不同诱导剂对山羊精子体外获能和受精能力的影响

比较不同获能诱导剂对山羊精子体外获能及受精能力的影响,优化山羊早期胚胎体外生产技术体系。山羊精子分别以不同浓度肝素、IA和EGS处理后,检查精子获能率、活力和体外存活时间,同时与体外成熟的卵母细胞受精,观察不同获能处理对精子受精能力的影响。在培养液中添加5,10,20μg／mL肝素,都能促进精子获能,其中10μg／mL组的获能率达到55．6％,存活时间为18～19h;低于此浓度,获能率显著降低,高于此浓度,获能率升高不显著,但精子存活时间和活力明显下降。0．1,0．4,0．7μmol／LIA都能提高精子获能率,其中0．4和0．7μmol／L处理组精子获能率最高,分别为56．2％和53．6％,但两组中的精子活力和存活时间有明显差异。5％,10％和20％EGS都能提高精子活力,延长体外存活时间,但实验组的获能率最高不到20％。10％EGS获能组的受精率和卵裂率分别为27．9％和18．6％,显著低于10μg／mL肝素和0．4μmol／L IA组,后两者的受精率相似,但IA组的卵裂率明显高于肝素组（52．0％VS40．2％,P〈0．05）。10μg／mL肝素和0．4μmol／L IA都可诱导山羊精子高水平获能,并获得较好的受精能力,但IA表现出更强的促卵裂发生效应。     

不同冻精处理方法和添加咖啡因对牛体外受精的影响

【目的】为了探讨不同冻精处理方法以及添加精子活力激活剂并孵育不同时间获能对体外受精及受精卵发育的影响。【方法】研究对体外受精前的牛冷冻精液分别采用直接离心法、上游法和Percoll法3种方法处理,并对处理后的精液分别用含2.5mM或5.0mM咖啡因的获能液（BO液＋10μg/ml肝素钠）在培养箱内预先孵育10min或30min进行获能,不同处理的精子经体外受精后。【结果】结果表明：（1）3种冻精处理方法（直接离心洗涤法、上游法、Percoll法）对精子处理获能,IVF后受精卵的卵裂率（依次为51.58%、52.83%、53.20%）均无显著差异（P＞0.05）;桑椹胚、囊胚发育率Percoll法处理组（16.66%、10.18%）与上游法处理组（17.85%、16.07%）以及Percoll法处理组与直接离心洗涤法组（8.77%、7.01%）均无统计学差异（P＞0.05）,同时实验结果还表现出上游法处理组比Percoll处理组的桑囊胚率有所提高,且上游法处理组与洗涤法处理组在桑、囊率上出现了显著差异（P＜0.05）。（2）获能液中添加咖啡因组比非添加组(对照组)卵裂率和桑囊胚率有所增加,其中添加5.0mM咖啡因组精子孵育30min的获能效果最佳,卵裂率、桑囊率达到68.59%、28.50%。【结论】以上结果表明上游法处理牛冷冻精液稍优,更有利于以后的受精卵发育;添加咖啡因能提高精子活力,且高浓度的咖啡因维持精子高活力持续时间较长。     

奶牛性控胚胎体外生产的影响因素及控制措施

针对奶牛胚胎体外生产环节,对体外受精和培养等技术进行了研究,旨在建立奶牛性控胚胎体外生产技术体系。结果表明,卵母细胞外周卵丘细胞至少保持3层以上,在成熟基础液中添加10 ng/ml的EGF,利于核质成熟;在精子获能液中添加咖啡因降低精子的存活时间;牛胚胎前3 d用CR1aa+BSA培养,再用SOFaa+5%FBS培养,获得高的囊胚发育率,并且添加50 ng/ml IGF-I后胚胎的发育得到了很大的改善。利用性控精液进行体外受精,受精率有轻微下降,但对生产的胚胎发育质量无明显（P>0.05）影响,胚胎移植后受胎率为40%左右。     

