猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步临床应用

猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)可引起新生仔猪腹泻、呕吐,猪萨佩罗病毒(PSV)可引起猪脑脊髓灰质炎、腹泻等多系统综合征,临床上这3种病毒混合感染很普遍,疾病症状相似,依靠临床症状和剖检变化很难对这3种病毒做鉴别检测,需借助实验室诊断方法.为了建立快速鉴别检测这种病毒的方法,本研究参照GenBa...     

2017-2021年广西腹泻猪群主要病毒性腹泻病原检测

为掌握广西地区导致猪群腹泻的主要病毒性病原的流行态势,为养殖场猪病毒性腹泻的综合防控提供依据,用实时荧光RT-PCR检测方法,对2017年1月—2021年6月广西14个地市489个猪场1206份临床腹泻样品进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCo...     

猪冠状病毒的起源与遗传演化

冠状病毒变异率高,宿主广泛,主要感染哺乳动物和禽类,严重威胁公共卫生安全与养殖业发展.生猪养殖业中,冠状病毒也是危害猪只健康的重要病原.本研究对4种代表性猪冠状病毒:猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic...     

猪Delta冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用

猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均是能引起仔猪腹泻的冠状病毒,通过临床症状和剖检很难鉴别诊断,建立同时检测且能够鉴别诊断这3种疾病的快速检测方法对于临床诊断具有重要的意义。参照GenBank中登录的PDCoV,NPEDV M和TGEV N基因的基因序列,利用Primer5.0设计合成3对能扩增特异性目的片段的引物,构建重组质粒,并对RT-PCR反应条件进行优化,建立了检测PDCoV,PEDV和TGEV的多重RT-PCR诊断方法,并对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性分析。利用该方法对河南176份临床样品进行检测,并与普通RT-PCR检测方法对该检测方法进行比较分析。结果表明,所建立的三重RT-PCR方法对PDCoV的最低检测量是3.14×103拷贝/μL;PEDV的最低检测量是3.88×104拷贝/μL和TGEV的最低检测量是3.68×104拷贝/μL。所建立的方法具有较好的特异性,对猪博卡病毒(PboV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟(CSFV)和猪圆环病毒(PCV)等猪常见病毒的扩增结果均为阴性。应用所建立的三重RT-PCR方法对176份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV,PDCoV和TGEV检测,并将检测结果和单重RT-PCR检测方法比较,结果显示,多重RT-PCR检测结果与常规单一RT-PCR的结果符合率均为100%。综上,本试验建立了能同时检测PDCoV,PEDV和TGEV的三重RT-PCR方法,为临床上这3种疫病的快速检测和流行病学调查奠定了基础。     

猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒双重TaqMan qRT-PCR检测方法的建立与初步应用

为建立可同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪丁型冠状病毒(PDCoV)的双重TaqMan qRT-PCR方法,本研究根据GenBank中的PEDV M基因及PDCoV N基因设计了两对特异性引物和探针,构建重组质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立其检测方法,结果显示,根据两种病毒质粒标准品构建的标准曲线的相关系数(R...     

猪主要腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法，本试验参考GenBank中登录的猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine, TGEV)M基因、猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus, PSV)VP1基因、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)N基因和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)N基因的序列，分别设计相应的引物，构建4种病毒的阳性质粒。以阳性质粒为标准品，通过优化反应条件和反应程序，建立了检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法，并确定了该检测方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示，该方法具有较高的灵敏性，对PSV、TGEV、PDCoV和PEDV的最低检测量分别为1.37×10²,1.44×10²,1.51×10²和1.56×10²拷贝/μL。而扩增猪细小病毒(porcine parvovirus, PPV)、猪瘟病...     

