猪肠黏膜屏障功能及其营养调控措施

本文主要阐述肠黏膜屏障功能及其在仔猪生长发育过程中的作用,建议养殖者在饲养过程中应采取添加功能性物质及控制霉菌毒素和抗营养因子等营养调控措施以保障仔猪的肠黏膜屏障功能,促进仔猪的健康生长。     

豆状带绦虫六钩蚴的体外培养

(一)豆状带绦虫虫卵:采自以豆状囊尾蚴人工感染的家犬。 (二)RPMI1640培养基:美国GIBC公司生产。 (三)虫卵的预处理及六钩蚴的培养:将人工感染豆状带绦虫的犬杀死,取出绦虫、充分洗涤后将孕卵节片撕破、纱布过滤后离心、弃上清液,虫卵中加入0.02％洗必泰溶液室温下作用1小时,最后用灭菌生理盐水洗涤数次并配成一定浓度的虫卵悬液。取15万虫卵以2000r/m离心5分钟,弃上清液,沉淀物中加入人工胃液37℃水浴1小时后     

猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。     

猪带绦虫六钩蚴的体外培养

试验首次以人工胃液、人工肠液在离体的情况下将猪带绦虫的六钩蚴离体孵化与激活，并使用ＲＰＭＩ１６４０对激活的六钩蚴进行了体外培养。六钩蚴在培养的前几天内的变化十分明显，运动频率也较高。培养到第１０天时，可见到明显的二层体壁。     

猪带绦虫实验动物模型的建立

为建立猪带绦虫实验动物模型,本实验通过口服激活、未激活囊尾蚴和尾静脉注射激活的囊尾蚴感染昆明小鼠、BALB/c小鼠、SD大鼠、豚鼠、金黄地鼠、沙鼠,对各种鼠体内的绦虫的感染、生长发育及寄生部位等生物学特性进行研究.在感染45 d的金黄地鼠体内检出可见虫体,检出的虫体多数吸附在小肠.本实验建立了猪带绦虫的实验动物模型,使得解决猪带绦虫实验材料的来源问题成为可能,也为猪带绦虫的深入研究奠定了基础.     

丁酸钠对断奶仔猪肠黏膜屏障功能的影响

断奶会引起仔猪肠黏膜屏障受损,丁酸钠的主要有效成分——丁酸具有短链挥发性脂肪酸的功能,能作为肠细胞的能源物质促进其增殖和成熟;降低胃肠道pH值,调节肠道微生物稳态,抑制病原菌的侵害;提高肠黏膜固有层中免疫细胞的数量,从而提高断奶仔猪的肠黏膜屏障功能。     

霉菌毒素对肠道黏膜屏障功能影响的研究进展

肠道作为抵抗外部污染物的第一道屏障,其黏膜屏障功能对维持畜禽健康至关重要。霉菌毒素作为广泛存在于饲料原料中的真菌有毒次生代谢产物,可通过破坏肠上皮的形态、组织完整性和肠道菌群平衡,以及改变黏蛋白单糖组成、肠黏蛋白和细胞因子的表达来破坏肠黏膜的屏障功能,从而造成肠黏膜损伤,降低畜禽的生产性能。本文主要对霉菌毒素对肠黏膜屏障的作用及机制进行了概述,旨在为养殖业饲料霉菌毒素的预防提供理论参考。[关键词] 霉菌毒素|肠黏膜屏障|饲料     

以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组原的复性与纯化

应用比浊法,可溶必蛋白百分比,夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素,１６０℃ｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００,１．０ｍｍｏｌ／Ｌ－０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨ－ＧＳＳＧ的ＰＨ９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液,蛋白浓度为２－５ｍｇ＝ｍＬ,以静置缓慢透年为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体,多聚体明显     

益生菌对肉鸡肠黏膜免疫屏障的影响

肉鸡肠道疾病严重影响着养鸡业的发展,利用益生菌防治肉鸡的肠道疾病已成为当今的研究热点。本文综述了益生菌的特点、肠黏膜免疫屏障、益生菌对肉鸡肠黏膜免疫屏障的作用(调节肠道内微生物的平衡、预防和治疗肠道炎症、增强肠道的免疫屏障),旨在阐明益生菌在肉鸡肠黏膜免疫屏障中的研究进展,为规模化养殖场合理使用益生菌提供理论依据。     

猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的克隆与序列分析

利用RT-PCR技术,从猪带绦虫六钩蚴中成功地克隆了TSOL16基因。序列分析表明,猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的开放阅读框（ORF）为402 bp,编码134个氨基酸,与报道的T.ovisTO16基因同源性为95.9%,推导的氨基酸序列同源性为92.6%。同时利用生物信息学和分子生物学软件对TSOL16基因编码的蛋白进行结构预测。结果表明该蛋白为一结构松散的球状蛋白。     

猪带绦虫六钩蚴免疫原基因的克隆、表达与结构预测

从猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库中筛选、克隆的Ts01基因，设计表达性引物，亚克隆到pGEX-4T-1表达载体，构建了pGEX-GST-Ts01的融合表达重组载体，转化BL21寄主菌和IPTG诱导表达后，经SDS-PAGE和Western蛋白分析．表明成功地高效表达了约40000右的融合蛋白质．与预测的相对分子质量大小一致，表达量达40％左右。表达产物具有免疫学活性，而且呈可溶性，未形成包涵体，这与用蛋白质软件分析的Ts01编码蛋白水溶性相一致。     

猪带绦虫六钩蚴和未成熟期整尾蚴生化指标的变化

本试验检测了六钩蚴和猪体内发育至30日的囊尾蚴的18项生化指标，结果显示，在六钩蚴阶段有部分生化指标未能检测到，而在猪体内发育30日龄的囊尾蚴则全部检测到，提示在六钩蚴阶段虫体处于休眠状态态，由六钩蚴到未成熟期囊尾蚴是各个生化代谢通路的激活过程。     

猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建与筛选

在体外将猪带绦虫虫卵孵化为有活力的六钩蚴。采用商品化试剂盒抽提六钩蚴总 RNA、m RNA,反转录为双链c DNA,再加 Eco R Adapter。在去除小片段后 ,dsc DNA与 λgt11噬菌体 DNA连接 ,经蛋白包装 ,构建了猪带绦虫六钩蚴λgt11c DNA文库。该文库效价为 3.5× 10 9pfu/ m L ,重组 DNA片段大小为 0 .5～ 3.2 kb,平均为 1.6 kb,蓝白斑比 1∶ 9。用抗体探针对文库进行免疫学筛选 ,在消除非特异性反应的基础上筛选约 10 6 重组子 ,共得到 118株强阳性克隆 ;应用 PCR鉴定上述部分阳性克隆 ,均扩增到 0 .5 kb以上的片段。结果显示 ,构建的文库合格 ,含六钩蚴所有抗原基因 ,可用于六钩蚴 c DNA克隆的筛选 ;用免疫学与 PCR联合筛选 c DNA文库 ,可消除假阳性     

茶多酚对肠黏膜屏障功能的调控作用研究进展

肠黏膜屏障作为抵御外界感染和自身维护的防御体系,对维持肠道稳态和机体健康有着重要作用.茶多酚是从茶叶中提取出的多酚类物质的总称,具有平衡肠道菌群、抗氧化、免疫性能、脂肪沉积调控以及抑菌抑酶等生物学作用.茶多酚对动物肠道黏膜屏障有着积极的调控作用.本文综述了茶多酚及其对肠黏膜屏障功能的调控作用、在畜牧生产中的应用,以期为...     

猪带绦虫dUTPase基因真核载体的构建及其在BHK细胞中的表达

采用PCR技术从重组克隆载体pGEM-dUTPase中扩增出猪带绦虫六钩蚴dUTPase基因,与表达载体pGFP-C1相连接,构建重组表达质粒pGFP-C1-dUTPase,转化大肠埃希菌DH5α,经测序证实,基因序列完全正确.用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR技术确定目的蛋白的表达情况.结果表明,在转染重组质粒48 h后能观察到绿色荧光,表明在BHK细胞中成功地表达了猪带绦虫dUTPase与pGFP-C1的融合蛋白,为下一步重组dUTPase酶活性的研究奠定了基础.     

