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新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性 … 总被引:1,自引:0,他引:1
参考国外发表的新城疫病毒(NDV)的HN基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR对NDV昌黎株(野毒)的HN基因进行了扩增,扩增产物克隆后测序。扩增出的HN基因核苷酸长度为1 742bp,编码571个氨基酸,序列中有6个糖基化位点,13个半胱氨酸残基,与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源怀在88.5%~92.9%,推导的氨基酸序列同源性在90.0%~94.2%之间。 相似文献
2.
新城疫病毒四平株HN蛋白基因的克隆与序列分析 总被引:4,自引:1,他引:3
新城疫病毒(HDV)四平株在鸡胚增殖后纯化,提取RNA,然后利用特异性引物,经RT-PCR一次性扩增出了NDV四平株的全长HN基因。将该HN基因插入pKS后测序。序列分析表明,该HN基因核苷酸长度为1742bp,编码571个氨基酸,序列中有5个糖基化位点,12个半胱氨酸残基。同源性分析表明,四平株HN基因与目前国外发表的其他NDVHN基因相比,核苷酸序鲁同源性在83.4 ̄89.2%之间,推导的氨基 相似文献
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新城疫病毒广东分离株HN基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用RT-PCR方法从6个新城疫病毒(NDV)广东分离株中扩增HN基因cDNA片段。并将其克隆至pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。结果表明,6个NDV分离株HN基因片段长度均为1704bp,编码568个氨基酸;彼此间核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.8%和98.6%~100%,与其他基因Ⅶ型毒株的氨基酸序列同源性为96.8%~98.4%;但与其他基因型毒株如D26、Ulster/67、B1、LaSota以及GB Texas的氨基酸同源性较低,为88.2%~91.0%。 相似文献
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10株新城疫病毒广西分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析 总被引:4,自引:2,他引:4
根据基因库(GenBank)新城疫病毒(NDV)的HN基因序列设计了2对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000~2003年暴发新城疫的鸡群中分离的10株NDV毒株的HN基因进行了扩增,扩增产物克隆并测序,拼接出10个NDV广西分离株的HN基因全序列,其序列全长均为1 713 bp,编码571个氨基酸,均有13个半胱氨酸残基。其中GX8/03有6个糖基化位点,而GX2/00、GX6/02、GX7/02和GX5/00有5个糖基化位点,GX1/00、GX3/00、GX4/00和GX9/03有4个糖基化位点。除GX5/00和GX10/03分离株外,其他8个NDV分离株在HN基因抗原位点Ⅰ发生变异,即347位由谷氨酸(E)被甘氨酸(G)替代,GX8/03分离株在HN基因抗原位点Ⅱ的495位由赖氨酸(K)替代谷氨酸(E)。与11株已发表的NDV HN基因全序列相比较,其核苷酸同源性在79.6%~97.9%之间,推导的氨基酸同源性在87.2%~98.1%之间。 相似文献
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从长春地区分离到一株新城疫病毒,经过对其进行生物学研究表明该毒株具有新城疫病毒弱毒株的一些特性,本试验通过RT-PCR方法测定出该毒株F基因的核苷酸序列为1758bp,编码有533个氨基酸残基;HN基因核苷酸序列为1731bp,编码577个氨基酸残基,与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相同序列进行比较。F基因核苷酸序列的同源性在88.2%~96.7%之间,氨基酸序列同源性在90.1%~9 相似文献
8.
《畜牧与兽医》2015,(8):74-76
用设计的特异性引物,通过RT-PCR法对2013年间分离自广西的具有一定代表性的2株鸡新城疫病毒(GX-79-13-Ch,GX-117-13-Ch)进行HN基因的扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析。2毒株HN基因开放性阅读框架(ORF)均为1 716 bp,二者之间的核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸同源性为99.0%。2个分离株HN基因核苷酸序列与国内外报道的相关序列同源性为81.2%~97.5%,推导氨基酸序列同源性为88.2%~97.6%。由系统发育树可见,与现今流行于国内的Ⅶ型病毒株有较高的同源性,表明2个分离株与现今流行于国内的Ⅶ型病毒株有密切联系。 相似文献
9.
新城疫病毒(NDV)四平株、昌黎株、青岛株、F48E8株分别接种9日龄SPF鸡胚增殖,蚀斑纯化(3代),生物学特性鉴定及结合基因序列分析,表明NDV四平株、昌黎株、青岛株均为强毒株。经差数、蔗糖密度梯度离心提纯病毒,分别提取RNA,利用一对特异性引物及RT-PCR方法,一次性扩增出 NDV四平株、昌黎株、青岛株和 F48E8株的全长 HN基因,分别将该HN基因克隆入载体pKS(-)并进行测序。序列分析表明,这4个毒株HN基因核苷酸长度均为1713bp,编码571个氨基酸,其中四平株和 F48E8株含有5个糖基化位点,青岛株和昌黎株含有 6个糖基化位点,四平株含有 12个半胱氨酸残基,而昌黎株、青岛株和F48E8株含有13个半胱氨酸残基。3个野生毒株与F48E8相比较,核苷酸序列同源性为85.7%-99.3%,推导的氨基酸序列同源性为 89.5%-98.8%,其中 NDV四平株与标准强毒 F48E8同源关系最近,核苷酸同源性为 99.3%,推导的氨基酸同源性为 98. 8%。 相似文献
10.
