不同试剂盒检测急性肝胰腺坏死病比对与分析

为加强水生动物防疫系统实验室能力建设,东莞市动物疫病预防控制中心参加了2020年由全国水产技术推广总站组织的对虾急性肝胰腺坏死病病原检测能力测试。按照中国水产科学研究院黄海水产研究所(以下简称黄海所)下发的《作业指导书》,对样品进行鉴定。检测结果为满意。另外,东莞市动物疫病预防控制中心以本次参测的样品为检测样品,选用3种商品化的对虾肝胰腺坏死荧光PCR检测试剂盒(A、B、C)进行试验分析,结果表明:A与C的检测结果与标准结果相同,B未检出阳性盲样。     

禽流感盲样血清检测试验结果分析

<正>根据《2011年河北省兽医系统实验室检测能力比对工作实施方案》,提高兽医实验室检测能力和水平,缩小实验室之间检测结果的差异,确保检测工作质量,特进行了本次试验。盲样血清样品、抗原、阳性血清是均由河北省省站统一分配。6个县相关实验室参加了禽流感盲样样品检测能力比对试验,结果详见表1。     

锦鲤疱疹病毒环介导等温扩增检测方法的建立

为建立一种快速检测锦鲤疱疹病毒(CyHV-3)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据Gen Bank中登录的CyHV-3 Sphi基因编码区序列设计了LAMP特异性引物,经反应体系和反应条件优化,建立了检测CyHV-3的LAMP方法。结果表明,本研究建立的LAMP检测方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鱼疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为13.9拷贝/μL,灵敏度高。使用LAMP方法和普通PCR方法对四川地区的15个检测点采用鱼鳃拭子非致死性采集的临床样品进行检测,阳性检出率均为31.40%(27/86)。表明本实验建立的该检测方法具有高灵敏度、高特异性、快速和简便的特性,适用于临床上对锦鲤疱疹病毒病的快速诊断。     

四川省蚕种质量监督检验站通过省级计量转版复审认证

四川省蚕种质量监督检验站按照《检测和校准实验室能力的通用要求》(GB／T15481—2000idt ISO／IEC 17025：1999),建立了质量体系,编写了《质量手册》、《程序件》、《作业指导书》、《质量记录件》等质量体系件,完善了组织机构、人员配备、仪器设备、管理制度、检测工作和实验室环境条件等方面的建设,满足了计量检定、测试能力和可靠性等方面的要求。     

乳粉中蜡样芽胞杆菌检验能力评价结果分析

[目的]本实验室参加2022年国家市场监督管理总局食品安全抽检监测司组织的“奶粉中蜡样芽胞杆菌检验能力评价”,对检测结果进行评价分析。[方法]对样品编号为NFLY-13、NFLY-17两个乳粉样定量检测。按照作业指导书、《GB 4789.14—2014食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》（第一法）对样品检验,用蜡样芽胞杆菌显色培养基、VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对试验数据进行比对。[结果]检测与比对结果基本一致。[结论]两个考核样品检测结果获满意评价。     

养殖锦鲤鲤鱼浮肿病的检测与鉴定

北京房山某锦鲤养殖场锦鲤发生大量死亡,患病锦鲤呈烂鳃、肾脏糜烂、身体浮肿;症状类似锦鲤疱疹病毒（koi herpes virus,KHV）感染,但经PCR检测排除了KHV感染。为进一步确定病原,对发病鱼进行了临床症状观察、病毒分离、细菌分离培养、病鱼组织超薄切片电镜观察和PCR扩增等检测。通过病鱼组织超薄切片电镜观察,在肾脏内可见200 nm×400 nm的痘病毒样颗粒。抽提病毒核酸后,用已知的鲤鱼浮肿病毒（carp edema virus,CEV）的保守序列设计2对引物进行PCR扩增,扩增出548和180 bp片段,测序结果和GenBank公布的CEV H504株序列完全一致。根据发病鱼临床症状和实验室检测结果,最终确定该病为CEV引起的鲤鱼浮肿病。这是在中国首次发现的鲤鱼浮肿病。     

