自制酯酶对甲胺磷农药残留的快速检测研究

利用猪肝提取酶水解碘化硫代丁酰胆碱后形成的硫代胆碱,与二硫双对硝基苯甲酸发生化学反应测定酶、底物的添加量以及保温温度和保温时间对酶活力的影响,并研究了不同浓度与保温时间的甲胺磷对胆碱酯酶活力的抑制情况。结果表明自制胆碱酯酶对甲胺磷比较敏感,其样品最低检出浓度为2.0mg/kg,适合对蔬菜中高残留农药的快速检测。     

兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法(EDC),将MTP与牛血清蛋白(BSA)、人血清蛋白(HSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫抗原MTP?BSA、MTP?HSA和包被抗原甲胺磷?鸡卵清蛋白(MTP?OVA),用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫,制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体(polyclonalantibody,PAB),效价分别为1∶15?000和1∶12?000.     

大豆花叶病毒间接ELISA检测方法的建立及应用

为快速有效地检测大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV),本研究利用已制备的大豆花叶病毒衣壳蛋白(Coat Protein,CP)及其单克隆抗体,通过优化ELISA条件为:检测材料抗原包被酶标板37℃1 h,检测抗体工作浓度125 ng/mL,孵育60 min,酶标抗体工作浓度100 ng/mL,孵育30 min;SMV CP蛋白最低检测限为3.23 ng/mL;该方法重复性变异系数小于3%,重复性良好;运用上述检测条件与RTPCR检测方法对田间样品进行随机检测,结果显示一致率高达94%。SMV间接ELISA检测方法的成功建立,为SMV快速检测试剂盒及试纸条的研发奠定了基础。     

双氧水对浓缩苹果汁中甲胺磷残留农药影响的研究

本文报道的是双氧水对浓缩苹果汁中甲胺磷残留量的影响的研究结果,为实际生产提供了较为准确的数据。1材料与方法1·1材料浓缩苹果汁(陕西海升鲜果汁有限公司提供)。1·2主要仪器及试剂超声波清洗器(上海第三分析仪器厂ZD-2型);旋转蒸发器(上海玻璃仪器厂78-1型);气象色谱仪(日     

奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立

[目的]为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[方法]采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原,建立了检测奶牛孕酮含量的间接竞争ELISA方法。[结果]检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA的最佳反应条件确定为:最佳包被浓度为100 ng/ml,碳酸盐缓冲液的包被效果较好,以4℃过夜+37℃2 h佳,最佳封闭液为2%山羊血清,酶标抗体的工作浓度为0.13μg/ml。建立的标准曲线方程为y=-1.844 4x-0.140 1(R2=0.981 7),检测范围为0~20 ng/ml,最低检测限为0.58 ng/ml。该标准曲线的批内变异系数和批间变异系数分别为2.22%和2.37%。[结论]该研究建立了定量检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA方法。     

鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用

 【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102 400。最佳包被抗原浓度为0.5 μg?ml-1,最佳抗体工作浓度为1﹕6 400,酶标二抗的工作浓度为1﹕20 000。回归方程Y = -0.1516X + 0.788（R2 = 0.9859）,检测范围为0.18～500 ng?ml-1,检出限为0.18 ng?ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500 ng?g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%～106.1%,变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。     

检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１：２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法－阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）利用该法,血清样品只需作１：２００倍稀释,测定其Ｐ／     

紫苏叶中甲胺磷的残留检测方法

紫苏为我国药食兼用型特色农产品,其嫩叶是我国出口日、韩稀特菜品种之一,具有良好的国际市场,而质量安全是紫苏产业的关键环节,本文参照农业行业标准NY/T761-2008建立对紫苏叶中甲胺磷的残留检测方法,为完善紫苏叶中农药残留检测提供依据。     

绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立及应用

利用绵羊肺炎支原体标准株Y98制备抗原,经超声破碎后作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法用于检测绵羊肺炎支原体血清抗体.经方正滴定确定了抗原包被质量浓度为2.5μg.mL-1,血清样品稀释倍数为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶40000,抗原抗体最佳结合时间为1 h.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm(P)与标准阴性血清D490 nm(N)之比,即P/N≥3.0为阳性,P/N≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,并且与间接血凝试验相比较其敏感性高于后者.     

间接ELISA检测抗犬瘟热病毒抗体方法的建立

以大肠杆菌表达的犬瘟热病毒(CDV)重组核蛋白(GST-NP)经纯化后作为包被抗原,通过方阵ELISA滴定确定GST-NP的适宜包被浓度为1.31 μg·mL-1,并由此建立检测抗CDV抗体的间接ELISA方法.通过对已知抗CDV阳性血清及抗其他病毒血清的试验,表明所建立的间接ELISA可特异检测动物血清中的抗CDV抗体.另外,通过不同样品的重复试验以及不同批次的检测试验,证明该方法在用于检测CDV抗体时具有很好的重复性和稳定性.     

兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法（EDC），将MTR与牛血清蛋白（BSA）、人血清蛋白（HSA）和鸡卵清蛋白（OVA）共价偶联，分别合成免疫抗原MTP－BSA、MTP－HSA和包被抗原甲胺磷－鸡卵清蛋白（MTP－OVA），用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫，制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体（polyclonal antibody,PAB)，效价分别为1：15000和1：12000。     

浓缩苹果汁中甲胺磷残留量测定的最佳条件选择

用双氧水测定浓缩苹果汁中甲胺磷残留量的最佳处理条件是:双氧水添加量8%、pH值7、处理温度50℃以下、处理时间5 min.     

克仑特罗在猪肝脏中残留检测的ELISA法研究

本研究旨在用ELISA试剂盒建立一种简便、可靠的猪肝脏中克仑特罗残留的检测方法。添加了适量克仑特罗标准工作液的肝脏样品同 5倍 0 .1mol/L的盐酸溶液匀浆 ,冻藏、解冻后离心。上清液用正已烷萃取脂溶性杂质 ,再用氢氧化钠溶液调节pH至 1 2。用异丁醇提取待测药物 ,将提取液在 6 0℃用氮气吹干。用 1mL试剂盒中的稀释液将残渣溶解后 ,用ELISA法在 4 50nm处检测克仑特罗的含量。该方法的线性范围为 0 .1 3～ 5.3ng/mL ,回归方程为y=- 1 .80 0x 2 .2 85,相关系数r=0 .997,最低检测限为 0 .1 3ng/mL ,最低可定量限为 0 .2 5ng/g,浓度为 0 .2 7、0 .53和 1 .0 6ng/g时的回收率分别为 6 8.9%、72 .7%和 77.4 % ,CV <2 0 %。本法的可靠定量限低于克仑特罗在动物肝脏中的最高残留限量 ,且回收率和变异系数均能满足残留检测的要求 ,是一种较简便、可靠的克仑特罗在猪肝脏中残留的快速检测方法     

兔抗IVM多克隆抗体的制备

将伊维菌素(IVM)进行化学修饰,引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的伊维菌素半琥珀酸酯(IVM-HS):然后采用NHS法和混合酸酐法将半抗原与聚-L-赖氨酸(PLL)和卵清蛋白(OVA)相偶联,制备人工免疫原(PLL-IVM-HS)和包被原(OVA-IVM-HS);经凝胶电泳鉴定,用人工免疫原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体(pAb),间接EUSA测定其效价.结果人工免疫原偶联成功,分子结合比为25.3:1,获得了高价、敏感、特异性的IVM pAb,为IVM残留免疫学检测法的建立奠定了基础.     

抗氯吡脲单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA方法的建立

在获得高特异性抗CPPU单克隆抗体的基础上,采用活性酯法将CPPU-H1与BSA、CPPU-H2与OVA偶联制备得到免疫抗原CPPU-H1-BSA和包被抗原CPPU-H2-OVA;用CPPU-H1-BSA对小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术筛选获得了1株抗CPPU单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7B6 24。经过体内诱生腹水法制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1∶32 000。通过对试验条件的优化,建立了一种检测CPPU的方法 ,该方法 IC50值为3.89 ng/m L;该抗体与四螨嗪、赤霉素、噻苯隆几乎不存在交叉反应;利用所建立的间接竞争ELISA法对葡萄样品进行检测,平均加标回收率为91.4%~112.4%,变异系数为5.9%~14.4%。本研究所建立的间接竞争ELISA方法具有低成本、高准确性和高灵敏度的特点,可以用来对葡萄中的CPPU残留情况进行检测。     

全氟辛烷磺酸酶联免疫检测方法的研究

以人工合成的全氟辛烷磺酸免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,选择包被抗原浓度为0.1μg/mL,抗体稀释度为1∶8 000,建立酶联免疫(ELISA)检测方法。交叉反应试验结果表明,除全氟癸烷磺酸和全氟己烷磺酸的交叉反应率偏高(16.2%,14.22%)外,与其他全氟化合物交叉反应率低于10%,即该抗体有较好的特异性。PFOS检测限为10μg/L,该ELISA方法的最佳工作范围在10~1 000μg/L之间,在此范围内平均回收率为101.62%,平均变异系数为2.4%,表明该方法准确度和精密度高,便于在线检测,可应用于对水体中全氟辛烷磺酸残留的酶联免疫检测。     

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以田间分离的轮状病毒CHLY(G6型)作为抗原,建立了犊牛轮状病毒(BRV)抗体检测与监测的间接ELISA方法.田间监测牛轮状病毒感染率为32.91%(26/79),疫苗源性抗体高峰出现在二次免疫后第40天至第60天,抗体持续期为3个月.该方法可用于粪便、血清样品的检测,具有特异性强、快速简便等优点,适合于对轮状病毒特异性抗体的动态监测和批量检测.