家畜早期胚胎性别鉴定

家畜早期胚胎性别鉴定对畜牧业生产具有重要的现实意义,目前,应用于家畜早期胚胎性别鉴定的技术主要有：细菌遗传学方法,生物化学方法,免疫学方法和分子生物学方法等,本文对几种方法的研究现状,主要优缺点和发展前景作一系统介绍。     

家畜胚胎的性别鉴定技术

1.H—Y抗原法krco及Goldberg在1976年首先用H-Y抗原鉴定胚胎的性别。他们从C57BL/6纯系雌鼠中收集各细胞期的胚胎,经链霉蛋白酶处理除去透明带,然后将这些无带的胚胎置于含有豚鼠补体的稀释H-Y抗血清中孵育,按溶解与否进行评定。结果发现,大约有一半的10到16细胞期的胚胎发     

奶牛胚胎性别鉴定技术进展

性别控制问题是很早就被人们重视和研究的一个重大理论和实践课题.这一方面是由于性别是个非常复杂的重要发育性状.这种复杂性不仅表现在性别分化的多个层次和深度上,而且在性别的形态表现、机能变异方面也非常广泛.因此对性别的决定机理、系统发生以及机能研究都具有重要的理论意义.它也是现代生物科学的重要研究领域;另一方面,对生物性别的控制是多年来人们梦寐以求的愿望.因为通过性别控制可以使某些受性别限制的性状(如母牛泌乳、公鹿生茸)和受性别影响的生产性状(如产肉、产毛)在更多的理想性别中获得更大的经济效益,增加育种中的选择强度而获得最大限度的遗传进展和排除畜禽群体中的有害基因等.     

哺乳动物胚胎的性别鉴定方法

哺乳动物的性分化是胚胎发育期间在子宫内进行的,有着高度的保存性,要想通过外界因素对其产生影响是十分困难的。因此将已经形成的胚胎来鉴别其性别,即称为性别鉴定。在生产中可以将胚胎或者妊娠期胎儿通过性别鉴定,再进行胚胎移植或中止妊娠的方法以达到选择后代性别的目的。在当前进行此项研究主要有如下方法.1 细胞遗传学分析此方法又称为细胞核型鉴定,是通过检查细胞的染色体或组型进行判定.这种方法是将被鉴定胚胎用含有丝分裂阻滞剂的培养液培养,然后     

家畜胚胎性别鉴定方法研究进展

<正> 前言 家畜胚胎性别鉴定的目的在于在胎儿出生前就确定其性别,以便通过人工方法控制出生后的雌雄比例,就畜牧生产而言,理想的性比例起码有以下几点重要意义:(1)使受性别限制的生产性状(如泌乳性状)和受性别影响的生产性状(如肉用性状,毛用性状等)能获得更大的效益,(2)增强选种中的选择强度,以获得最大的遗传进展,(3)排除畜群中有害的基因或基因型。     

胚胎性别鉴定及其遗传基础

<正> 自从1891年Heape首次报道了1只母兔的胚胎移植实验,直到1971年,胚胎移植一直作为一个研究繁殖过程的实验工具。可是当北美和澳大利亚等地出现饲养欧洲兼用型牛的热潮时,则急切需要扩大外来纯种母牛的繁殖力,从而刺激了胚胎移植技术的发展。现在胚胎移植技术作为一种繁育手段已广泛地应用于畜牧生产之中。我国的胚胎移植技术也在不断发展之中。为了在生产中获得高的经济效益,养畜者都希望胚胎移植后所生的是小母畜,而不是小公畜。因此胚胎的性别鉴定目前在世界上已成为一个研究的热门课题。本文想就此作如下综述。     

家畜早期胚胎性别鉴定技术的应用

家畜早期胚胎性别鉴定技术是家畜性别控制和胚胎移植技术的一项重要内容,对畜牧业生产具有重要意义。随着胚胎性别鉴定技术的不断发展,出现了很多新的方法。笔者对有关早期胚胎性别鉴定方法、存在问题及前景进行了综述。     

PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

早期胚胎性别鉴定的方法有很多种,大致可分为两大类：一是前期主要采用的非生物学方法,如组织方法,免疫学方法[~[p16]〔1〕],X-相关酶法[~[p16]〔2〕]等,这些方法都缺少准确性和速度;二是80年代末,随着DNA体 外重组技术而发展起来的分子生物学方法,如DNA探针法〔3〕,聚合酶链反应法（PCR）。其中PCR法以灵敏、特异、准确和快速等特点,而成为胚? 胎性别鉴定中最有研究价值的技术方法。自Herr等（1990）[~[p16]〔4〕]报道了用PCR进行奶牛胚胎性别鉴定技术之后,国内外许多学者从事了这方面的研究 ,使准确率接近或达到了[=]100%,同时操作过程也简化了许多,并且可以在几个小时内完成,为PCR法进行早期胚胎性别鉴定应用于生产提供了基础。     

