印楝素抑菌活性的研究

印楝(Azadirachta indica A.Juss)系楝科楝属乔木，被美国农业部誉为“可解决全球问题之树”。从印楝植株中发现了以印楝素(Azadirachtin)为主的80余种活性物质，可防治10目400余种农林、仓库和卫生害虫，是理想的生物杀虫剂，但其杀菌活性的研究在国内尚属空白。本研究选用公认的质控菌株，对其抑制细菌生长活性进行了研究。     

微波辅助法提取印楝素的研究

介绍了一种有效利用微波辅助从印楝(Azadirachta indica A.Juss)种仁中提取印楝素的方法。通过考察辐射时间、溶剂、物料比以及辐射功率等因素对提取率的影响，得出结论为：预处理过的印楝种仁粉末6.65g(相当于印楝种仁10g)，以甲醇做溶剂、微波功率210w、物料比1：3(g／mL)、辐射时间为3min*3次，提取率最高。与传统的磁搅拌法相比，该方法不仅工艺简单，而且可以提高产率，缩短提取时间。用高压液相法定量地测定了所提取印楝素的含量，其提取率可达0．519％．     

影响印楝素稳定性及其含量的主要因素

印楝素的稳定性及其含量的高低受许多因素的影响。印楝素对光敏感，暴露在光下会逐渐失去活性；室温及低于20℃的贮藏温度有利于印楝素的稳定，而高于室内温度会加速印楝素的降解；印楝素在中性条件下比较稳定，室温条件下，在pH值为4～6的酸性水溶液中也稳定，但在碱性和强酸溶液中不稳定；中性有机溶剂对其稳定性有利。微生物的活动会加快印楝素的降解，不同的地理种源和种植土壤对印楝种实中印楝素的含量高低影响很大，在干季所结果实的种子中印楝素含量高于在雨季种植所结果实的种子。而不同组培条件对组培体的印楝素含量也会产生影响。     

印楝素含量与种子形态及成熟期关系的初步研究

对印楝素含量与种子形态表征及成熟期的关系进行了初步研究.种子的长宽比与印楝素含量相关,并且认为它是能反映印楝素含量的主要表征,得出种子长宽比(X)与印楝素含量(Y)的关系为:Y=0.295 0.134X-0.028X2.种子长宽比接近2.39时,种仁的印楝素含量出现峰值,可将印楝种子的形态表征作为初步估测印楝素含量的指示参数,而种子的成熟期与印楝素含量无关.在印楝原料林良种优良母树筛选中应尽量选择各个种源中生长良好、结实量大、种子饱满且长宽比接近2.39的植株.     

印楝素在不同剂型中的稳定性研究

印楝素加工后的稳定性是剂型选择的关键,通过对不同剂型添加剂筛选,并测定其稳定性与杀虫活性的关系,从而确定印楝素微乳剂、可溶性片剂和及其添加剂。对美国白蛾三龄幼虫测定,三种剂型,以微乳剂最好,其LD50为1.8375μ/g,次为乳油,可溶性片剂居后。     

印楝素制剂防治松毛虫及松小蠹室内试验初报

应用印楝素乳油进行了松毛虫、松小蠹的室内防治效果试验。试验结果表明用0．3％印楝素乳油400倍“触杀 胃毒”处理松毛虫，施药后20天，防治效果达到88．5％；用0．3％印楝素乳油100倍“触杀 胃毒 内吸”处理松小蠢，施药后15天，防治效果达到95．6％。观察发现，施用印楝素后，使松毛虫2龄幼虫产生较强的拒食作用，并能抑制其生理发育。     

印楝素的分离、分析和合成研究进展

综述了最近几年分离纯化印楝素的新技术如逆流色谱、快速色谱和真空色谱技术,分析印楝素的特异性免疫技术、常规技术和色谱-质谱(LC-MS)联用技术以及人工首次全合成印楝素取得重大研究进展。     

快速搅拌法室温浸提印楝油和印楝素

在室温下用间歇式快速搅拌法从印楝种仁中浸提印楝油和印楝素。讨论了料液比以及浸提时间对得率的影响。结果表明:印楝种仁300g,以750mL石油醚做溶剂,在快速搅拌条件下浸提21min时印楝油得率最高;将300g去油后的印楝种仁以900mL甲醇做溶剂,在快速搅拌下浸提21min时印楝素得率最高。由此得出,快速搅拌法浸提印楝油的最佳条件是:溶剂石油醚、料液比1∶2.5(g∶mL,下同)、时间每次7min、浸提3次,出油率30.4%;快速搅拌法浸提印楝素的最佳条件是:溶剂为甲醇、料液比1∶3、时间每次7min、浸提3次,印楝素A的得率为0.438%,印楝素B的得率为0.142%。     

