云南柑橘黄化脉明病毒的田间样品检测

柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的黄脉病是威胁我国柑橘产业发展的一种重要病毒性病害.云南是我国的柑橘产区之一,为明确CYVCV在云南田间的感染情况,本研究于云南省瑞丽市、怒江州、凤仪镇和丽江市4地共采集33份疑似柑橘黄脉病样品,对其进行了PCR检测.结果显示,在33份田间疑似病样中有10份样品检测到CYVCV,总检出率为30.3%.统计表明,在不同寄主样品中CYVCV的检出率差异较大;柠檬样品CYVCV检出率最高,为50%;而香橼样品和香橙上检出率为0.各地区样品中CYVCV的检出率有一定差异性;其中瑞丽样品检出率最高,达43.5%;而怒江、凤仪及丽江样品中均未检测出CYVCV.     

福建三明地区柑橘病毒类病原种类的鉴定及检测

为了明确福建省三明地区柑橘病毒类病原(病毒和类病毒)种类,利用RT-PCR技术对其进行了鉴定和检测,并对其检出率进行了分析。结果表明,从207份柑橘叶片样品中检出柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)、柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)、柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus, CLBV)和蚜虫致死麻痹病毒(aphid lethal paralysis virus, ALPV)等4种病毒以及柑橘曲叶类病毒(citrus bent leaf viroid, CBLVd)、啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid, HSVd)、柑橘矮化类病毒(citrus dwarfing viroid, CDVd)、柑橘类病毒Ⅴ(citrus viroidⅤ, CVdⅤ)和柑橘类病毒Ⅵ(citrus viroidⅥ, CVdⅥ)等5种类病毒。其中,CTV、CYVCV、CLBV和ALPV的检出率分别是71.01%、66.67%、0.97%和6.28%,CBLVd、HSVd、C...     

柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

为探索柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘新病害—柑橘黄脉病的早期快速检测技术,针对CYVCV核酸结合蛋白基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化退火温度,建立了CYVCV巢式RT-PCR检测方法,并对采自不同柑橘品种的54个CYVCV疑似样品进行了检测。结果表明,CYVCV巢式RT-PCR检测中,以55℃和60℃分别作为第1轮和第2轮扩增的退火温度时检测效果最佳;该方法检测样品中病毒总核酸的最低浓度为2.40μg/L,灵敏度较RT-PCR提高100倍。在CYVCV疑似样品检测中,巢式RT-PCR和RT-PCR的阳性检出率分别为59.26%和57.41%,前者更适用于检测不同来源的CYVCV。当尤力克柠檬、锦橙北碚-447、天草和台湾椪柑嫁接接种CYVCV后,巢式RT-PCR比RT-PCR提前10~30 d检测出病毒。表明所建立的CYVCV巢式RT-PCR检测方法适用于田间病树的早期诊断。     

两种柑橘新病毒双重RT-PCR检测体系的建立及应用

正柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘褪绿矮化病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是2种最近在我国发生的柑橘病毒(Chen et al.,2014;Guo et al.,2015),主要通过带病苗木和昆虫传播(陈洪明等,2015),对我国柑橘产业造成了严重损失。目前尚无防治CYVCV和CCDaV的药剂,种植无病毒苗木和加强病害检测是重要的防治途径。当前虽已建立了CYVCV和CCDaV的RT-PCR检测方法(Loconsole et al.,2012;陈洪明等,2015),但鉴于田间可能存在     