抗鼠隐孢子虫单克隆抗体的研究

利用鼠隐孢子虫卵囊脱囊物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经过３￣４次有限稀释法克隆化，获得５株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株。所获抗体均属ＩｇＧ１。ＩＦＡ检测结果表明：２Ｇ７株单抗作用于卵囊壁抗原，而ＩＡ４、２Ｅ７、３Ｇ３、４Ａ７株单抗作用于子孢子表面抗原。诱生腹水经过反复冻融、冻干及硫酸铵沉淀后，抗体活性无明显变化。５株单抗均不与贝氏隐孢子虫及柔嫩艾美尔球虫产生交叉反应，与小孢隐     

狂犬病病毒磷蛋白单抗的制备与应用

以灭活的狂犬病病毒CVS株细胞毒免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA法和Western-blot筛选获得针对磷蛋白的单克隆抗体4株：1C9、4B10、2G12、4G5,其中1C9针对氨基端保守表位。以亲和层析法纯化1C9单抗腹水,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体。以1C9磷蛋白荧光抗体与本实验室研制的狂犬病核蛋白免疫荧光抗原检测试剂盒,对本实验室收集的501份疑似狂犬病鼬獾、蝙蝠、犬和黄鼬的脑组织样品进行直接免疫荧光平行检测。结果显示,两种检测手段对基因1型狂犬病毒的检出结果完全一致,而蝙蝠源Irkut病毒仅能以磷蛋白单抗1C9检出。本研究成功获得了与我国现有不同基因型狂犬病毒良好反应的抗狂犬病磷蛋白单抗,并应用于狂犬病的直接免疫荧光检测,为狂犬病诊断提供了敏感性和可靠性良好的诊断试剂。     

Embryo Sexing—A Broad Survey*

Embryo sexing has been performed in both man and domestic species. Three approaches are described: H-Y antigen, cytogenetic analysis and measurement of X-linked enzyme activity. None of these requires the use of Y chromosome-specific sequences. Sexing of semen by flow cytometry is discussed, this technique could eventually render embryo sexing obsolete.     

猪脑心肌炎病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及其识别表位分析

为获得针对猪源EMCV结构蛋白VP2的特异性单克隆抗体,本试验以EMCV结构蛋白VP2为对象,将EMCVBJC3株VP2基因定向插入穿梭质粒中,构建重组腺病毒AdV—VP2,免疫BALB／c小鼠制备单克隆抗体,利用Pepscan技术对单抗识别的抗原位点进行分析。结果显示,间接ELISA及间接免疫荧光法筛选获得了2个阳性细胞克隆株,命名为C11和G8。经检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1：1600,腹水效价分别为1：2．56×106和1：1.28×106,中和试验鉴定均无中和活性。Western—blot鉴定表明获得的2株单抗均能识别原核表达的重组VP2蛋白。亚类鉴定结果显示2株单抗均为IgG2b亚类,轻链均为κ型。Pepscan分析结果显示,这2株单抗可分别识别EMCVVP2蛋白上的2个B细胞线性表位。本研究获得的蛋白十分接近于其天然构象,很大程度上保证了病毒表面抗原位点的结构和功能。     

旋毛虫肌幼虫ES Ag单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的获得能够用于制备旋毛虫病快速检测试纸条的EsAg的单克隆抗体。方法应用旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原（ESAg）免疫诱导Balb／c小鼠,使小鼠产生较强的免疫应答,将免疫小鼠的脾细胞与NS0瘤细胞融合,利用Es45、ES49抗原通过间接ELISA对大量杂交瘤细胞培养上清的筛选,筛选出分泌高亲和力单克隆抗体的4株杂交瘤细胞。结果ES45和ES49（分子质量分别为45ku,49ku）分别被Ts-2D4、Ts-4C5和Ts-4H6、Ts-2G8单克隆抗体识别,与猪肺丝虫（Metastrongylus pudendotectus．MP）、囊虫（Cysticercus cellulosae,CC）、细颈囊尾蚴（Cysticercus tenuicollis,CT）、蛔虫（Ascaris suum,AS）、弓形虫（Toxoplasma gondii,TG）、住肉孢子虫（Sarcocystis miescheriana,SM）抗原反应测试表明,4株单抗与参试抗原均无交叉反应,所有单抗上清ELISA平均效价为1：1120,腹水ELISA平均效价为1．1×10^6,亲和力常数的平均值为6．12×10^9 L／mol。以金标免疫吸附试纸条原理为基础,利用制备的单抗成功研制了旋毛虫病快速检测试纸务,操作快速、无需设备及试剂,可以作为旋毛虫病的实时监测工具。结论ESAg单抗用于制备旋毛虫病快速诊断试纸条是理想的试剂。     

