致仔猪痢疾沙门氏菌特异性噬菌体的分离与纯化

【目的】筛选仔猪痢疾病原菌沙门氏菌特异性噬菌体,为噬菌体制剂的研制和仔猪痢疾的生物防治提供参考。【方法】从患痢疾仔猪粪便中分离致病菌沙门氏菌,鉴定后以其为宿主菌,从生活污水中筛选、纯化出特异性噬菌体,并以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为对照,检测该噬菌体的特异性。【结果】分离到了致病菌沙门氏菌,并得到了纯化的沙门氏菌噬菌体;经检测,该噬菌体只能裂解沙门氏菌,而对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌没有作用。【结论】得到了纯化的可裂解沙门氏菌的特异性噬菌体。     

引起蝴蝶兰软腐病的病原菌菌株的分离鉴定

从蝴蝶兰软腐病病叶中,分离到菌株命名为R001,经形态观察、生理生化特性鉴定,初步确定为假单胞菌属(Pseudomonassp )的致病菌。回接试验结果表明,该菌具有较强的致病性。     

一株裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的噬菌体及其生物学特性与全基因组分析

本研究旨在分离能够高效裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体,为噬菌体生物制品的研制提供候选材料。以耐氨苄西林金黄色葡萄球菌为宿主菌,用双层平板法分离噬菌体,通过透射电子显微镜观察噬菌体形态,并对其进行生物学特性分析及全基因组测序分析。结果分离得到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,效价达2.75×10¹⁰ PFU/mL,命名为SP688。该噬菌体具有长的不收缩尾巴,属长尾噬菌体科,对7株耐氨苄西林金葡菌均有裂解效果,最佳感染复数为1,可在10 h内抑制细菌生长,在温度-20～54℃范围和pH值3～11之间活性稳定,对紫外线敏感。全基因组分析显示,SP688基因组为环状DNA,全长45 499 kb, GC含量为34.1%;预测到64个开放阅读框(ORFs),其中19个(29.69%)被预测功能。该噬菌体是一株新型裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的广谱噬菌体,可为噬菌体治疗提供材料。     

羊源链球菌的分离鉴定及其生物学特性研究

从豫西某羊场单纯性流产羊的胎儿与羊水中分离到一株球菌，将该菌人工感染试验动物，证实为致病菌。通过对该细菌的形态特征、培养特性、生化特性及致病特性等进一步检测，证明该分离菌为羊链球菌。同时对该细菌的耐药性进行了检测，结果表明，该菌对庆大霉素、卡那霉素高敏，而对青霉素产生了极强的耐药性。     

一株大肠埃希菌烈性噬菌体ΦTRI-1的分离及特性分析

通过在E.coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体,利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的E.coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸,并分别用DNaseⅠ和RNase A对总核酸进行消化,利用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ对其进行酶切;增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩,取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征,并进行SDSPAGE电泳分析,确定其蛋白条带;同时测定其他生物学特性,包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、p H、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明:分离并纯化出1株E.coli烈性噬菌体,命名为ΦTRI-1,形态特征:头部为二十面体的立体对称,直径约为60 nm,有一长尾,长约200 nm;其核酸属于双链DNA,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目(Caudovirales),长尾噬菌体科(Siphoviridae)的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示ΦTRI-1对E.coli的最佳感染复数为0.1,潜伏期约为20 min,爆发期约为60 min,裂解量约为38;ΦTRI-1在40℃时活性最高,在20~70℃活性均较强,80℃时活性丧失;其酸碱耐受力较强,在偏碱环境下活性相对更高;对紫外线有一定的耐受能力;对氯仿敏感,浓度5%的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,综合其各项生物学特性可知其潜伏期短,裂解能力强,环境适应能力强,具有很好的杀菌效果,具有开发为抗E.coli菌剂的潜力。     