为确定西藏新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)分离株HN基因结构特征及其与已知毒株的遗传相关性,本试验应用RT-PCR技术对西藏NDV分离株HN基因进行扩增,然后克隆至pMD18-T载体测序,并与国内外代表性毒株和当前疫苗株进行比对及系统发育分析。结果表明,NDV分离株HN基因片段长度为1734 bp, 编码577个氨基酸;推导的氨基酸序列均有5个糖基化位点, XZ10和XZ17有12个半胱氨酸残基,XZ20只有11个半胱氨酸残基。NDV西藏分离株HN基因与国内代表性毒株核苷酸同源性在81.1%~93.0%之间,氨基酸同源性在81.1%~93.6%之间;与疫苗株核苷酸同源性在87.8%~98.7%之间,氨基酸同源性在88.0%~98.9%之间。系统进化分析结果表明,NDV西藏分离株HN基因均属于Ⅱ型。 相似文献
11.
NDV长春株生物学特性及与国外毒株HN蛋白基因的同源性比较 总被引:4,自引:2,他引:2
以新城疫病毒(NDV)长春株接种9日龄SPF鸡胚增殖后,进行了蚀斑纯化(三代)鉴定,差数、蔗糖密度梯度离心提纯和生物学特性鉴定。结果表明,该病毒的鸡胚平均致死时间(MDT)大于168h,雏鸡脑内致死性(ICPI)为0.25,雏鸡静脉致死性(IVPI)为0,血凝解脱时间超过120h,血凝素热稳定性56℃ 5min 仍具有血凝活性。系统发育进化树分析表明,NDV长春株与La Sota株亲缘关系最近,为弱毒株。参考多株NDV HN基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR一次性扩增出NDV长春株的全长HN基因。将该HN基因插入pKS(-)后,进行了序列测定。序列分析表明,该HN基因苷酸长度为1731bp,编码577个氨基酸,序列中有5个糖基化位点,12个半胱氨酸残基,与国外发表的NDV毒株序列相符,核苷酸同源性为88.1%~98.8%,推导的氨基酸同源性为91.1%~98.8%。 相似文献
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新城疫病毒(长春株)F蛋白基因的克隆和序列分析 总被引:15,自引:6,他引:15
新城疫病毒(NDV)长春株在鸡胚增殖后纯化,提取RNA,然后利用特异性引物,经RT-PCR一次性扩增出了NDV长春株的全长F基因。将该F基因插入pKS(-)后,进行了序列测定。序列分析表明,该F基因核苷酸长度为1758bp,编码553个氨基酸,序列中有6个糖基化位点,13个半胱氨酸残基,裂解位点区(112~117)氨基酸序列为Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu,与所有弱毒株在这一区域的序列(Gly-Arg/Lys-Gln-Gly/Ser-Arg-Leu)相符,证明长春株为弱毒株。同源性分析表明,长春株F基因与目前国外发表的其他NDVF基因相比,核苷酸序列同源性在88%~99%之间,推导的氨基酸序列同源性在90%~98%之间 相似文献
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新城疫病毒(青岛株)F蛋白基因的克隆和序列分析 总被引:7,自引:1,他引:6
参考新城疫病毒(NDV)长春株的F基因序列设计了1以特异性引物,应用RT-PCR对NDV青岛株(野毒)的F基因进行了扩增,扩增产物克隆后测序,扩出的F基因核苷酸长度为792bp,编码261个氨基酸,包括完整的F2片段和部分F1片段,裂解位点区(112-117aa)氨基酸序列为Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe,与国外发表的强毒株序列相符,正明青岛株为强毒株,根据该基因推导的所基酸序列,与国内外发表的NDVF蛋白氨基酸序列相比,同源性为88.1%-94.3%。 相似文献
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新城疫病毒HN基因与鸡贫血病病毒VP3基因对小鼠黑色素瘤的联合抑制效应 总被引:3,自引:0,他引:3
在 C57BL/6小鼠的左后肢肌肉注射脂质体包裹的含新城疫病毒 HN基因和鸡贫血病病毒 VP3基因的重组质粒。 2周后 ,在左后肢相同部位皮下接种 B16黑色素瘤细胞 2× 10 5个 ,致瘤 2、10 d后 ,分别肌注相同的重组质粒 .通过细胞毒 T淋巴细胞和自然杀伤细胞 (NK)以及小鼠血清中唾液酸含量的测定 ,探讨新城疫病毒抑瘤的机制以及新城疫病毒 HN基因与鸡贫血病病毒 VP3基因的协同抑瘤效应。结果表明 ,与对照组相比 ,注射含 HN基因和 VP3基因的重组质粒可使荷瘤鼠的肿瘤体积缩小。用新城疫病毒或含新城疫病毒 HN基因重组质粒治疗的荷瘤鼠 ,NK活性、CTL 活性明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,血清中唾液酸含量低于对照组 ,但差异均不显著 (P >0 .0 5 )。从而证明新城疫病毒 HN基因能够增强小鼠对移植瘤的免疫杀伤力 ,是新城疫病毒发挥抗肿瘤作用的主要功能性基因。 相似文献
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应用RT-PCR分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白(F)基因的全长核苷酸,再克隆到pMD18-T载体中.经酶切和质粒PCR鉴定,获得阳性重组质粒后,进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行分析和比较.序列分析结果表明,所获得的3个分离株F基因完整的开放阅读框长度为1 662 bp,共编码F蛋白的553个氨基酸;3个毒株之间的核苷酸序列同源性为88.0%~90.6%;与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有85.3%~91.6%.三者F基因的裂解位点均为112R-R-Q-K/R-R-F117,符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征.以1 bp~374 bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明,QH3株NDV为基因Ⅷ型,A4株NDV为基因Ⅵ型,HLJ株NDV为基因Ⅸ型. 相似文献