早期断奶应激对仔猪肠黏膜屏障功能的影响及其监测与修复

在养猪生产中,常用日增重来衡量断奶仔猪的健康和生长性能,而影响断奶仔猪日增重的主要因素是断奶时所面临的大量应激(饲粮改变、母仔分离、环境变化等)。断奶应激会使仔猪肠道发生组织形态学和生理学上的变化,如肠绒毛萎缩、隐窝增生、肠黏膜通透性增强等,这些变化会引起仔猪消化和吸收功能下降或免疫机能降低,最终导致腹泻和生长性能下降。本文针对早期断奶应激引起的仔猪肠黏膜结构和屏障功能的变化作一简要综述,总结了一些可以作为评价肠黏膜结构和功能的一些标记物,并列举了饲粮中可用来缓解断奶应激损伤的一些饲料原料或添加剂,以期为仔猪生产和断奶应激的研究提供参考。     

白藜芦醇通过TGF-β信号通路对肠黏膜屏障功能的调控

肠道健康水平对动物整体健康水平十分重要。作为机体抵御致病抗原入侵的防线,肠黏膜屏障的完整性极易受到损害。白藜芦醇是一种多酚类抗毒素,主要通过抗炎、抗纤维化、抗氧化等多种途径,对肠道黏膜屏障损伤及功能障碍发挥作用。转化生长因子-β(TGF-β)是一种多功能细胞因子,具有与白藜芦醇相似的功能。白藜芦醇可以通过对TGF-β/Smads信号通路的调控来影响肠道的健康。文章综述了白藜芦醇和TGF-β对肠黏膜屏障功能的作用以及白藜芦醇通过TGF-β信号通路对肠道健康的调控方式,为白藜芦醇在动物生产中的应用提供参考。     

猪带绦虫六钩蚴45W-4BX抗原的制备及其杂交瘤细胞株的建立

为获得针对猪带绦虫六钩蚴（TSO）45W-4BX抗原的杂交瘤细胞株,用IPTG对TS045W-4BX的重组质粒pGEX-4BX进行了诱导表达,并采用Sepharose-4B层析技术对表达产物进行纯化,运用SDS—PAGE和Western—blot分别对其纯度和活性进行了检测。分别用弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂乳化已纯化的猪带绦虫TS045W-4BX重组抗原,随后用其分别免疫BALB／c小鼠3次,检测血清抗体效价呈阳性。之后,再进行加强免疫,取免疫小鼠脾细胞和SP2／0细胞进行融合,经TS045W-4BX抗原和GST抗原双系统间接ELISA筛选,最终获得了18株抗TS045W-4BX抗原的杂交瘤细胞株。采用有限稀释法对其中的4株进行5次亚克隆,最终获取了4株稳定分泌针对TS045W-4BX抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,金标试纸条法鉴定其抗体亚类均属于IgG1类,轻链为κ型。     

植物多糖对断奶仔猪小肠黏膜形态及肠黏膜屏障功能的影响

旨在探讨断奶仔猪饲粮中单独或联合添加黄芪多糖、牛膝多糖及白术多糖对其小肠黏膜形态及肠黏膜屏障功能的影响。选取256头35日龄的杜长大三元杂交断奶仔猪,随机分为8个组,每组4个重复,每个重复8头猪,采用三因素两水平(2×2×2)试验设计,饲粮中黄芪多糖、白术多糖和牛膝多糖的添加水平均为0,800mg/kg,试验共进行28d。结果显示:植物多糖能显著提高断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠的黏膜绒毛高度,提高绒腺比(P0.05),3种多糖联用效果最适。与对照组相比,多糖组断奶仔猪回肠V/C比值显著提高(P0.05),各单一多糖组之间差异不显著(P0.05),3种多糖联合添加与两两添加及单一添加相比显著提高了V/C比值(P0.05)。多糖组断奶仔猪血清中二胺氧化酶(DAO)的活性、血清中内毒素(ET)含量及D-乳糖的含量均显著降低(P0.05),3种多糖联用效果最适。多糖能显著提高断奶仔猪肠道黏膜Occludin、Claudin和ZO-1的基因表达量(P0.05)。单一添加黄芪多糖、白术多糖及牛膝多糖能显著提高断奶仔猪肠道钠-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)的mRNA相对表达量(P0.05),对葡萄糖转运载体2(GLUT2)mRNA相对表达量有提高的趋势,但差异不显著(P0.05)。多糖两两联用及3种多糖联合添加能显著提高断奶仔猪肠道SGLT1和GLUT2mRNA相对表达量(P0.05)。结果表明,在断奶仔猪饲粮中添加植物多糖可显著改善断奶仔猪肠道黏膜形态结构和肠道的通透性,其机制可能与植物多糖改善断奶仔猪肠黏膜屏障功能作用有关。