一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20 μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD₆₀₀值变化测定其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1, 噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1-2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为dsDNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10-100 kD,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围（31-317 kb）;生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏菌时的潜伏期约为30 min,爆发期约为80 min,裂解量约为156;该噬菌体的裂解活性在28℃时最高,在28-50℃均较强,但在温度超过60℃后活性基本丧失;其对酸碱的耐受力较强,在pH 3-8的范围内均有较强的裂解活性,当pH值超过9后活性开始降低;其对紫外线有一定的耐受能力,经紫外线照射0-9 min后裂解活性依然较强,12 min后活性开始下降,21 min后活性基本丧失;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响。【结论】分离到了裂解性的青枯雷尔氏菌噬菌体,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科,经过测定其各项生物学特性可知其潜伏期较短,裂解能力较强,具有很好的杀菌效果,且其裂解活性持续时间长,并能在不同温度、不同酸碱性的环境内有较强的适应能力,具有开发为抗青枯雷尔氏菌菌剂的潜力。     

一株中华鳖气单胞菌噬菌体的分离及功能鉴定

中华鳖是我国主要的名优淡水养殖品种,但病害频发严重影响了鳖养殖业的可持续发展。特别是滥用抗生素造成食品安全和生态安全问题,已引起人们高度关注,寻找替代抗生素对中华鳖疾病进行预防及治疗迫在眉睫。从中华鳖养殖塘中分离得到气单胞菌噬菌体1株,经透射电子显微镜观察确定为肌尾噬菌体科噬菌体。该噬菌体为宽噬噬菌体,对中华鳖及对虾发病养殖塘中分离得到的嗜水气单胞菌及副溶血弧菌均有明显的抑制效果,该噬菌体浸染的细菌培养基能形成明显的噬菌斑。此外,经体外试验,发现该噬菌体能够有效治疗中华鳖的腐皮病。本研究分离得到的噬菌体能够有效抑制水产常见致病菌,为后续抗生素代替治疗方法的研发提供了一定理论依据。     

一株抗多杀性巴氏杆菌的白花泡桐内生真菌的分离和鉴定

采用组织分离法从药用植物白花泡桐叶中分离内生真菌,以动物病源菌多杀性巴氏杆菌C48-3、C51-3和X-73为指示菌种对分离到的7株内生真菌进行了抗菌活性筛选,采用形态特性观察及ITS-rRNA序列分析对具有抗菌活性菌株JSD-8进行鉴定。抑菌试验结果显示,JSD-8菌株对多杀性巴氏杆菌C48-3、C51-3和X-73均具有较强的抗菌活性,其抑菌活性成分值得进一步研究。通过形态特性观察及ITS-rRNA序列分析,将JSD-8鉴定为串珠状赤霉菌。     

猪传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定及防治

胸膜肺炎放线杆菌是猪传染性胸膜肺炎的致病菌,该病是一种呼吸道疾病,影响着全球养猪业的发展.本研究采用多种培养基进行接种培养,从某猪场典型传染性胸膜肺炎症状猪的肺脏和扁桃体中分离到了革兰氏阴性杆菌.通过该病原菌的培养特性、生物学特性和生化鉴定结果显示,该细菌为猪胸膜肺炎放线杆菌.同时本研究也为今后对该病的预防控制与诊断治疗奠定了有效的基础.     

广东甘蔗宿根矮化病菌的分离培养及鉴定

利用改良的SC培养基,从甘蔗蔗汁中分离培养到一种杆状细菌,根据菌落的形态特征,并结合血清学和PCR检测方法,确认所分离到的菌是甘蔗宿根矮化病的致病菌Leifsonia xyli subsp.xyli.该菌的分离培养在广东还是首次报道,这使分离高纯度的甘蔗宿根矮化病菌DNA成为可能,促进了该菌以DNA为基础的检测方法的发展,同时也为今后对该菌开展遗传多样性等研究奠定了基础.     

一株猪链球菌的分离鉴定及其防治

从福建某发病规模猪场保育猪的肺脏中分离到1株细菌,根据分离细菌的形态观察、生化试验、培养特性、PCR鉴定和动物攻毒试验,结合发病猪的临床症状和病理变化,表明该分离菌为偏向厌氧型链球菌,具有在血平板上培养良好且能致小白鼠发病死亡等特性.药敏试验表明:分离链球菌对万古霉素、亚胺培南、利奈唑胺和菌必治高度敏感,对阿莫西林、氟...     

