禽白血病A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病诊断

采用病理组织学方法和分子生物学技术对某肉种鸡场的感染鸡进行实验室诊断,在肿胀的肝、肾和法氏囊组织切片中观察到成淋巴细胞增生病变。针对禽白血病病毒(ALV)群特异性抗原P27基因进行RT-PCR扩增,肾、肺、肝、脾病料样本中ALV病原核酸的检出率分别为100%、100%、90%和50%。将扩增的目的基因序列与GenBank公布的ALV参考毒株相应序列进行比较,核苷酸序列的同源性达到93.6%~97.7%。取ALV囊膜糖蛋白gp85基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR产物。试验结果证实本次疫病是由ALV-A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病。     

广西麻鸡感染A亚群与J亚群禽白血病病毒的诊断

对疑似患有禽白血病的广西麻鸡进行病理剖检、接种DF-1细胞进行病毒分离以及对细胞培养上清进行p27抗原检测、细胞培养物进行PCR扩增,并对分离到病毒的gp85基因进行测序和分析比较。结果表明,从该病鸡同时分离到了A亚群禽白血病病毒(ALV-A)与J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为ZS14-A株、ZS14-J株。对ALV-A gp85、ALV-J gp85基因的遗传变异分析结果显示,ZS14-A与6株国内外A亚群参考毒株之间的氨基酸同源性为86.3%~87.8%,其中与国外株MAV-1同源性最高,为87.8%。ZS14-J与7株国内外J亚群参考毒株之间的氨基酸同源性为83.4%~96.1%,其中与J亚群原型株HPRS103同源性最高,为96.1%。     

J亚群禽白血病的病理诊断

禽骨髓型白血病 (Myelocytomatosis)或骨髓细胞瘤病是由禽白血病 J亚群 (ALV- J)引起 ,主要发生于肉种鸡的一种肿瘤性疾病 ,是近年来国际兽医界广为报道的一种新型传染性肿瘤性禽病 ,目前业已侵袭世界上一些品种的原种鸡场 ,鸡群感染率可达 5 0 %,给世界肉鸡业造成了巨大损失。我国肉种鸡主要从国外引进 ,肯定也难以幸免 ,但到目前为止公开报道的并不多见 ,近两年来在送检的众多肉种鸡肿瘤性疾病中 ,有 4例在流行病学、剖检病变及组织病理学上完全符合骨髓型白血病的发病情况 ,据此诊断为 J亚群禽白血病。1　发病情况在 4例发病鸡群中有…     

A、J亚群禽白血病病毒感染肉用种鸡的诊断

通过流行病学调查、剖检病变和组织病理学观察,结合PCR技术检测病原核酸,确诊肉用种鸡群发生了由ALV—A和ALV—J感染而导致的淋巴细胞性白血病和骨髓细胞瘤型白血病。在检测的6只病鸡中,6只病鸡均感染了ALV—J,2只病鸡感染了ALV-A.     

三黄鸡临床血管瘤病例中分离出A亚群与J亚群禽白血病病毒

为了解禽白血病病毒在广西鸡群中流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清p27抗原检测、PCR扩增,对临床血管瘤型禽白血病的三黄鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行测序和序列比较。结果表明,从1只病鸡同时分离到了一株A亚群禽白血病病毒(ALV-A)与一株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为HG01-A株和HG01-J株。ALV-A gp85与7株A亚群氨基酸同源性为85.8%~87.5%,与A亚群美国株MQNCSU同源性最高为87.5%,与A亚群原型株RSA同源性为86.9%。而ALV-J gp85与7株毒株核酸序列同源性为84.0%~93.8%,与广东株XX2-08以及四川株SCSM01同源性最高为93.8%,与英国原型株HPRS103同源性为90.2%。进化分析进一步表明,HG01-A与各参考株亲缘关系较远,HG01-J与SCSM01亲缘关系最近。本研究首次从同一只广西三黄鸡中同时分离到ALV-A及ALV-J,进一步完善了我国地方品种鸡群中禽白血病的流行病学信息。     

蛋鸡血管瘤型J亚群禽白血病病毒的分离与鉴定

通过临床观察、剖检、接种DF-1细胞、间接免疫荧光试验和PCR等方法,从安徽父母代种鸡场、青岛平度和沙子口某商品蛋鸡场分离到3株血管瘤型J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为AH-101、PD-101、SZK-101.采集病鸡的血液、肝脏和脾脏组织,接种DF-1细胞分离病毒,提取DNA,用P11/PJ2 ALV-J引物进行PCR扩增结果为阳性,IFA检测为阳性.用J3/J4引物扩增gp85并测序,序列分析发现,3株毒株与国内外各ALV-J的相应核苷酸相似性为91.6%～96.9%,氨基酸序列的同源性为83.4%～96.9%.系统进化分析表明,AH-101和PD-101与原型株HPRS-103的亲缘关系最近,SZK-101与美国株AF247391的亲缘关系最近.     