超声波用于强化有机溶剂提取印楝素

研究了用超声波强化有机溶剂提取印楝素的工艺过程，分别考察溶剂、料液比、超声波作用时间、超声波功率对提取率的影响实验发现，较理想的提取条件为：13．3g印楝种仁粉，料液比1：2，超声波功率200W；超声波作用时间与溶剂有关。甲醇15min、乙醇20min、乙酸乙酯10min；3种溶剂较佳提取率分别为0．3786％、0．3658％、0．2462％提取样晶利用高效液相色谱仪采用外标法测定提取物中印楝素的含量。实验结果表明，超声波强化提取与搅拌提取相比，不仅缩短了提取时间，而且提取率有所提高。     

印楝提取物在林业病虫害防治中的应用

印楝(Azadirachta indica)是适生于热带和亚热带地区的长绿乔木树种,它的果实、种子、种核、枝条、树叶、树皮及树液中都含有活性物质,可防治8目200余种农业、林业、仓储和卫生害虫。文章介绍了印楝素的作用机理,同时在抑制病原菌方面也有相关报道,具有广阔的市场开发前景。     

印楝素乳油对蜀柏毒蛾的生物活性及林间防效

在室内测定0.3%印楝素乳油对蜀柏毒蛾Parocneria orienta Chao的生物活性,并进行了林间防治试验.室内试验结果表明,0.3%印楝素乳油对蜀柏毒蛾具有很强的毒杀活性和一定生长发育抑制作用.林间试验结果表明,0.3%印楝素乳油对蜀柏毒蛾具有良好的防治效果.     

0.5%印楝素微乳剂对茶尺蠖的生物活性研究

利用0.5%印楝素微乳剂对茶尺蠖的生物活性进行了研究。结果表明0.5%印楝素微乳剂对茶尺蠖具有较强的毒力活性。室内毒力测定表明,药后2d,幼虫死亡率随着用量的增大而增高,死亡率最高可达88.33%,致死中量为1.65866μg/g。田间防治试验表明,0.5%印楝素微乳剂800～1200倍,药后3d防治效果在70.90%～80.14%,药后7d,防治效果在78.54%～89.04%。0.5%印楝素微乳剂防治茶尺蠖具有较好效果,可以有效控制茶尺蠖的危害,而且对作物安全,可用于茶树无公害化生产。     

桑天牛取食注射印楝素的构树后对其后代死亡率的影响

用注有0.32g和2.0g印楝素的构树枝条喂饲桑天牛一段时间后,能够极显著降低其产卵量,并且其下一代孵化的幼虫成活率降低,多数幼虫在进入木质部取食前因体内的印楝素致其死亡,取食的印楝素越多,死亡越早;注入构树体内的印楝素对接入的正常生长的桑天牛幼虫也有很好的毒杀作用。试验结果为注射印楝素引诱树防治桑天牛的方法提供了理论依据。     

室温粉碎搅拌法从印楝种仁中萃取印楝素的研究

用快速粉碎搅拌的方法从印楝种仁中萃取印楝素,分别研究了萃取时间、溶剂的选择及用量对印楝素萃取产率的影响。优化的工艺条件为:208g去油后的印楝种仁(相当于300g印楝种仁),以750ml甲醇做溶剂,在快速粉碎搅拌下萃取21min即可以达到最高萃取产率,与微波辅助法、超声波法、浸提法相比,具有提取率高、设备和操作简单、节约溶剂、快速等特点。     

影响印楝愈伤组织生长和印楝素积累主要因素的初步研究

采用干重法和分光光度法分别测量印楝愈伤组织的生长量和印楝素含量,研究了愈伤组织固体培养条件。结果表明,印楝愈伤组织的最适固体培养基为MS NAA 3.0mg/L 6-BA 1.0 mg/L 蔗糖40g/L 琼脂0.7%,以pH值为5.8,培养温度(25±2)℃,光照900Lx培养条件下的印楝素产出率最高,达44.76OD457/皿。     