稀有放线菌噬茵体φSUC20的分离及其生物学特性的研究

以稀有放线菌小单孢菌40027菌株为指示菌,从土壤中分离得到1株新噬菌体,命名为φSCU20.在测试的9株放线菌菌株中,仅能感染小单孢菌40027菌株和A-M-01菌株.电镜观察显示噬菌体φSCU20由多面体的头部和尾部组成.噬菌体φSCU20生物学特性研究表明,噬菌体φSCU20形成噬菌斑时培养基中适宜的Ca2+和Mg2+浓度分别为8 mmol/L和20 mmol/L;噬菌体φSCU20在储存液中适宜的pH值为8;噬菌体φScU20不耐高温,经40℃保温30 min后,其活力降低到48.65%,经60℃保温30 min后,则完全失活;噬菌体φSCU20基因组特性研究表明,该噬菌体的基因组为双链DNA,基因组大小约为65 kb.     

鸡蛋中臭鼻克雷伯氏菌的分离与鉴定

从市售鲜鸡蛋内容物中分离到一株革兰氏阴性杆菌,经形态学观察、培养特性观察及生化试验鉴定该菌为臭鼻克雷伯氏菌。药敏试验表明该菌对先锋霉素、链霉素、氯霉素和庆大霉素敏感。动物实验结果表明,该菌对小白鼠有致病力。一般情况下臭鼻克雷伯氏菌属于条件致病菌,从鸡蛋中分离出致病菌株,在公共卫生方面具有重要意义。     

烟草青枯病菌噬菌体分离及其生物学特性研究

【目的】烟草青枯病是我国南方烟区发生普遍而严重的细菌病害,目前尚未有理想的化学防治药剂,筛选青枯病菌噬菌体,为作物青枯病的防治提供噬菌体资源。【方法】从江西省吉安市烟田采集土壤样本,采用双层平板培养分离方法,分离青枯菌噬菌体,进一步比较物理和化学因素对噬菌体活性的影响。【结果】从吉安烟田土壤中分离获得6个青枯菌噬菌体,编号为PTb7-1、PTb1521、PTb1553、P1Tb1556、P2Tb1556和PTb574,其生物学特性存在差异。结果显示,多个噬菌体的最适生长温度约为35℃,致死温度为55～60℃,适宜酸碱度为pH 5～9,且对紫外光、乙醚和氯仿敏感。然而,噬菌体PTb7-1只适合于酸性环境条件下生长繁殖,噬菌体P2Tb1556对紫外光和乙醚不敏感,但对氯仿敏感。【结论】烟草土壤中具有丰富的青枯菌噬菌体资源,是筛选噬菌体的材料来源。6个青枯菌噬菌体生物学特性存在差异,噬菌体P2Tb1556对紫外光和乙醚不敏感,但对氯仿敏感。     

鲤鱼细菌性败血症的病原分离鉴定

本文报道了一种引起鲤鱼败血性传染病的致病菌，从发病鲤鱼的皮肤病灶和内脏器官均分离到该病的病原菌，用这种致病菌的纯培养物人工感染健康鲤鱼获得成功。根据其细菌形态，培养特性及生理生化性状，符合嗜水气单胞菌嗜水亚种（ＡｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａＳｕｂｓｐ）。并对该菌的药物敏感性进行了试验，从１５种抗菌药物中选出了氯霉素、链霉素、四环素、卡那霉素、庆大霉素等几种该菌特别敏感的药物。文中还针对与嗜水气单胞菌特性比较相似的一些鱼类病原菌进行了鉴别诊断的讨论。     

毛囊炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定与药敏试验

从一例人毛囊炎脓液中分离到一株细菌,经细菌形态特性观察,培养特性观察,血浆凝固酶试验鉴定为金黄色葡萄球菌.该分离菌株对小白鼠有致病性,生化试验表明VP试验阳性,发酵甘露醇,从而证明本病的病原为致病性金黄色葡萄球菌.抗生素药敏试验结果表明,该菌株对先锋霉素Ⅴ、头孢拉定、恩诺沙星、环丙沙星、氟哌酸、卡那霉素、丁胺卡那霉素、氨苄青霉素等高度敏感,对复方新诺明、乙酰螺旋霉素、罗红霉素、红霉素等不敏感.中草药药敏试验结果表明,该菌株对乌梅、黄连、诃子、黄柏等高度敏感,对其它中草药不敏感.     