利用小RNA深度测序技术鉴定上海地区‘红美人’柑橘病毒种类

为明确上海地区‘红美人’柑橘的病毒种类, 2020年4月在崇明、金山、奉贤、嘉定、闵行和浦东采集疑似病毒感染的叶片样品11份, 采用小RNA深度测序技术结合RT-PCR对不同来源的混合样品进行病毒种类鉴定。结果表明, 样品中含有柑橘衰退病毒Citrus tristeza virus (CTV)、柑橘黄化脉明病毒Citrus yellow vein clearing virus(CYVCV)、柑橘树皮裂纹类病毒Citrus bark cracking viroid(CBCVd)和柑橘类病毒Ⅴ Citrus viroid V(CVd-Ⅴ)。同时发现, 上海地区‘红美人’柑橘病毒复合侵染现象普遍。基于CTV和CYVCV的CP全长基因及CBCVd和CVd-Ⅴ全基因组序列系统进化分析结果表明:除了CYVCV的分离物与地理来源具有明显的相关性外, 其余病毒及类病毒均没有严格的地域相关性。研究结果为开展‘红美人’柑橘种苗病毒检测及病毒病的防治奠定基础。     

柑橘黄化脉明病毒一步法RT-qPCR检测体系的建立及应用

正柑橘黄脉病是由柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的一种新发病害,对柑橘产业尤其是柠檬产业危害较重。我国于2009年首次在云南省瑞丽市发现该病,四川、重庆、江西等省市也陆续发现并呈快速传播趋势。CYVCV检测方法包括指示植物鉴定、酶联免疫吸附法、直接组织点免疫法(宾羽等,2015)、RT-PCR(陈洪明等,2015)、逆转录环介导等温核酸扩增法(刘     

高通量测序鉴定柑橘黄化脉明病毒诱导柠檬差异表达microRNA

 柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是我国新发生的危害柠檬的重要病毒。本研究对接种和未接种CYVCV的柠檬叶片样品进行了高通量小RNA测序,以甜橙基因组作为参考,采用生物信息学软件进行miRNA鉴定和靶基因预测。结果显示CYVCV侵染对13个保守miRNA和12个新鉴定的非保守miRNA的表达具有调控作用,对这些差异表达miRNA的靶基因进行预测和功能分析的结果显示,保守miRNA的靶基因功能在植物逆境反应及光合作用和能量代谢相关通路中具有明显的富集现象,推测与CYVCV侵染柠檬植株及诱导病害症状表现有关,而多数新鉴定的非保守miRNA的靶基因功能未能注释到KEGG通路。采用实时荧光定量PCR对部分miRNA的表达水平进行了分析,结果表明miRNA的表达水平在接种CYVCV后30~90 d呈时间动态变化。研究结果为进一步揭示CYVCV与柠檬互作机制提供了重要信息。     

广西柑橘衰退病和黄脉病调查及其病原病毒的遗传多样性分析

为明确柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)和柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)在广西柑橘上的发生?分布及其遗传变异情况, 于2020年至2021年对百色?北海?崇左?贵港?桂林?河池?贺州?来宾?柳州?南宁?梧州和玉林等12个柑橘产区进行了病毒病调查?采用RT-PCR对采集样品进行了病毒检测, 并基于病毒分离物外壳蛋白(coat protein, CP)基因的核苷酸序列进行比对分析, 构建系统发育树?结果表明:采集的737份柑橘样品中, CTV的检出率为20.62%, CYVCV检出率为18.32%, CTV的检出率略高于CYVCV?病毒复合侵染的现象在采集的柑橘样品中普遍存在, CTV和CYVCV复合侵染率高达34.50%?对RT-PCR产物测序共获得12个CTV分离物和6个CYVCV分离物的CP基因序列?遗传多样性分析发现, CTV和CYVCV的CP基因序列都较保守, CTV分离物的遗传进化与地理来源?寄主来源均没有明显相关性, 但CYVCV分离物的遗传进化与地理位置具有相关性, 而与寄主来源无明显相关性?上述研究结果可为深入了解CTV和CYVCV在广西的流行情况以及柑橘病毒病的检疫和防控提供参考?     