伪狂犬病病毒核酸检测能力验证样品制备及其应用

能力验证样品的制备是实验室病原核酸检测能力验证的难点和核心内容,本研究以伪狂犬病病毒南阳株细胞培养物为材料,通过高温处理的方式灭活病毒,研制了伪狂犬病病毒核酸检测的能力验证样品,经均匀性和稳定性检验证实样品达到中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品的要求。利用能力验证样品,设计和实施了"BIQTC-2013-01《猪伪狂犬病病毒核酸检测》能力验证计划",共有7家实验室参试,验证满意率达100%。伪狂犬病病毒核酸检测能力验证样品的研制和在能力验证计划中的应用,为评估我国各级实验室伪狂犬病病毒核酸检测的能力提供了较有价值的借鉴和参考。     

锦鲤疱疹病毒双基因检测方法的研究

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)双基因检测方法,本研究根据KHV聚合酶基因(Sph)和胸苷激酶基因(TK)的保守序列设计2对引物,建立两基因同时检测的PCR方法.结果表明,利用双基因同时检测KHV,可以同时特异扩增出570 bp和155 bp片段,而与鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒和鲤鱼疱疹病毒无扩增反应.而且所建立的双基因检测方法对临床样品的检测结果与单一PCR方法比较符合率为100％.为进一步研究KHV以及诊断方法奠定了基础.     

猪传染性胃肠炎病毒陕西分离株S蛋白抗原位点的真核表达

猪传染性胃肠炎(TGE)是严重危害全世界养猪业健康发展的一种高度传染性病毒病,其病原猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S蛋白携带有主要的B淋巴细胞识别的抗原决定簇,是诱导机体产生保护性中和抗体的主要抗原。本研究以提取的TGEV陕西分离株感染的ST细胞的RNA为模板,采用RTPCR方法扩增编码S蛋白上包含C、B、D、A 4个抗原位点的基因片段,将目的片段连接到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB上,构建重组表达载体,转染293T细胞后,通过Western blot检测目的基因的表达。结果成功克隆到编码S蛋白C、B、D、A 4个抗原位点的基因片段,以TGEV阳性猪血清和抗His标签单抗的Western blot结果均显示,目的基因在293T细胞中获得表达。本研究为TEG核酸疫苗的研制奠定了基础。     

2022年湖南省兽医实验室检测能力比对及非洲猪瘟检测能力验证

实验室检测能力比对与能力验证是评估实验室检测质量的重要手段。2022年4月,按照农业农村部关于检测能力比对的工作部署和要求,湖南省组织全省14个市级77个县级兽医系统实验室开展了检测能力比对,267个实验室开展了非洲猪瘟能力验证。市级开展禽流感病毒H5/H7亚型核酸鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、O型口蹄疫病毒抗体检测3个项目,县级开展非洲猪瘟病毒核酸、O型口蹄疫病毒抗体以及布鲁氏菌抗体检测3个项目,非洲猪瘟检测实验室开展非洲猪瘟病毒核酸检测项目,每个项目各5份盲样。结果显示:12个市级和59个县级系统实验室所有比对项目检测结果全部准确,实验室整体准确率为78.02%,1 355份样品中1 317份样品检测结果准确,样品整体准确率为97.20%;267个参加非洲猪瘟能力验证的实验室中,224个实验室核酸检测结果准确,实验室整体准确率为83.90%,1 335份样品中1 265份样品结果准确,样品整体准确率为94.76%,其中屠宰企业样品准确率最低(93.30%)。结果表明:湖南省兽医实验室检测能力整体良好,但部分县级兽医系统实验室及屠宰企业实验室检测能力有待加强。各地应继续加强实验室检...     