板蓝根生物碱抗猪细小病病毒的作用

摘 要:【目的】探讨板蓝根水溶性生物碱和脂溶性生物碱对猪细小病毒的体外抑制作用。【方法】采用醇提法从板蓝根中提取了水溶性生物碱和脂溶性生物碱,并测定其对PK-15细胞的最大无毒浓度（TD50）,应用先加药后接种病毒、先接种病毒后加药、病毒和药物体外作用2h后再同时加入细胞单层三种加药方式测定了生物碱的体外抗PPV效果。【结果】板蓝根水溶性生物碱的TD0为62.5μg /ml,板蓝根脂溶性生物碱的TD0为50μg /ml.板蓝根水溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为7.81μg /ml、15.62μg /ml、7.81μg /ml。板蓝根脂溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78μg /ml、12.5μg /ml、0.78μg /ml。板蓝根混合生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78μg /m、12.5μg /ml、0.78μg /ml。【结论】板蓝根脂溶性生物碱的抗病毒作用强于板蓝根水溶性生物碱,板蓝根混合生物碱的抗病毒作用比两种生物碱单独使用效果要好。     

透明带诱导绵羊精子顶体反应的研究

为探讨绵羊透明带（zona pellucida,ZP）对其精子顶体反应的诱导作用,实验分为3组：（1）不经获能处理的精子与透明带共孵育;（2）精子经获能处理后与透明带共孵育;（3）不经获能处理的精子与透明带共孵育,然后IA23187（添钙离子载体,calcium ionophore A23187）,来观察透明带对精子顶体反应的诱导效果。结果显示获能与否并不影响透明带对精子顶体反应的诱导效果,添加IA23187后,顶体反应(acrosome reaction,AR)升高,但差异不显著（P>0.05）。说明透明带可诱导绵羊精子(无论获能与否)发生顶体反应,IA23187不能提高透明带对顶体反应的诱导作用。     

睾丸提取液、EGF、雌激素对小鼠精原干细胞 体外存活和增殖的效果

为探讨成年小鼠睾丸提取液（testicular abstract, TA）、表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）、雌二醇-17β(estradiol-17β, E2)对小鼠精原干细胞（spermatogonial stem cells, SSCs）体外存活及增殖的作用。用胶原酶-胰蛋白酶消化、差速贴壁法分离8 d小鼠的SSCs，培养于STO细胞饲养层上，培养液中分别添加不同浓度的TA、EGF和E2，观察SSCs的存活时间和增殖能力。结果显示，添加3种因子后，SSCs的平均存活时间与对照组相比虽无显著差异。但在20~40 ng/ml EGF和10~100 pg/ml E2组中SSCs的平均存活时间均明显延长，且在较长时间段内观察到了处于明显增殖期的细胞。提示20~40 ng/ml EGF和10~100 pg/ml E2对小鼠SSCs的体外存活和增殖具有一定良好作用。     

稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响

【摘要】目的：研究在冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响,以优化犬精液冷冻方案,提高解冻后精子质量。方法：在犬的常规精液冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因和谷胱甘肽,经细管冷冻,解冻后通过分别评价其精子的活率、形态（包括顶体完整率和畸形率等）等来筛选其最佳添加浓度。结果：经解冻后的精液质量评价如下：（1）向稀释液中添加5mmol/L咖啡因对解冻后精子活率明显改善,为0.33±0.04（P﹤0.01）,显著高于其他组;当添加浓度为12.5mmol/L时,活率仅为0.230±0.04（P﹤0.01）,显著低于对照组;添加浓度为5mmol/L时精子畸形率最低,为0.174±0.036（P﹤0.01）,较其它组差异显著。（2）向稀释液中添加谷胱甘肽5mmol/L,精子活率为0.31±0.054,顶体完整率为0.438±0.022,畸形率仅为0.162±0.025,均优于其他浓度组,差异显著（P﹤0.01）。 结论：在犬的精液冷冻液中分别添加适量浓度的咖啡因或谷胱甘肽均对冷冻效果有显著的促进作用。     