湖南省永州地区柑橘慢衰病与黄龙病病原鉴定及分布调查

为明确湖南省柑橘黄化症状与柑橘慢衰病和柑橘黄龙病的相关性,应用形态学和分子生物学方法对湖南省永州地区表现黄化症状的柑橘进行了两种病原的鉴定及分布调查。结果表明,造成该地区柑橘黄化现象的主要原因为柑橘半穿刺线虫和黄龙病菌对柑橘的侵染。所检样本中,柑橘慢衰病平均发生率为82.1%,土壤中的半穿刺线虫群体密度最高达到3 077条/100mL。永州地区柑橘黄龙病病菌属于韧皮部杆菌属类细菌亚洲种,平均检出率为64.3%。柑橘半穿刺线虫和黄龙病菌在柑橘园存在混合侵染现象,混合侵染率为53.6%。柑橘半穿刺线虫在永州地区柑橘产区分布广泛,是造成柑橘黄化症状的重要病因,重视并有效防控柑橘半穿刺线虫已迫在眉睫。     

尤力克柠檬上一种新病害的生物学特性及RT-PCR检测

近年我国云南瑞丽市的一果园尤里克柠檬上出现一种引起叶片皱缩、反卷或呈船形,叶背水浸状、侧脉脉明、黄化的柑橘新病害。为明确该病害的病原及其生物学特性,通过田间观察、病样接种、电镜观察,并基于柑橘黄脉病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)外壳蛋白基因设计引物对病样进行RT-PCR检测。结果表明,该病是一种嫁接传染性病害,能侵染柠檬和酸橙品种且症状明显,并能摩擦接种到辣椒和豇豆等草本植物。该病发病最适温度为18~24℃。春梢嫩叶症状表现明显,夏梢和秋梢基本不表现症状,而晚秋梢也表现出较春梢稍弱的典型症状。引致该病的病毒为(13~15)nm×(400~1 000)nm大小的联合丝状病毒。RT-PCR扩增产物为614 bp,且其与CYVCV外壳蛋白序列相似性达97%以上,表明该病害是由CYVCV引起的柑橘黄脉病,并初步建立了该病的RT-PCR检测技术。     

亚洲柑橘木虱中柑橘黄脉病毒的鉴定

<正>柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)为正单链RNA病毒，属于α线性病毒科Alphaflexiviridae印度柑橘病毒属Mandarivirus成员，病毒粒子为弯曲线状，基因组大小约为7 529 nt^[1]。CYVCV可侵染大部分柑橘品种，对柠檬和酸橙危害尤为严重。CYVCV 2009年在我国首次发现，现已在我国柑橘主产区均有发生，已知的传媒昆虫为柑橘粉虱(Dialeurodes citri)和棉蚜(Aphis gossypii)^[2-4]。     

基于原噬菌体类型的广西柑橘黄龙病菌种群分析

2016年-2021年, 从广西各柑橘产区采集叶片斑驳?黄化等疑似黄龙病症状的柑橘样品, 利用黄龙病特异引物和基于原噬菌体类型的特异引物对样品进行鉴定及分析, 结果显示, 所采集的3 293份样品中有856份样品为黄龙病阳性样品, 阳性样品的检出率为25.99%, 阳性样品在广西的14个地市均有分布?基于原噬菌体类型的黄龙病菌种群分析发现, 广西存在7种类型的菌株, 分别是type 1菌株?type 2菌株?type 3菌株?type 1+type 2菌株?type 2+type 3菌株?type 1+type 2+type 3菌株及未检出任何类型菌株(none type), 其中, type 2类型原噬菌体菌株为优势种群?     

南瓜蚜传黄化病毒遗传多样性分析

哈密瓜是新疆重要的经济作物之一.南瓜蚜传黄化病毒(cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)是世界重要的瓜类黄化病毒,在新疆哈密瓜植株上普遍发生,严重威胁新疆哈密瓜的品质与产量.本研究从新疆阿克苏市随机采集120份哈密瓜叶片样品,经过RT-PCR检测证实38个样品为CABYV阳性...     