等位基因特异性PCR技术在绵羊基因SNP分型中的建立

为了在绵羊核基因和线粒体基因中建立简便、快速、准确的SNP分型技术,选择骨形态发生蛋白受体1B基因(BMPR1B)(核基因)A746G突变位点和线粒体基因16S rRNA基因(T1112C)、tRNA-His基因(C11606T)突变位点,对BMPR1B A746G采用三引物等位基因特异性PCR,结果每个样品使用2次扩增即可判定基因型,减少了限制性内切酶的使用。T1112C和C11606T采用四引物等位基因特异性PCR进行分型,T1112C位点检测中,所有样品均能扩增出569 bp最长片段的外引物产物,扩增出349 bp片段的样品为TT野生型,扩增出263 bp片段的样品为CC突变型,没有异质性。C11606T位点检测中,所有样品均能扩增出572 bp最长片段的外引物产物,扩增出408 bp的片段为CC野生型,扩增出213 bp的片段为TT野生型,没有异质性。结果表明四引物等位基因特异性PCR技术可以用于线粒体基因组SNP分型。     

猪瘟病毒核酸检测国家级能力验证结果分析

对猪瘟病毒核酸的检测是实验室检测猪瘟感染的主要手段。为全面考察动物疫病检测机构对猪瘟病毒核酸的检测能力,国家认证认可监督管理委员会(以下简称"认监委")组织了A类能力验证项目"猪瘟诊断检测技术"(CNCA-19-A01),该项目由中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担。参考实验室负责制备了检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,不限定检测方法,参试实验室对各个盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现"不满意"结果的单位可参加补测一次,若补测结果仍为"不满意",则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次猪瘟病毒核酸检测的实验室共有97家,初测满意率为93.81%,初测和补测的总体满意率为98.97%。此次能力验证结果表明,我国90%以上猪瘟检测机构能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟诊断和监测的需求。对不达标机构,通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,帮助该单位及时纠正错误,进一步提升猪瘟诊断能力。     

农业部转基因兽用微生物环境安全监督检验测试中心（北京）顺利通过机构考核和审查认可及资质认定复查现场评审

近日,由农业部农产品质量安全监管局组织的现场评审专家组对中国兽医药品监察所承担的“农业部转基因兽用微生物环境安全监督检验测试中心（北京）”进行了实验室资质认定、部级质检机构考核和审查认定复评审。评审期间,评审组听取了中心工作情况介绍,现场检查了实验室设施与环境,审阅了质量体系文件及其运行记录等相关文件资料,对中心人员进行了现场试验考核和理论考试,通过盲样、人员比对和仪器比对,对实验室质量管理体系运行的符合性和检测能力进行了现场评审。通过评审,专家组一致认为中心的管理体系和技术能力满足《农业部产品质量监督检验测试机构审查认可评审细则》、《农产品质量安全检测机构考核评审细则》和《实验室资质认定评审准则》的要求。     

猪瘟病毒核酸检测国家级能力验证结果分析

对猪瘟病毒核酸的检测是实验室检测猪瘟感染的主要手段。为全面考察动物疫病检测机构对猪瘟病毒核酸的检测能力，国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织了A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01），该项目由中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担。参考实验室负责制备了检测样品，并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样，不限定检测方法，参试实验室对各个盲样进行定性判断，并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测一次，若补测结果仍为“不满意”，则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次猪瘟病毒核酸检测的实验室共有97家，初测满意率为93.81%，初测和补测的总体满意率为98.97%。此次能力验证结果表明，我国90%以上猪瘟检测机构能够提供正确的检测结果，可以满足猪瘟诊断和监测的需求。对不达标机构，通过本次能力验证项目查找出了存在的问题，帮助该单位及时纠正错误，进一步提升猪瘟诊断能力。     

猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析

猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心，猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担了国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01），全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品，并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样，由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断，并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次，若补测结果仍为“不满意”，则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家，初测满意率为92.23%，初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明，参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果，可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题，参试单位可以及时纠正错误，进一步提升猪瘟抗体的检测能力。     

