苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的研究进展

从Bt基因的分类、结构和特性、杀虫机理、在农业上的应用及昆虫对Bt产生抗性的机制等方面进行了论述。     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因工程研究进展

概述苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的结构、功能及其基因分类,综述苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因工程研究及应用。     

十株Bt野生菌杀虫晶体蛋白及基因型分析

利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析方法,分析了从我国千山地区不同森林地带土壤中分离的10株Bt菌的32类杀虫晶体蛋白基因类型和表达蛋白。研究表明,电镜照片显示晶体形状较为多样,有长菱形、菱形、方形、球形。同时含有cry1、cry7、cry16类基因的有1株菌,同时含有cry1、cry2类基因的有1株菌,含有cry30类基因的有1株菌,含有cry1基因的有3株菌,4株菌不含所鉴定的32类基因。同时也发现,绝大多数含有cry1基因的菌株表达了130ku蛋白,含有cry2基因的菌株表达了60ku的蛋白,含有cry30基因的菌株表达了30ku的蛋白。     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因crylA的克隆及特征分析

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillus tburingiensis subsp sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据crylA类基因序列设计特异引物，应用PCR技术从该茁株中扩增得到一大小约为3．6kL的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在ABI PRISM377自动测序仪上对其5’及3’端进行部分测字，结果表明其核苷酸序列与crylA基因高度同源。     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1A的克隆及特征分析

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillus thuringiensis subsp.sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力.根据cry1A类基因序列设计特异引物,应用PCR技术从该菌株中扩增得到一大小约为3.6kb的DNA片段.将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α.在ABI PRISM377自动测序仪上对其5′及3′端进行部分测序,结果表明其核苷酸序列与cry1A基因高度同源.     

Bt杀虫晶体蛋白-肠溶性微囊制备方法的初步研究

[目的]研究Bt(Bacillus thuringensis)晶体蛋白肠溶性微囊的制备方法,为进一步研究它对防止紫外线损伤晶体蛋白及促进晶体蛋白在害虫中肠快速释放等方面的作用奠定基础;[方法]用复相乳液法制备肠溶性微囊,并应用L16(45)正交试验设计研究相关因子对微胶囊包封率的影响;[结论]采用复相乳液法可以制备Bt晶体蛋白的肠溶性微囊.5个因子对包封率有显著影响.影响大小依次为乳化转速>HPMCP浓度(壁材)>Bt晶体蛋白含量(芯材)>蓖麻油含量(助剂)>甲基纤维素浓度(亲水胶体).以500m1分散系为条件,筛选出的肠溶性微胶囊较佳工艺为:8.6mg/mL Bt晶体蛋白溶液1ml,20mg/mL HPMCP溶液50ml及蓖麻油2ml,三者混合并在匀化器转速6000r/min下乳化.而后分散于2.1%或3.3%甲基纤维素钠溶液中成囊.     

杀虫晶体蛋白基因CrylAc在生防菌B-916中的表达

枯草芽孢杆菌生防菌B-916对水稻纹枯病和稻曲病具有良好的防治效果，为拓宽其防治范围，兼治病虫害，本研究采用B-916内源芽孢形成期特异表达启动子成功实现了杀虫晶体蛋白基因CrylAc在野生型生防菌B-916的高效表达，成功构建了兼治水稻病、虫害的工程菌E-916。经SDS—PAGE电泳分析，异源CrylAc基因在对数生长后期其表达产物杀虫晶体蛋白占到胞内总蛋白的28％。杀虫和抑菌试验结果表明构建的工程菌对水稻二化螟具有杀虫活性，且保持了其原有对水稻纹枯病的拮抗性能。构建的工程菌具有良好的分离稳定性，连续培养25h，稳定性高于95％；连续培养50h稳定性高于70％；连续稀释培养50h，质粒丢失频率为每代小于10^-3个。     

Bt工程菌高性能载体研究进展

近30年来,以苏云金杆菌为基础利用ICPs基因构建性能优良的重组菌株和生产遗传重组杀虫剂成为生物农药公司的主要目标。生物工程杀虫剂相继商品化,用于防治重要经济作物的害虫。为了增强工程菌的杀虫效果,研究者在构建高性能载体方面开展了大量研究并取得显著进展。文章对该领域研究进展做一简要综述。     

杀虫晶体蛋白基因Cry1Ac在生防菌B-916中的表达

枯草芽孢杆菌生防菌B-916对水稻纹枯病和稻曲病具有良好的防治效果,为拓宽其防治范围,兼治病虫害,本研究采用B-916内源芽孢形成期特异表达启动子成功实现了杀虫晶体蛋白基因Cry1Ac在野生型生防菌B-916的高效表达,成功构建了兼治水稻病、虫害的工程菌E-916.经SDS-PAGE电泳分析,异源Cry1Ac基因在对数生长后期其表达产物杀虫晶体蛋白占到胞内总蛋白的28%.杀虫和抑菌试验结果表明构建的工程菌对水稻二化螟具有杀虫活性,且保持了其原有对水稻纹枯病的拮抗性能.构建的工程菌具有良好的分离稳定性,连续培养25 h,稳定性高于95%;连续培养50 h 稳定性高于70%;连续稀释培养50 h,质粒丢失频率为每代小于10-3个.     