江西福建部分地区猪群中布病血清学调查

为了解江西省及周边省份布病在猪群中的感染情况,本文应用微量凝集试验对主要来自江西省的831份猪血清样本,进行了布病血清学调查,结果831份血清样本中有37份阳性,阳性率4.45%;其中江西省586份血清中有25份阳性,阳性率4.26%;福建省245份血清中有12阳性,阳性率4.89%.说明江西省及周边地区猪群中存在布病的感染,阳性率在5%左右.     

不同品种柑橘叶际真核生物多样性及 青苔病原差异分析

柑橘青苔病是一种普遍发生且危害严重的病害?本试验选择3个甜橙品种和3个杂柑品种为研究对象, 在重庆忠县和开州分别采集有病症和无病症的叶片样品共24份, 利用Illumina Miseq高通量测序技术对两地不同品种柑橘叶际真核生物的群落组成?结构及差异进行分析?结果表明, 24份柑橘叶片样本共检测到491个OTUs, 多样性较为丰富?柑橘叶表真核生物的优势属为枝孢菌属 Cladosporium, 橡胶藻属 Heveochlorella, 杯梗孢属 Cyphellophora, Parastagonospora 等?有病症组中丰度显著高于无病症组的物种包括不可培养的球藻uncultured Apatococcus?黄绿异小球藻 Heterochlorella luteoviridis?海南橡胶藻 Heveochlorella hainangensis?无柄杯梗孢 Cyphellophora sessilis?椭圆球藻 Chloroidium ellipsoideum 和胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides, 它们可能与柑橘青苔的发生密切相关?不同品种和不同区域的12份有病症组叶样中优势菌群的组成结构及丰度均存在较大差异?柑橘青苔病的发生可能是由多种绿藻及病原真菌复合侵染造成的, 青苔侵染对柑橘叶际真核生物群落结构有很大影响, 不同品种及地区间柑橘叶片受青苔侵染后的叶际优势菌群特征有差异?     

基于3种原噬菌体基因的赣南地区黄龙病菌种群动态分析

柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)对全球柑橘产业造成了重大经济损失。为明确赣南地区柑橘黄龙病菌基因组上原噬菌体的分子特征和传播动态,本研究对采自赣南10个市县区的470份样品进行HLB检测,并对阳性样品中3种类型的原噬菌体（SC1、SC2和P-JXGC-3）上的SC1_gp050、SC2_gp040和PJXGC_gp08基因序列进行遗传多样性分析和谱系地理学分析。结果显示,共检出74份HLB阳性样品,包括7种原噬菌体组合类型:SC1、SC2、P-JXGC-3、SC1+SC2、SC1+P-JXGC-3、SC2+P-JXGC-3和SC1+SC2+P-JXGC-3,含SC2类型的原噬菌体检出41份,检出率为55.41%,说明赣南地区含SC2类型的原噬菌体菌株最为普遍。遗传多样性分析结果表明,赣南地区的3种原噬菌体的基因交流频繁,遗传分化现象不明显。选择压力分析结果显示,SC1和P-JXGC-3类型的原噬菌体均处于负向选择,SC2类型的原噬菌体处于正向选择。基于3种原噬菌体上的基因构建的中介网络图和单倍型分布表结果显示,3种原噬菌体均存在1个祖先单倍型,其他独有单倍型均是由该祖先单倍型经多次突变而来,其中PJXGC_gp08基因产生的独有单倍型最多。时空动态分析结果显示,SC1类型原噬菌体存在2条传播路径,分别为安远和全南地区间的相互传播(3相似文献   

