏病疫苗免疫增强作用的研究

将一日龄ＳＰＦ来航鸡分成４组，饲养在隔离器中。第１组１日龄接种ＭＤ疫苗，同时皮下注射０．５ｍＬ胸腺制剂；第２组１日龄接种ＭＤ疫苗时不加免疫增强剂；第３组、第４组均不接种ＭＤ疫苗，也不注射免疫增强剂。第１、２、３组于１３日龄时用ＢＪＭＤＶ－１强毒株攻毒。结果显示：第１组、第２组、第３组分别于攻毒后２８、２４、１７ｄ开始出现死亡，第４组没有死亡。第１组的攻毒保护率为４０．０％，比第２组保护率１５．０％有明显提高。此外，于１１、２８、５６日龄时检测了外周血液中Ｔ淋巴细胞百分率。２８日龄和５６日龄时第１组的外周血Ｔ淋巴细胞活性高于第２组。试验结果表明胸腺制剂对鸡马立克氏病疫苗有免疫增强作用。     

术前肠内营养对胃癌患者围手术期作用的研究

目的研究胃癌患者术前肠内营养支持对机体免疫功能的影响．方法选择择期手术的胃癌患者50例,随机分为两组,术前术后肠内营养组（观察组）;术后肠内营养组（对照组）．两组患者均从术后24h起自营养管给予等热量、等氮量的肠内营养剂．观察组于术前7d起口服能全力（纽迪西亚公司）500mL／d至术前1d．术前、术后第1,8天抽取静脉血,检测白蛋白、转铁蛋白、前白蛋白指标;外周血;T淋巴细胞．结果两组患者术后均有免疫功能的降低,但观察组比对照组术后第1,8天的CD4／CD8比值IgG水平显著增加;术后第8天的前蛋白浓度显著增加．结论胃癌患者围手术期（术前术后）使用肠内营养剂,可以有效改善患者的免疫功能．