大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结中淋巴细胞增殖的影响

为了研究大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结中淋巴细胞增殖与活化的影响,并揭示大豆异黄酮提高奶牛免疫性能的作用机理。试验采用6×2（浓度×时间）实验设计,各浓度梯度的大豆异黄酮 (100.00、25.00、5.00、1.00、0.25、0.05 μg/mL)与淋巴细胞共育培养48 h和60 h后,用酶标仪在570 nm处测得各孔的OD值。结果表明：（1）添加0.05~25 μg/mL大豆异黄酮能够促进奶牛肠系淋巴结中淋巴细胞的增殖,在添加量为5 μg/mL时达到极显著的促进作用,但大豆异黄酮添加剂量达100 μg/mL时显著抑制肠系淋巴结淋巴细胞的增殖;（2）100 μg/mL和25 μg/mL大豆异黄酮添加组极显著抑制奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.01),而1 μg/mL浓度组则显著促进奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.05),其余各浓度组对奶牛脾脏淋巴细胞有抑制作用,但差异不显著。     

咖啡因和维生素E对小尾寒羊精液冷冻保存的影响

研究冷冻稀释液中分别添加不同浓度的咖啡因和维生素E后对小尾寒羊精液冷冻保存的影响。将不同浓度的咖啡因和维生素E分别添加于冷冻前的小尾寒羊精液稀释液中,用精子活率、顶体完整率和畸形率,作为判定精子冷冻品质的指标,初步确定2种稀释液添加成分对小尾寒羊精液品质的影响。当添加维生素E的浓度为0.4mg/mL时,冷冻后的精子活率较高,畸形率较低,且精子顶体完整率也较高;添加5mg/mL咖啡因能显著提高精子的解冻后活率,其活率为0.35,对精子畸形率和顶体完整率无显著影响。在冷冻精液稀释液中添加适当浓度维生素E可以减缓冷冻对精子的伤害,提高小尾寒羊冷冻精子活率,改善冷冻精液的品质;当添加5mg/mL的咖啡因于稀释液中冷冻时,解冻后精液活率显著提高,但不影响精子畸形率和顶体完整率。     

犬精液冷冻方法的优化试验

摘要：本试验为提高犬的精液冷冻效果,冷冻保存液配方中添加不同浓度糖（葡萄糖,果糖）,平衡时间以及熏蒸时间做系统对比。经系列分组试验发现,含0.5 %果糖组中精子活力显著高于其它组别（P<0.05）;平衡时间120 min（P<0.05）;熏蒸时间20 min冷冻效果较好。结果表明犬精子冷冻液添加低浓度果糖优于葡萄糖,而且平衡时间为120 min,熏蒸时间为20 min可得到稳定的冷冻效果。关键词：犬;:精子;葡萄糖;果糖;:冷冻保存     

外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响

了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10 μg/mL FSH +10 μg/mL LH（对照组）和0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明,对照组卵母细胞的生发泡破裂率(75.0%)和极体率(79.6%)均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组(P<0.05),而囊胚率各组之间均无显著差异(P>0.05)。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。     

河水中噻菌灵和敌百虫的SPE-RP-HPLC分析

为了对河水中噻菌灵和敌百虫残留进行高效的富集纯化和测定,建立了噻菌灵和敌百虫固相萃取-反相高效液相色谱法进行检测。河水中的噻菌灵和敌百虫用3 mol/L Empore 6 mL C18固相萃取小柱进行固相萃取。以Shim-pack VP-ODS 150 mm × 4.6 mm柱为分析柱,优化得到高效液相色谱分离条件：流动相为乙腈:水=75:25(V/V),流速为0.8 mL/min,进样量20 μL。结果表明,噻菌灵和敌百虫在0.13~97.92 μg/mL (r=0.9961)、0.02~50 μg/mL (r=0.9994)浓度范围内与峰面积成良好线性关系,检出限分别为0.09 μg/mL、0.01 μg/mL,噻菌灵和敌百虫的回收率为87.6%~101.3%,相对标准偏差为1.7%~2.77%。可以看出,该方法操作简便快速,可作为河水中噻菌灵和敌百虫含量监测的控制方法。     