猪新发冠状病毒研究进展

当前，由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）导致的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情正在全球暴发大流行，这也引发业界对于动物源性冠状病毒的高度关注。猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）和猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）是近年来新发现的猪冠状病毒，不但严重危害到养猪业，对公共卫生安全也具有潜在威胁风险。本文结合国内外现有文献，从PDCoV和SADS-CoV的病原学、病毒起源与进化、致病性以及检测诊断技术等方面进行综述，并提出展望，以拓展对SARS-CoV-2的认识，并为PDCoV和SADS-CoV的后续研究提供参考借鉴。     

猪腹泻相关肠道病毒分离研究进展

猪腹泻是全球养猪生产中最常见的疾病之一,病毒性腹泻具有传播快、致死率高和防控难的特点。常见的引起仔猪腹泻的病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV),近几年新发现的猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)也与仔猪腹泻相关。病毒分离是病毒感染诊断的金标准,也是进行病毒研究的前提。对上述6种常见猪肠道病毒的分离进展进行综述,可为掌握这些病毒的分离情况、疾病发展动向监测、疫苗研发以及猪腹泻病的防控提供参考。     

猪流行性腹泻综合防治

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的一种肠道传染病,病猪以水样腹泻、呕吐、脱水为特征。1病原猪流行性腹泻病毒属冠状病毒科冠状病毒属,为核糖核酸（RNA）型,以球状为主,是外有囊膜,囊膜上有花瓣状突起的完全病毒。此病毒在组织细胞上培养困难,对理化因素抵抗力不     

4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒，本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针，经过方阵法优化恒温隔绝式荧光RT-PCR(iiRT-PCR)反应条件，建立了检测这4种猪腹泻病毒iiRT-PCR方法。用建立的iiRT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV),并对iiRT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果显示该方法特异性强，对PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV的检测下限分别为10²、10²、10³、10³ TCID₅₀/mL,并具有良好的组内和组间重复性；而荧光定量PCR方法的检测下限分别为10¹、10²、10²、10^2<...     

2018年江西及福建省新现猪急性腹泻冠状病毒的分子流行病学调查

猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-CoV)是2017年在我国广东首次发现的一种可导致新生仔猪急性水样腹泻及死亡的新型冠状病毒。为调查2018年江西及福建猪群中该病毒的感染情况,试验建立了一种SADS-CoV套式RT-PCR检测方法,并调查2018年江西及福建腹泻猪只样本中SADS-CoV的流行情况。根据GenBank数据库中SADS-CoV GDS04毒株(登录号MF167434)的核衣壳蛋白(N)基因核酸序列,设计了两对特异性套式引物。以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等病毒的基因组为模板检测引物的特异性。通过优化反应条件建立了检测SADS-CoV的套式PCR方法,用建立的套式PCR方法对2018年从江西和福建两省8个猪场采集的492份腹泻样品进行检测。应用设计的两对套式引物扩增出了650 bp和291 bp两个特异性片段。试验建立的套式PCR检测方法特异性好,只能扩增SADS-CoV,其最低检测限度为102拷贝/μL。利用所建立的方法对来自江西和福建省的492份腹泻猪临床样品进行检测,从福建猪群样品中检出了2份SADS-CoV感染,未从江西临床样品中检出SADS-CoV。试验将为SADS-CoV的临床检测提供一种套式PCR检测方法,结果表明该病毒在福建猪群而未在江西腹泻猪群中流行,将对SADS-CoV的临床诊断等具有应用价值。     

猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的快速鉴别诊断,根据PEDV的N基因和TGEV的S基因序列设计引物,并以猪β-肌动蛋白(ACTB)作为内参对照,建立了PEDV和TGEV的TaqMan探针双重荧光定量PCR检测方法。结果显示：该方法对PEDV、TGEV和ACTB的检测灵敏度分别为1、10和10 copies/μL;PEDV和TGEV敏感度为10^0.02 TCID₅₀和10^0.05 TCID₅₀,高于常规RT-PCR,批内和批间变异系数均小于1%。与猪德尔塔冠状病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒、猪轮状病毒、乙型脑炎病毒、塞内卡谷病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型均无交叉反应。采集124份临床病料样品进行检测,PEDV阳性率为42.74%,TGEV阳性率为8.87%,检测结果与该病毒单一荧光RT-PCR方法的检测结果均一致,证明该方法具有较高特异性和敏感性,可用于PEDV和TGEV临床病料检测。     