论饲料实验室的样品管理

实验室的样品管理是计量认证的重点审查部分,是检验检测过程中的必须环节和关键控制点,其管理的公正性和客观性决定着检测报告是否公正、客观。因此,加强实验室样品管理对机构计量认证、行业认证、实验室自身能力建设以及实验室管理水平的提高至关重要。在多年的实验室管理中制定了比较完善的质量体系文件,对样品实行"制度化、程序化、规范化"管理,保证了盲样、留样等制度的有效运行,为实验室的科学规范化管理奠定了坚实的基础。     

2013年新疆兽医实验室检测能力比对结果分析

兽医实验室承担着动物疫病诊断、监测、检测、流行病学调查以及其它与动物防疫相关的技术工作,为动物防疫工作提供技术支持。兽医实验室检测能力比对是评价和提高实验室管理水平和技术能力的重要手段,也是加强兽医实验室质量控制的有效方法。为进一步加强兽医系统实验室管理,提高兽医系统实验室检测能力,自2011年起在全区范围内组织实施了兽医系统实验室检测能力比对,比对采用统一制作盲样,统一提供试剂,统一操作方法,统一比对时间的方式进行,结果客观反映了实验室的检测能力和技术水平,对于促进实验室检测能力提高具有重要的意义。     

3种核酸提取试剂盒对猪不同样品RNA病毒核酸提取效果的比较研究

为了筛选出高效、低成本、用时短的RNA核酸提取试剂盒,为各级实验室开展动物疫病监测提供参考,试验选择3种常用磁珠法核酸提取试剂盒(病毒DNA/RNA提取试剂盒A、病毒RNA提取试剂盒B及病毒总核酸提取试剂盒C)对临床粪便样品提取猪流行性腹泻病毒RNA、临床组织病料样品提取猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA,通过实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法进行检测,以Ct值评价分析提取效率及重复性,同时对不同试剂盒提取时间及价格进行综合比较分析。结果表明:对于粪便样品,B、C试剂盒的RNA提取效率要高于A;3种试剂盒对PRRSV浓度较高的组织样品均具有较好的提取效果,A、B试剂盒的RNA提取效率高于C试剂盒,但B、C试剂盒的重复性优于A试剂盒。其中A试剂盒对于组织样品中高浓度病毒样品提取效率较高,时间最短;B试剂盒对于粪便样品中低浓度RNA病毒提取效率最高,但价格最贵,且时间最长;C试剂盒对粪便中低浓度样品RNA提取效率高于A试剂盒,价格最低。综合提取效率、时间及成本等因素分析认为,试剂盒C性价比较高,可用于大批量临床样品检测。说明不同试剂盒对不同种类样品提取后,提取效率存在差异,实验室可根据实际情况进行选择。     

凋亡相关斑点样蛋白敲除PK-15细胞系的建立及对PRV感染的影响

本试验旨在研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞的影响.以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞(PK-15)A SC基因稳定敲除细胞系,通过T7核酸酶检测靶基因的敲除效率;CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ASC基因对细胞增殖的影响;采用流式细...     

微生物法测定婴幼儿配方乳粉中生物素含量的不确定度评定

建立微生物法测定婴幼儿配方乳粉中生物素含量的不确定度评定方法,以进行检测结果的质量控制,提高检测数据的准确性。按照GB 5009.259—2016《食品安全国家标准食品中生物素的测定》进行婴幼儿配方乳粉中生物素含量的检测,根据JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》和GB/T 27418—2017《测量不确定度评定和表示》等要求,对检测过程中产生的各不确定度分量进行评定,合成标准不确定度。结果表明：标准曲线拟合和重复性检测产生的不确定度最大;婴幼儿配方乳粉中3个含量生物素的不确定度报告：样品A(19.87±2.84)μg/100 g,样品B(30.35±4.41)μg/100 g,样品C(53.15±7.15)μg/100 g（置信区间95%,包含因子k=2）;随着样品中生物素含量的增高,检测结果的扩展不确定度也随之增大。