平菇、杏鲍菇和白灵菇菌丝多糖对·OH、DPPH·和NO_2~-的体外清除作用

为明确平菇、白灵菇和杏鲍菇菌丝多糖对·OH、DPPH·和NO2-自由基的清除能力。利用热水浸提法提取菌丝多糖,Sevag法纯化多糖,利用多功能酶标仪测定对·OH、DPPH·(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)、NO2-的清除率,利用DPS软件和MicroOrigin软件进行数据分析。结果表明,在200～2000μg/mL浓度范围内,白灵菇B10、杏鲍菇PL7和平菇P89菌丝多糖对DPPH·的清除率为5.98%～51.96%,EC50值分别为1.98、2.74和3.28mg/mL;对·OH清除率为43.51%～98.09%,PL7的EC50值溢出最小值,B10和P89的EC50值分别为49.6μg/mL和467.3μg/mL;对NO2-的清除率为10.22%～26.75%,P89的EC50值为5.3mg/mL,PL7和B10的菌丝多糖浓度高于500μg/mL时,清除率不再增加,最高值分别为18.53%和17.52%。菌种间抗氧化能力差异明显,同一菌株对不同自由基的清除能力也存在显著差异。3种供试菌种多糖具有较强的清除·OH能力,中等的清除DPPH·能力和较差的清除NO2-能力。杏鲍菇PL7和白灵菇B10菌丝多糖的清除·OH和DPPH·能力较强,而平菇P89具有较强的清除NO2-能力。     

梨属植物ISSR技术体系的建立与优化

本研究以雪花梨为材料,对ISSR反应体系中的模板用量、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等一些重要参数进行探索和优化,初步建立了稳定的具有广泛适用性的梨属植物ISSR技术的反应体系及扩增程序,即20 μL体系中含1×buffer (内含1.5 mmol? L-1 MgCl2)、模板DNA 40～60 ng、引物浓度为0.2 μmol?L-1、 dNTP 200 μmol?L-1、Taq DNA聚合酶 1U。扩增程序为：94℃ 5 min、退火60s、72℃延伸120 s,然后连续39个循环为94℃ 60s、退火温度(52℃左右)60s 、72℃延伸120s,完成最后一个循环后,在72℃继续延伸10 min,然后在4℃保温,最后通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。     

外源激素对鸡冠花离体培养及试管成花的影响

本文以鸡冠花试管苗去顶芽茎段为试料,探讨了MS培养基中添加5种外源激素（IAA、NAA、6-BA、KT、GA3）对鸡冠花试管成花的生物学效应。结果表明：生长激素IAA与NAA对鸡冠花的生根和成花有促进作用,IAA 0.5 mg/L、NAA 1.0 mg/L时成花率均可达到100%,且以IAA 0.5 mg/L时单株成花数最高;KT对植物的分化和开花有促进作用,1.0 mg/L时开花率达到100%,而6-BA对鸡冠花生根与成花有抑制作用;GA3有利于鸡冠花试管苗花芽诱导形成,当浓度为0.5~1.5 mg/L时,成花率均为100%。鸡冠花试管苗的生根状况对其成花有一定的影响,生根率与成花率、平均单株花数呈极显著正相关。     

龙眼果皮酶促褐变产物的提取、稳定性及抗氧化活性研究

为了研究龙眼果皮酶促褐变产物的最佳提取工艺、稳定性和抗氧化活性,以样品中总蒽醌含量为指标,通过单因素和正交试验法,考察乙醇的浓度、料液比、提取时间、提取温度4个因素对应用回流法提取褐变产物的影响,探讨提取龙眼果皮中酶促褐变产物的最佳工艺条件。采用分光光度法对褐变产物的稳定性和体外抗氧化活性进行了测定。结果表明,回流法提取酶促褐变产物最佳工艺条件为：乙醇浓度为70%,提取时间为8 h,料液比为1:2,提取温度为40℃。在试验温度范围内,酶促褐变产物比较稳定;但对光照比较敏感,尤其是在紫外光下稳定性较差;在酸性条件下的稳定性比在碱性和中性条件下好;在4种不同种类添加剂影响下,其稳定性均变差。体外抗氧化试验结果表明,龙眼果皮总蒽醌浓度为9.55 μg/mL时,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH?)清除率为74.1%;浓度为4.55 μg/mL时,羟基自由基(?OH)清除率达81.6%;浓度为6.70 μg/mL时,超氧阴离子自由基(?O2-)清除率达86.1%。回流法可提取龙眼果皮中酶促褐变产物。温度对酶促褐变产物稳定性影响不明显,光照、pH、食品添加剂因素影响其稳定性。酶促褐变产物具有一定的清除DPPH?、?OH和?O2-自由基的能力。