昆虫中肠Bt毒素受体氨肽酶N的研究进展

氨肽酶N(APN)是昆虫中肠中主要的Bt毒素受体,它与Cry毒素特异结合后,毒素插入细胞膜,在膜上形成孔洞,细胞裂解,最终导致昆虫死亡.APN的变异导致昆虫对Bt敏感性下降甚至产生抗性.就APN的结构特征、分类、APN与Cry毒素的相互作用机制以及APN与昆虫Bt抗性的关系作一综述.     

苏云金杆菌菌液与化学农药混用毒杀菜青虫的增效作用

ｔ菌液与０．０２５％敌百虫剂或０．０２５％乙酰甲胺磷剂以不同比例混用对菜青虫毒杀有不同程度的增效作用。Ｂｔ菌液与０．０２５％敌百虫剂以１∶１，１∶３和３∶１配比混用增效作用明显，杀虫率比Ｂｔ菌液单剂提高３０％。田间试验表明Ｂｔ菌液与敌百虫１∶１混用时防治菜青虫的效果可达８８％。     

Bt伴胞晶体毒素对小鼠体内不同时期日本血吸虫的作用

血吸虫病是世界上最重要的人畜共患寄生虫病之一,当今世界上仍有74个国家6亿多人口在血吸虫的威胁之中,这些国家分布在亚洲、非洲、南美洲。据世界卫生组织估计,全世界现有2亿人口感染了一种或一种以上血吸虫。每年死于血吸虫病的人数超过10万,造成巨大的社会经济损失。我国仍有7省119个县的血吸虫病未得到有效的控制,     

高毒力苏云金杆菌CAB109菌株的蛋白质特性及其田间防效

对甜菜夜蛾等害虫具有高毒力的苏云金杆菌CAB109菌株进行生物学特性调查结果表明,CAB109菌株的伴孢晶体具有典型的菱形结构;其原毒素蛋白的分子量为133kDa,经胰蛋白酶处理后水解为66kDa的活性毒素蛋白．DNA凝胶电泳显示：CAB19菌株的质粒DNA与同样H,血清型的已知HD-133菌株不同．CAB109菌株对葱田甜菜夜蛾的平均防效达75．3％,高于常用化学农药和微生物农药的防效;平均挽回损失率也达26．0%表现出优良的开发潜力．     

苏云金芽胞杆菌研究进展

论述了苏云金芽胞杆菌的作用范围、ICPs基因的多样性、杀虫机理、基因工程以及产业化研究的进展情况。     

苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7杀虫晶体蛋白多样性分析

分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1 Ba、cry1 Ia、cry2Ab、cry2Ac、cr...     

纯化的苏云金杆菌00-50-5晶体和芽孢对甘蓝尺蠖的杀虫活性

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)00-50-5菌株可以高效地杀死多种鳞翅目昆虫害虫。为了深入研究该菌的治病机理和作用方式,首先需要分离和纯化晶体和孢子,研究它们的杀虫活性。本研究用纯化后的00-50-5菌株晶体和芽孢,比较它们对昆虫甘蓝尺蠖(Trichoplusia ni)的杀虫活性。初步的活性测定结果证实,在用100μg/mL浓度处理48 h后,00-50-5菌株纯晶体以及晶体和孢子混合物都能够杀死二龄甘蓝尺蠖幼虫,死亡率达100%,纯芽孢则无毒杀效力。致死中浓度(LC50)的测定结果表明,Bt 00-50-5菌株纯晶体的杀虫活性(LC50=0.32μg/mL)高于晶体和孢子的混合物(LC50=0.48),然而纯孢子的杀虫活性是非常低的(LC50大于500.00)。因此,00-50-5的晶体主要负责引起幼虫的死亡。     

苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因定位研究进展

苏云金芽孢杆菌是目前应用最广泛的杀虫微生物,其活性成分主要是杀虫晶体蛋白、营养期杀虫蛋白和几丁质酶等,本文对编码这些蛋白的基因的定位作一综述,有助于进一步研究基因结构、功能、表达和调控.