柑橘溃疡病菌快速诊断胶体金速测卡的研制

将制备并提纯的抗Xcc单克隆抗体、多克隆抗体及重组抗体,采用间接ELISA方法对比其效价和特异性,筛选用于胶体金速测卡的最优抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗Xcc单抗Xcc-2D8,固定于金标垫上;利用双抗夹心原理,将单抗Xcc-2D6和羊抗鼠抗体分别固定于硝酸纤维素膜上,作为检测线(T线)和质控线 (C线),经试验条件优化,组装胶体金速测卡密封干燥保存.对Xcc菌悬液及柑橘样本浸泡液进行检查.结果表明ELISA方法筛选出2株特异性强、稳定性好的抗体(Xcc-2D8效价为1∶128 000倍、Xcc-2D6效价为1∶256 000倍),应用于胶体金速测卡的研发;所研制速测卡对Xcc菌悬液的最低检测下限为1×103～1×104 cfu/mL,对多个地区的206份柑橘样本进行实际检测所得结果与qPCR方法所得结果具有较高一致性(kappa值=95.15％),混杂的柑橘组织液对检测结果无影响,检测时间控制在10 min以内,检测常见细菌及植物病菌显示特异性良好,各批次速测卡无批间差异,速测卡保存方便稳定性良好.     

柑橘溃疡病的根除历史及广西主栽柑橘品种的抗病性

柑橘溃疡病是影响世界柑橘生产的重大检疫性病害.美国、澳大利亚和中国等国家采用在疫区大面积砍伐柑橘树的方法试图根除柑橘溃疡病,但经过一个世纪的努力,柑橘溃疡病并未被完全根除.广西地处热带和亚热带地区,气候温暖,雨水丰沛,利于柑橘溃疡病菌的繁殖与传播,使广西主栽的柑橘品种(沃柑、茂谷柑、脐橙、沙田柚等)均表现为高感溃疡病特...     

柑橘黄龙病症状与“Candidatus Liberibacter asiaticus”PCR检测结果的相关性分析

柑橘黄龙病症状较为复杂,且因寄主品种、生长期、病程等因素而异。利用PCR检测其病原菌"Candidatus Liberibacter spp."是目前柑橘黄龙病诊断的可靠方法之一。分析柑橘黄龙病症状与PCR检测结果的相关性有助于提高黄龙病的田间诊断准确率。本研究结果表明,与PCR检测相比,根据症状诊断柑橘黄龙病具有较高的假阳性率(8.20%)和假阴性率(50%);通过分析1 839个样品的症状与病原PCR检测结果发现,表现为斑驳型黄化、均匀黄化和"绿岛"这3种叶部症状以及"红鼻子果"和畸形果这2种果实症状的PCR病原检出率高;具有斑驳和黄化、黄化和"绿岛"、"绿岛"和花叶等复合症状样品的PCR检测"Ca.L.asiaticus"的阳性率最高;直径小于1 cm的幼果中的"Ca.L.asiaticus"检测稳定性低。这些结果为更准确地通过症状诊断柑橘黄龙病提供了科学依据。     

苹果茎沟病毒柑橘碎叶株系的分布与序列分析

为明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)柑橘碎叶株系(citrus tatter leaf virus,CTLV)在中国柑橘产区的发生分布及其分子特性,于2017—2021年对我国12个柑橘主产区开展系统调查,并采用多重比对以及系统发育分析法对CTLV的全序列进行分析。结果表明,从12个柑橘主产区采集的2 012份疑似样品中检测出413份感CTLV阳性样品。除陕西省外,其余11个柑橘主产区样品中均检测出CTLV,并且柚类样品中CTLV的检出率最高,达到32.31%。对分离获得的22株CTLV毒株和已知的7株CTLV以及5株ASGV毒株进行全序列分析,发现所有34株毒株的核苷酸序列相似性为78.6%～99.8%,且CTLV序列的保守性较高。此外,与其他4株ASGV毒株相比,本研究中22株CTLV毒株与ASGV-MK毒株(GenBank登录号为MZ127820.1)具有更近的亲缘关系。推测CTLV中国毒株间的亲缘关系可能与其采样地和寄主品种有关。