大孔树脂对印楝素A吸附纯化的研究

通过比较5种大孔吸附树脂对印楝素A的吸附率和解吸率,成功地筛选出比较理想的树脂。研究结果表明:XAD-1180树脂对印楝素A有较好的吸附和解吸效果。并对其动态吸附、解吸性能进行了考察,发现较佳的吸附条件为:印楝素A质量浓度2.23 mg/mL(溶剂为30%甲醇-水溶液,以下同),流速1 BV/h,饱和吸附量4.5~5 BV;解吸条件为:以50%、60%、70%的甲醇-水溶液梯度洗脱。一次提纯产品的纯度为85.14%,经过二次提纯的纯度可达93.18%。纯化产物经HPLC-MS进一步确认为印楝素A。     

印楝素A无细胞合成体系构建及其合成前体

【目的】印楝素是一种植物源杀虫剂,印楝素A是印楝素的主要活性成分。本研究通过对印楝素A无细胞合成体系制备条件和反应条件的优化,以及印楝素A合成前体的筛选,探讨印楝素A的离体生物合成途径,以为指导构建印楝素异源生物合成平台,实现印楝素的异源生物合成奠定基础。【方法】通过对缓冲液类型、浓度、起始pH、提取时间及料液比进行单因素试验及正交试验优化,构建印楝素A无细胞合成体系;从反应终止试剂及稳定剂、反应温度、反应时间、底物浓度以及辅助因子5个方面优化无细胞合成体系的反应条件。利用印楝素A无细胞合成体系分别以2,3-环氧鲨烯、羊毛甾醇、大戟二烯醇、丁酰鲸鱼醇、nimbin、茄碱苷和脱乙酰茄碱苷为底物,以印楝素A相对产量为评价标准,探讨印楝素A合成前体。【结果】印楝素A无细胞合成体系的构建:以pH7.0的200 mmol·L~(-1) Tris-HCl缓冲液,按1∶20(g·mL~(-1))料液比加入印楝叶片,提取1 h。优化的印楝素A无细胞合成条件为:反应总体积800μL,其中含印楝无细胞提取物300μL(相当于印楝叶0.015 g),100μL 250μmol·L~(-1)的底物(鲨烯)和400μL含有1 mmol·L~(-1) Mg~(2+)、1 mmol·L~(-1) Mn~(2+)、0.1 mmol·L~(-1) ATP、0.1 mmol·L~(-1) NADPH~+和5 mmol·L~(-1)抗坏血酸的缓冲液,在30℃下反应60 min,迅速加入200μL乙酸终止反应。分别以2,3-环氧鲨烯、丁酰鲸鱼醇、大戟二烯醇、nimbin、茄碱苷和脱乙酰茄碱苷为底物,反应完成后,印楝素A含量均有不同程度的增加;羊毛甾醇抑制体系中印楝素A的合成。【结论】羊毛甾醇不是印楝素A的合成前体,2,3-环氧鲨烯和丁酰鲸鱼醇是印楝素A的前体,nimbin、大戟二烯醇、脱乙酰茄碱苷和茄碱苷极可能是印楝素A的合成前体,且茄碱苷位于合成途径较下游的位置。     

印楝嫁接技术研究

印楝(Azadirachta indica A.Juss),为楝科印楝属常绿植物,原产印度、缅甸等国家,耐旱性极强,是干热地区造林的良好树种.种仁含印楝素等多种活性成分,可用于制备生物农药.印楝生物农药对温血动物无毒,使用安全,防治对象不易产生抗性,它是已知生产无公害农药的最佳植物种类.据专家预测:可望在不远的将来代替或部分代替化学农药.     

高效毛细管电泳法检测印楝素A的初步研究

从理论角度分析了高效毛细管电泳技术检测印楝素A的可能性，并以试验进行证明。在十二烷基硫酸钠（SDS）浓度为25mmol／L、0．02mol／LpH值6．86混合磷酸盐缓冲溶液，甲醇-缓冲溶液（体积比7：3）作为运行缓冲液，分离电压20kV下得到稳定的电流曲线，二极管阵列检测器（PDA）检测波长214nm，在迁移时间2．6min处检测到印楝素A的电泳特征峰，电泳谱图面积积分结果和高效液相色谱分析结果无显著差异。     

新型无公害生物农药印楝素开发成功

近日，我国开发出一种新型无公害生物农药――印楝素。制备印楝素的植物印度楝，是一种防治干热地区荒漠化的优良树种，同时也是制备无公害生物农药利用价值最高的植物。在我国，云南省是最适宜种植印度楝的地区，从1995年开始引种，已造林成活1 666.67 hm2。专家认为，这项成果不仅有力地促进了中国无公害生物农药的研究、开发和生产，而且通过种植印度楝还将有助于生态环境恶劣和经济欠发达地区的农民脱贫致富，对区域经济的发展起到积极推动作用。 新型无公害生物农药印楝素开发成功