一株小叶榕抗菌内生细菌的分离、筛选和鉴定

从小叶榕茎段和叶片中分离、筛选和鉴定抗菌活性内生细菌,以开发生物防治菌剂。采用组织块法和组织匀浆法分离内生菌,杯碟法和菌落生长速率法检测内生细菌的抗菌活性,通过培养特征和菌体形态观察、生理生化特性试验、16S rDNA序列测定和系统发育树的构建鉴定内生菌。结果表明,从小叶榕植物样本中分离得到的一株内生细菌QYPT-B01的发酵滤液对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和黑曲霉有较强的抑制作用,经鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),今后可进一步研究该内生菌发酵液中活性物质的组分及对植物病原菌的拮抗作用。     

兔源大肠埃希菌噬菌体分离鉴定与生物学特性研究

对浙江省某兔场腹泻病兔进行病原分离鉴定,经革兰氏染色和PCR鉴定,分离出致病性大肠埃希菌1株,命名为ZJE1株。ZJE1株对链霉素、环丙沙星敏感。以ZJE1株为宿主菌,分离纯化出噬菌体4株,分别命名为ZRP2、ZRP3、ZRP4和ZRP5,并对其生物学特性、形态与结构特征进行研究。结果显示,4株噬菌体分离株均由六角形的头部、可收缩的尾鞘和尾管组成,均属于肌尾噬菌体科。采用双层平板法测定噬菌体分离株的宿主谱、最佳感染复数、pH稳定性、热稳定性和一步生长曲线。结果显示,ZRP2、ZRP3、ZRP4和ZRP5具有宿主特异性,在37~55 ℃的条件下可保持良好活性。ZRP2、ZRP3在pH值7的条件下可保持良好活性,ZRP4、ZRP5在pH值5~7的条件下可保持良好活性。ZRP2、ZRP3、ZRP5的潜伏期为11~19 min,均能在体外裂解ZJE1株。研究成果可为应用噬菌体治疗兔大肠埃希菌病提供研究基础与数据支持。     

高絮凝活性芽孢杆菌的筛选及其絮凝特性研究

采用平板分离法从土壤中分离芽孢杆菌,以发酵液对高岭土悬液絮凝效果为指标筛选高絮凝活性菌株,并通过细菌形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析进行鉴定;同时考察发酵液加入量、Ca2+浓度和pH对絮凝效果的影响以及微生物絮凝剂在发酵液中的分布.结果表明:从土壤中分离筛选到1株具有高效絮凝活性的芽孢杆菌MBFF6,其絮凝率可达95.7％;根据细菌菌落形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析,确定该菌株为巨大芽孢杆菌;其最佳絮凝条件为加入的菌液体积分数2％,Ca2+浓度4.5 mmol· L-1,pH 7.0;该微生物絮凝剂是细菌在生长过程中产生的胞外代谢产物,存在于发酵液中.     

大西洋鲑腐皮病研究——鳃部病原菌的分离鉴定

从发生腐皮病死亡的大西洋鲑的腮部分离、培养出细菌15株。用腹腔接种法进行动物实验,15株菌中有5株菌确定为致病菌,可引起试验鱼60％-100％的死亡;对分离出的5株致病菌经过形态、染色特性和培养特性观察以及生理生化鉴定得出杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）、肺炎球菌（Streptococcus pneumoniae）、停乳链球菌（Streptococcus dysgalactiae）、温和气单胞菌Aeromonas sobria）及无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）等的结论。