家蚕微粒子孢子单克隆抗体的研制及其在检测上的初步应用

将家蚕微粒子Nosema bombycis孢子免疫的BALB/c小鼠的脾细胞和FO细胞融合,经克隆筛选获得6株能稳定分泌抗N.bombycis孢子表面抗原的单克隆抗体细胞株(Nb_(1-6))。其中Nb_(1-2)和Nb4分泌的抗体属于IgM,Nb_3,Nb_5和Nb_6分泌的分别为IgG_2b、IgG和IgG_3。特异性检查结果表明,除Nb_4和Nb_6对柞蚕微粒子孢子有交叉凝集反应外,其余均对家蚕N.bombycisJ孢子具特异性。杂交瘤细胞培养上清液对N.bombycis孢子的凝集效价以Nb_1为最高,达1:256,由此细胞株诱发的腹水效价高达1:5000。建立了以普通聚苯乙烯酶标板为载体,完整的N.bombycis孢子为抗原的LEISA测定方法,最低检测量为700个孢子。     

抗鸡白痢沙门氏菌单抗及其在鸡白痢病检疫中的应用研究

本研究应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了一组针对鸡白痢沙门氏菌O_9抗原的单抗。以单抗3-47-26酶结合物和鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体竞争ELISA试验以检疫鸡白痢病,该法通过样品抑制酶标单抗与LPS的结合,以检测鸡白痢抗体。试验结果表明,79份鸡白痢阳性血清具有显著抑制作用(95.0±4.3％),而130份鸡白痢阴性血清以及48份SPF鸡血清抑制不明显,它们的抑制率分别为12.3±10.6％和6.2±5.5％。对94份种鸡血清的检疫结果表明,抗体竞争ELISA比PAT、AGPT、PHA敏感和特异,并进一步讨论了该法在血清流行病学调查方面的应用前景。     

抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性

J亚群禽白血病病毒（ALV-J）是一种主要感染肉用型鸡的反转录病毒。本研究用表达ALV-J囊膜蛋白基因产物的Sf9细胞免疫Balb/c小鼠，取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞NS1进行融合，获得了4株特异性抗ALV-J的单克隆抗体。免疫荧光分析结果表明，3株单克隆抗体仅与所试验的ALV-J毒株反应，而不能与ALV的A、B、C、D和E亚群的毒株反应。有趣的是，有一株单克隆抗体可以与所有试验的外源性ALV毒株反应，但不与内源性的E亚群反应。Western Blot和免疫沉淀试验结果表明，单克隆抗体识别的ALV-J囊膜糖蛋白的分子量为90-94kD，识别未糖基化的囊膜蛋白分子量约为53kD。用这些单克隆抗体能检测出ALV-J病毒感染鸡胚成纤维细胞中的病毒抗原。这些结果提示这些单克隆抗体可用于ALV-J疾病的诊断和流行病学调查。     

抗狂犬病毒单克隆抗体的研制及应用

应用杂交瘤技术获得4株分泌抗狂犬病毒(Rabies virus,RV)单克隆抗体细胞株,并对其特性进行分析。经鉴定,它们所分泌的抗体类型为IgG1,腹水效价为1∶105~1∶107,ELISA法和间接免疫荧光检测(indirect immunofluoreseent assay,IFA)结果表明:该4株单抗对RV有良好的特异性,对正常Vero细胞及人白蛋白和其他细胞培养物无非特异性反应。将这些单抗腹水进行Protein G亲和层析纯化后获得的纯化抗体用于制备反相亲和层析柱,并以反相亲和层析法纯化RV以获得高纯度RV抗原。应用纯化的RV建立胶体金免疫层析法(gold-immunochromatography assay,GICA)检测RV抗体血清,结果显示,GICA与标准ELISA法检测比较的总符合率为96.1%。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的研究Ⅰ．抗传染性法氏囊病病毒（CJ801株）单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术获得了３株抗传染性法氏囊病病毒（ＣＪ８０１株）的单克隆抗体。３株单抗与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡马立克氏病病毒均无交叉反应。ＣｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡ表明、３株单抗所对应的抗原位点互不重叠。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明、３株单抗所对应的抗原位点都位于ＶＰ２ｂ上。