禽J亚群白血病的PCR鉴定与病理学分析

对山东济南某蛋鸡养殖场送检的5只发病鸡,通过PCR方法进行实验室诊断并进行病理组织学分析。结果发现,病鸡肝、脾、肾等组织器官显著肿大并有灰白色肿瘤结节,瘤细胞为髓样细胞;取病死鸡的肝脏、肺脏提取DNA样本,从中扩增出ALV-J亚群特异性的病毒核酸。上述检测结果判定该病例为髓细胞瘤型禽J亚型白血病。取病鸡内脏器官进行常规石蜡切片,HE染色,镜下观察发现肿瘤组织主要由髓样瘤细胞组成,心、肾、肝等可见髓样瘤细胞浸润。     

贵州省鸡群中禽白血病病毒J亚群感染的调查

采用禽白血病J亚群抗体检测试剂盒对4个不同肉种鸡场的血清样本进行检测,发现ALV-J抗体阳性率平均达到16.52%(3.33%～0.0%).对出现肿瘤病变的显性型病鸡进行病理组织学检查,在肝、肾、脾组织中观察到大量增生的、含嗜酸性颗粒的髓细胞样瘤细胞.针对J亚群gp85基因部分序列进行PCK扩增,从ALV-J抗体阳性鸡的肝病料扩增出一条545bpDNA带,而ALV-j抗体阴性鸡的样本显现阴性反应.将扩增的gp85基因序列与国内外J亚群毒株相应序列进行比较,结果核苷酸序列的同源性分别达到94.8%～96.5%和95.50%～96.8%.综合血清学、病理组织学变化和病原分子生物学鉴定结果,证实贵州省肉种鸡群中存在ALV-J 亚群病毒感染.     

血管瘤禽白血病病毒FJ0610株的分离与鉴定

为了解禽白血病病毒在商品蛋鸡中的流行情况,试验采用病理剖检、聚合酶链式反应(PCR)以及间接免疫荧光试验(IFA)等方法对送检的疑似禽白血病病毒感染的商品蛋鸡进行了病毒分离与鉴定,并对分离株的致瘤相关基因gp85基因进行测序,与国内外各亚群禽白血病病毒进行对比。结果表明:分离、鉴定到1株J亚群血管瘤禽白血病病毒,命名为FJ0610;分离株gp85基因核苷酸序列同源性在11.5%～94.5%之间,其中与血管瘤禽白血病毒株ZH-08株同源性最高,而与E亚群毒株同源性最低;基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明FJ0610株的gp85序列与ZH-08株的亲缘关系最近。     

鸡混合感染J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增殖症病毒的初步研究

对1日龄肉鸡混合感染J亚群禽白血病病毒和禽网状内皮增殖症病毒进行了初步研究,结果表明:感染鸡生长发育不良,体重显著下降(P<0.05),新城疫疫苗免疫后血清中新城疫抗体效价明显低于对照组(P<0.05),同时使早期鸡对大肠杆菌等细菌性疾病的易感性增加,死亡率升高。这种作用在两种病毒的混合感染后尤为显著。     

禽白血病病毒分离鉴定

使用 SPF鸡胚成纤维细胞从蛋用种鸡的病料中分离到一株病毒.经禽白血病病毒（ALV） p-27抗原ELISA检测、病毒培养、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）鉴定、群特异性抗血清中和试验和动物回归试验等证明,该株病毒属于禽白血病病毒.     

禽B型白血病病毒的分离及分子分型鉴定

从送检的骨石症蛋用种鸡中分离出一株禽白血病病毒(ALV)。剖检骨石症发病鸡,采集病变的肝脏、脾脏组织,提取病毒基因组,并利用针对ALV群特异性抗原P27基因设计的引物进行PCR快速检测确定为ALV感染。将病变组织接种SPF鸡胚绒毛尿囊膜,连续传代3次。进一步针对亚群间特异性抗原gp85区设计一对引物进行PCR扩增并酶切分析。结果确认分离到的1株病毒为ALV-B亚型。     

J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定

近年来，J-亚群禽自血病的暴发流行在国内时有报道，在本研究中，自吉林某患病鸡群分离出一株病毒，采用特异性引物，经RT-PCR扩增出长度为545bp的J-亚群禽自血病病毒特异性核苷酸片段；将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖，获取其前病毒DNA，依据原型毒株RPRS-103 cDNA序列设计并合成一对引物，经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E-element基因在内的近1．8kb的DNA片段，将其连到pMD18-T载体上，转化大肠杆菌JM109，培养后提取质粒分别用Hind Ⅲ，BamHI进行单酶切和双酶切鉴定，得到了阳性重组质粒pMD18-T-JL2／env，核苷酸序列测定结果表明，该片段为J-亚群禽白血病病毒囊膜基因，其中亚型特异性片段gp85和标准对照毒株HPRS-103的同源率为94％，所编码氨基酸的同源率为87％。     