仔猪流行性腹泻的最新流行情况

猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）同属于1型冠状病毒。两种病毒引起的仔猪腹泻在临床上较难鉴别诊断,需要进行实验室病原学的鉴别诊断。相对而言,TGEV的传播速度较快,对仔猪的危害也更为严重。在欧洲地区,PEDV主要引起较大日龄猪的腹泻（6～15周龄）,造成感染猪群较轻微腹泻流行,并在1周后很快康复,     

猪流行性腹泻研究概况

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种猪肠道传染病，以水泻、呕吐和脱水为特征。70年代初首先发现于英国和比利时。1976年，暴发了类似猪传染性胃肠炎（TGE）的急性腹泻，而且已排除了TGEV作为病原的可能．也不是其他已知肠致病性病原．Wood把这次暴发的腹泻称为腹泻Ⅱ型，以便与70年代初发生的腹泻（称为Ⅰ型1区别。1978年Pensacrt等发现一种类冠状病毒的病原与Ⅰ型腹泻暴发有关。实验表明Ⅰ型和Ⅱ型腹泻的发生是由相同的冠状病毒引起的．     

一起猪流行性腹泻的成功防控及启示

1978年,Pensaert等[1]在比利时和英国首次报道分离到猪流行性腹泻病毒（PEDV）。猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒引起的一种以病猪发生水样腹泻、呕吐、脱水消瘦和新生仔猪高死亡率为临床特征的急性高度接触性肠道传染病[2]。其病原PEDV隶属于冠状病毒科冠状病毒属,基因组为单股正链RNA。PEDV对外界环境抵抗力弱,对乙醚和氯仿敏感,一般的消毒剂均可将其杀灭。     

猪病毒性腹泻的综合防治

（一）流行特点猪流行腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒均属于冠状病毒科冠状病毒属。这2种病毒都怕热,但耐低温,且低温季节活性较强,因此,这2种疾病多发生于冬春等寒冷季节。多从第1年的11月份延续到第2年的4、5月份。也有蝗猪场常年发病。各个年龄段的猪都有发病表现,其中哺乳仔猪发病率和死产率都最高,这是猪流性腹泻和猪传染性胃肠炎的一般发病特点。     

3种致猪腹泻病毒的多重RT-PCR检测

试验建立了用于检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与猪轮状病毒(PRV)的三重RT-PCR方法,以调查猪群中腹泻病毒感染情况.通过该方法对采自广东省规模化猪场的95份临床疑似病毒性腹泻病料进行了检测,结果表明,猪流行性性腹泻病毒阳性率为33.7%,猪传染性胃肠炎病毒阳性率为4.2%,猪轮状病毒阳性率为20%;猪流行性性腹泻病毒和猪轮状病毒混合感染率为8.4%,猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染率为2.1%.     

猪流行性腹泻疫苗的研究

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由尼多目（Nidovirales）、冠状病毒科（Comnaviridae）、冠状病毒属（Coronavirus）α-冠状病毒中的猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种急性、高度传染性的肠道疾病,该病以急性肠炎、呕吐、水样腹泻和脱水为主要特征。各种日龄的猪均易感,尤其是哺育仔猪,发病率高达100％,死亡率为30％～80％。     

近期猪群病毒性腹泻的发病情况及防控措施调查

猪病毒性腹泻主要由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和流行性腹泻病毒（PEDV）所致,TGEV和PEDV同属Ⅰ型冠状病毒。随着规模化养猪业的快速发展,我国一直就有猪病毒性腹泻疫情的地方性流行报道。该病一般多发于冬春寒冷季节,病猪主要表现为灰绿色或黄色水样腹泻,