鸡白血病病毒抗原ELISA试剂盒的研制和应用

以双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）为基本原理，成功地研制出鸡白血病病毒抗原ＥＬＩＳＡ试剂盒，该试剂盒与国外同类试剂盒相比，具备相同的特异性和敏感性，对ＲＡＶ－１纯化样品的最小检出量可达０．７８ｕｇ／ｍｌ，且敏感性高于直接补体结合试验。经初步应用发现，我国商品种鸡群ＡＬＶ阳性率为０．７－１４％，在部分ＳＰＦ鸡群中未检出阳性鸡。     

J亚群禽白血病多发性肿瘤的病理改变与POR检测

两个规模化商品蛋鸡场发病鸡群临床解剖显示：脚部和翅膀有血管瘤、肌肉组织内出现纤维肉瘤,肿大的肝、脾出现髓细胞瘤;经组织病理学观察符合J亚群禽白血病（ALV-J）的病理学特征。针对ALV—J保守序列P27基因设计特异引物,建立PCR方法,从出现病理改变的各组织脏器、各多发性肿瘤中以及血液中均检测到ALV-J,证实该病为以髓细胞瘤,血管瘤和纤维肉瘤为主的多发性肿瘤传染病。对扩增产物序列进行测定后,与原型株序列进行比较,核苷酸同源性为98．27％,从分子水平上证明为J亚群禽白血病,用PCR检测进一步验证J亚群禽白血病毒的感染机制和引起鸡群的病理改变。     

J亚群白血病的病理学观察及PCR诊断

从某肉种鸡场取疑似J亚群白血病的自然发病鸡，剖检，观察病理学特征(光镜、电镜)。随后对该场进行ALV-J抗体ELISA检测，发现感染率达28％，从中选取部分抗体阳性鸡及阴性鸡剖检，取肝进行ALV-J特异性PCR检测。结果：自然发病鸡病变明显，在肝、脾、肾、睾丸(卵巢)肺等多种组织肿大，并有大小不等的灰白色结节。镜检：病灶内及肿瘤主要由密集的髓细胞组成，在大脑、小脑坐骨神经中未见。电镜，肿块中的髓细胞样瘤细胞呈圆形、核圆形或椭圆形，体积大小不一、染色质边集，胞浆中溶酶体增多，有些电子密度较高，有些趋于溶解，肝细胞体积增大，核浓缩或淡染，胞浆中线粒体增多，肿胀，嵴减少或消失，在胞浆膜下有病毒粒子存在。PCR结果：6例抗体阳性鸡和部分自然病例PCR阳性而2只对照鸡PCR阴性。通过以上证据可知，病变明显的和抗体阳性的鸡PCR结果全部为阳性，证明鸡体内病毒与抗体共存，而抗体阴性，病毒阳性的结果未出现，说明此肉种鸡场感染的ALV-J大部分是由于水平传播造成的。     

Development and characterization of monoclonal antibodies to subgroup A avian leukosis virus

Avian leukosis virus subgroup A (ALV‐A) is a retrovirus which infects egg‐type chickens and is the main pathogen of lymphoid leukosis (LL) and myeloid leukosis (ML). In order to greatly enhance the diagnosis and treatment of clinical avian leukemia, two monoclonal antibodies (MAbs) to ALV‐A were developed by fusion between SP2/0 and spleen cells from mice immunized with expressed ALV‐A env‐gp85 protein. Using immunofluorescence assay (IFA), two MAbs reacted with ALV‐A, but not with subgroups B and J of ALV. Western blot tests showed that molecular weight of ALV‐A envelope glycoprotein recognized by MAbs was about 53 kD. Isotyping test revealed that two MAbs (A5C1 and A4C8) were IgG1 isotypes. These MAbs can be used for diagnosis and epidemiology of ALV‐A.     

蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析

为分析我国J亚群禽白血病病毒(ALV-J)蛋鸡分离株的进化关系,本研究将山东省某鸡场采集的蛋鸡病料样品接种DF-1细胞系,利用ELISA群特异性抗原检测以及亚群特异性间接免疫荧光方法,分离鉴定得到一株ALV-J,命名为SD1009,并对其进行全基因组测序,将该序列与其他ALV-J代表性病毒株序列进行比较。结果表明:SD1009分离株的gag和pol基因相对保守,与各参考病毒株的同源性为95%～99%,env基因的同源性为91%～95%;在其5'UTR中出现了连续19 bp的插入突变,与TW-3577、SDAU09C3、JS09GY6、JS09GY3蛋鸡分离株的5'UTR基本一致,提示19 bp的插入现象可能是近年来蛋鸡ALV-J的进化趋势;此外,其3'UTR的rTM和DR区出现部分缺失现象,该缺失部分也可能与ALV-J进化相关。